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resdnaseq定量HEK293 DNA试剂盒
图3。集成的工作流解决方案，以支持过程开发和GMP环境。Resdnaseq定量HEK293 DNA试剂盒是生物制药制造过程中杂质和污染物测试的集成工作流程的一部分。使用Thermo Scientific™Pharma thema Flex™Flex 96深孔磁性粒子处理器与Applied Biosystems™PrepSeq™残留DNA样品制备套件有助于确保HEK293残留DNA的高恢复能力减少，而误差减少。Pharma Fisher Flex 96深孔磁性颗粒处理器可以一式三份处理多达24个样品，而使用手动方法一式三份的三个样本。RESDNASEQ试剂盒已在Applied Biosystems™7500快速实时PCR系统和QuantStudio™5实时PCR系统上进行了验证。使用Applied Biosystems™Accuseq™实时PCR检测软件简化了数据分析，该软件提供了准确的定量和安全性，审核和电子签名功能，以帮助启用21 CFR Part 11 Comporiance。
具有提高AAV生产率的新的T抗原负HEK293细胞系
图1Hekexpress®细胞的基因型表征。（a）使用靶向T抗原编码序列的引物（集1）的引物，跨Hekexpress®基因组的TLA序列覆盖率。绘图表明质粒的积分位点位于3染色体等效物（CHR3）上。（b）使用针对T抗原编码序列（集1）或CHR3（集3和4）的引物（集3和4）的引物（集3和4）的引物，（b）在人类CHR3中整合基因座的TLA序列覆盖率。 集合1的覆盖范围表明，与人类HG38基因组相比，Hekexpress®基因组（绿色箭头）中的550 kb缺失。 集合3和4的覆盖范围确认了综合质量PRTAK的连接。 （c）PRTAK质粒图最初集成在Hekexpress®细胞系中。 大小的T抗原序列在橙色的基因中，在深紫色和grnas（grna_beginning和grna_end）中指示。 （d）Chr3等效（红色）的图与550 kb缺失以及包含T抗原序列的PRTAK质粒的整合。 由TLA证实的质粒 - 染色体连接均以蓝色指示。 Hek，人类胚胎肾； TLA，靶向基因座放大。（b）在人类CHR3中整合基因座的TLA序列覆盖率。集合1的覆盖范围表明，与人类HG38基因组相比，Hekexpress®基因组（绿色箭头）中的550 kb缺失。集合3和4的覆盖范围确认了综合质量PRTAK的连接。（c）PRTAK质粒图最初集成在Hekexpress®细胞系中。大小的T抗原序列在橙色的基因中，在深紫色和grnas（grna_beginning和grna_end）中指示。（d）Chr3等效（红色）的图与550 kb缺失以及包含T抗原序列的PRTAK质粒的整合。由TLA证实的质粒 - 染色体连接均以蓝色指示。Hek，人类胚胎肾； TLA，靶向基因座放大。
评估柔性环境控制对HEK293细胞生长和生存能力的影响
引言HEK293细胞广泛用于基因疗法中，尤其是在病毒载体的产生中，例如腺病毒和慢病毒，这些病毒用于递送治疗基因。这些细胞因其高转染效率，快速生长速率以及支持各种病毒载体的复制能力而受到珍视。随着对基因治疗的需求继续增长，改善HEK293细胞的培养条件对于提高生产率，确保可伸缩性和维持用于临床应用中使用的病毒载体的质量至关重要。为了应对这些挑战，Infors HT多培养基振动套提供了参数灵活性和精确的环境控制，可以根据HEK293细胞培养的基因治疗的特定需求来量身定制。通过调整关键参数，例如温度，CO 2浓度，搅拌，相对湿度和轨道直径，研究人员可以创建最佳的细胞生长和生存能力的最佳条件。
海报：resDNASEQTM HEK293 和 E1A 片段长度定量分析：基因治疗和疫苗制造中 GMP 批签发的综合解决方案
目的生物制药产品必须限制宿主细胞残留 DNA 污染物，以防止对患者产生基因毒性和免疫毒性风险。现有的残留宿主细胞 DNA 监管指南要求每剂量 ≤10ng，DNA 大小为 200bp 或更低。在病毒载体生产中，衣壳化 DNA 的数量、大小和致癌序列是额外的关注点。为了满足这一需求，赛默飞世尔科技开发了两种旨在满足监管指导的互补检测方法。Applied Biosystems™ resDNASEQ™ 定量 HEK293 DNA 试剂盒可定量总残留宿主细胞 DNA，Applied Biosystems™ resDNASEQ™ E1A DNA 片段长度试剂盒可对针对 E1A 致癌基因的短（86bp）、中（200bp）和长（476bp）片段进行大小分析。
专有的HEK293 AAV生产系统可以达到超过50％的全帽，而收获时大于1E15VG/L，可实现可伸缩色谱
专有的HEK293 AAV生产系统可以达到超过50％的全帽，而收获时大于1E15VG/L，可实现高收率和纯度
HEK MEDIA和FEAD POTTFOLIOHEK MEDIA和FEAD POTTFOLIO
sartorius的HEK293介质组合包含化学定义，无血清，无动物成分和无动物的无动物溶液，设计和优化，以支持HEK293和其他人类细胞系的高密度悬架培养物。兼容的饲料补充剂，HEK FS含有高浓度的营养素，并且不含脂质，水解液和生长因子。它通过维持和扩展HEK培养物的生产能力来支持悬浮培养中病毒载体和重组蛋白的出色生产。
比较mRNA和质粒的有效性
摘要自适应CAR-T细胞疗法是一种创新的肿瘤学方法，它使用遗传修饰的T细胞作为打击癌症的治疗工具。与病毒向量相比，在体外（IVT）mRNA作为获得CAR-T淋巴细胞的载体的使用具有多个优点，例如：缺乏细胞基因组的修饰，高效率的转染效率，速度，速度，速度，速度的高效率和最终产物的潜在降低成本。使用模型DNA-肾脏（PMAXGFP）和IVT MRNK（MRNK-GFPP）（MRNK-GFPP）编造在外周血和远处培养细胞的单核细胞（人类肾脏的胚胎细胞，HEK293）的工作中研究了使用DNA-PlazMIDA模型（PMAXGFP）和IIVT MRNK（MRNK-GFPPPRERETION ENCODENTENT）， GFP）。 已经进行了最佳转染模式的选择。 表明，尽管MRNK-GFP给出了表达GFP，细胞活力的细胞数量可比数量，因此，当使用mRNA-GFP作为载体时，转染的有效性显着更高。 同时，用两种方法传递的细胞表达水平的比较表明，mRNA的使用给出了更均匀的指标，而当使用质粒载体时，表达水平的水平差异几个数量级。 比较了转染后7天内表达水平的变化。在外周血和远处培养细胞的单核细胞（人类肾脏的胚胎细胞，HEK293）的工作中研究了使用DNA-PlazMIDA模型（PMAXGFP）和IIVT MRNK（MRNK-GFPPPRERETION ENCODENTENT）， GFP）。已经进行了最佳转染模式的选择。表明，尽管MRNK-GFP给出了表达GFP，细胞活力的细胞数量可比数量，因此，当使用mRNA-GFP作为载体时，转染的有效性显着更高。同时，用两种方法传递的细胞表达水平的比较表明，mRNA的使用给出了更均匀的指标，而当使用质粒载体时，表达水平的水平差异几个数量级。比较了转染后7天内表达水平的变化。表明，GFP阳性细胞的份额随着时间的推移而降低，并且不取决于转染的方法，而对可行细胞的份额的评估表明，使用plasmida的转移会导致7天后可行细胞的份额降低至30％，而mRNA的使用实际上不会影响7天的使用情况（实际上与7天相差不同）。获得的结果表明，使用IVT mRNA可以是通过电穿孔生产CAR-T产品的更可取的工具。
转染级PEI（MW 40000）
转染级聚乙烯亚胺（PEI）是一种强大的，可信赖的且具有成本效益的试剂，被广泛认为是当前体外和体内转染的当前金标准。pei具有高密度的质子氨基基团，每三分之一原子具有氨基氮。这几乎在任何pH值下都具有高缓冲能力。因此，在内体内，PEI破坏了液泡并将遗传物质释放到细胞质中。与DNA，有效进入细胞的稳定络合以及逃脱内体的能力使PEI成为高效的转染试剂，这对于广泛的细胞系/类型兼容，包括最常用的HEK293和在粘附和悬浮培养物中生长的最常用的HEK293和CHO细胞。
CRISPR/Cas9 的转录组学和蛋白质组学分析...
摘要：Arc/Arg3.1（活性调节细胞骨架相关蛋白（ARC））是长期突触可塑性的关键调节器，并参与精神分裂症的病理生理。人类 ARC 作用的功能和机制尚不清楚，值得进一步研究。为了在体外研究 ARC 基因的功能，我们通过 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑生成了 ARC 敲除 (KO) HEK293 细胞系，并进行了 RNA 测序和非标记 LC-MS/MS 分析，以识别同源 ARC -KO HEK293 细胞中差异表达的基因和蛋白质。此外，我们使用生物发光共振能量转移 (BRET) 分析来检测 ARC 蛋白与差异表达蛋白之间的相互作用。ARC 的基因缺失会扰乱参与细胞外基质和突触膜的多个基因。发现 ARC -KO 细胞和 ARC 野生型细胞之间存在 7 种蛋白质（HSPA1A、ENO1、VCP、HMGCS1、ALDH1B1、FSCN1 和 HINT2）的差异表达。BRET 测定结果表明 ARC 与 PSD95 和 HSPA1A 相互作用。总体而言，我们发现 ARC 调节涉及细胞外基质、突触膜和热休克蛋白家族的基因的差异表达。本文介绍的 ARC -KO HEK293 细胞的转录组和蛋白质组学谱为 ARC 作用的潜在机制和涉及精神分裂症病理生理的分子通路提供了新的证据。
生长因子的表达类似于胰岛素...
可能用于生长激素缺乏症的一种可能是基因治疗，该治疗旨在通过添加或替换基因或改变其表达模式来治疗和预防疾病[1]。The growth factor similar to insulin 1 (IGF-1) is the main effector of the growth hormone (GH) and in this project was performed the construction of an expression vector, containing the poly-A region of the IGF-1 gene gene (MIGF-1), in order to increase the efficiency of expression of the MRNA [2] and, consequently of the protein of in vitro (Cells Hek293) and in alive (dwarf小鼠）。The growth factor similar to insulin 1 (IGF-1) is the main effector of the growth hormone (GH) and in this project was performed the construction of an expression vector, containing the poly-A region of the IGF-1 gene gene (MIGF-1), in order to increase the efficiency of expression of the MRNA [2] and, consequently of the protein of in vitro (Cells Hek293) and in alive (dwarf小鼠）。