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基因敲除试剂盒 v2 - NET
图 1. 多引导 sgRNA 可实现高敲除效率。为三个基因（ ALPK3 、 JAK1 、 NUAK2 ）设计了三个单引导 RNA，并分别引入（sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3）和一起引入（多引导）。平均而言，多引导 sgRNA 的表现分别比 ALPK3 、 JAK1 和 NUAK2 的单个引导 RNA 好 50.8%、32.1% 和 48.2%。通过核转染将核糖核蛋白 (RNP) 转染到 HEK293 细胞（针对 ALPK3 ）和 MCF7 细胞（针对 JAK1 和 NUAK2 ）。对每个靶标周围的区域进行 PCR 扩增、桑格测序，并使用 CRISPR 编辑推断 (ICE) 分析进行分析。敲除 (KO) 分数是指导致推定敲除（移码诱导插入/缺失和 21+ bp 片段缺失）的序列百分比。
优化基因治疗的可扩展RAAV生产
• Data from a perfusion benchtop bioreactor scale show that Ala, Asn, His, Tyr, and Trp positively correlate with capsid production, while Gln correlates negatively • Analysis of cell culture media from shake flask experiments shows that Asn and other amino acids, including several essential amino acids, deplete during AAV production • Capsid titer per cell increases when Gln is absent from media • The REBEL device enabled通过准确，精确地定量氨基酸的数据驱动的RAAV生产的生物过程开发，用于HEK293细胞中的RAAV生产，从而进一步了解过程•正在进行更多的实验，以优化灌注过程，以获得全面的Capsids
如何应对 Nab 检测的挑战
检测设置 在第二个案例研究中，我们开发了一种 CBA，使用重组 HEK-Blue™ 报告细胞来检测针对药物的 NAbs，这是一种与细胞因子结合的融合抗体。HEK-Blue™ 报告细胞系统由 HEK293 细胞组成，这些细胞经过基因改造，可表达细胞因子特异性受体和主要信号蛋白，从而获得完全活跃的信号通路（图 2. A）。细胞因子激活受体会触发下游信号传导和分泌性胚胎碱性磷酸酶 (SEAP) 报告基因的表达。细胞上清液中分泌的 SEAP 量可以用 SEAP 检测培养基（比色酶测定）测量，并且与细胞因子活性成正比，与抗细胞因子 NAbs 的浓度成反比
移动towards-a-scalable-aav-vector-vector-at-at- ...
Prasanna Srinivasan（马萨诸塞州理工学院生物医学创新中心的研究科学家，CBI）和Graziella Piras（908 Devices的战略营销高级总监）在2024年向叛军细胞培养媒体分析仪介绍了2024年的专家Webinar。叛军细胞培养基分析仪是一种在线装置，需要〜10μL样品体积，并在10分钟内测量样品。它可用于不同应用，包括生物生产的过程开发和进食优化，例如人类胚胎肾脏（HEK293）细胞的AAV产生。该设备专为生物过程实验室的端路使用而设计，不需要高级操作员专业知识。演示者提供了两个案例研究，证明了CBI团队对技术的应用。
汇总CRISPR筛选的CRISPR就绪细胞系
Number Cas9-expressing cell lines 1, ATCC: CCL-185 A549 , adherent 2, Coriell Institute GM12878 , suspension 3, ATCC: CCL-247 HCT116 , adherent 4, ATCC: CRL-1573 HEK293 , adherent 5, ATCC: CCL-2 HeLa , adherent 6, ATCC: HB-8065 Hep G2 , adherent 7, ATCC: TIB-152 Jurkat , suspension 8, ATCC: CCL-243 K562 , suspension 9, ATCC: HTB-22 MCF7 , adherent 10, ATCC: HTB-132 MDA-MB-468 , adherent 11, ATCC: CRL-5807 NCI-H358 , adherent 12, ATCC: CRL-5872 NCI-H1437，遵守13，ATCC：CRL-5887 NCI-H1693，ADHERENT 14，ATCC：CRL-2577 RKO，RKO，RKO，辅助15，ATCC：CRL-2137 SK-N-AS，sk-n-as，ASCCC：CCL-235 SW837，ATCC：ATCC：ATCC：TIB：TIB：TIB：TIB：TIB：TIB：TIB：TIB：TIB：TIB：TIB：TIB-202： U-2 OS，附着
使用 3M Harvest RC 色谱澄清剂从 HEK 洗涤剂裂解物中去除宿主细胞 DNA 的调查案例研究
腺相关病毒 (AAV) 是广泛用于递送基因疗法以治疗各种人类疾病的载体。截至 2024 年 3 月，美国 FDA（食品和药物管理局）已批准了 5 种基于 AAV 的疗法，并且正在进行 200 多项临床试验。1 生产 AAV 的方法包括在宿主细胞（例如 HEK293）中进行瞬时三重转染、基于杆状病毒的表达系统和无辅助病毒方法（例如单纯疱疹病毒 (HSV) 系统）。2 AAV 颗粒通常在细胞内，AAV 纯化过程通常始于通过洗涤剂裂解将病毒从宿主细胞中释放出来；该细胞裂解过程也经常将 hcDNA 释放到液体中。最终产品中存在 hcDNA 对经过处理的细胞构成了重大的安全隐患
海报：使用单链 DNA 模板进行高效的同源定向修复
(ssDNA) 是优于 dsDNA 的 HDR 模板。在此，我们报告了一项系统研究，比较了 HEK293 细胞中的 dsDNA HDR 模板和 IDT Ultramer® 寡核苷酸 ssDNA HDR 模板。测试了链选择和同源臂长度，以确定 HDR 在 Cas9 dsDNA 断裂点创建新的限制位点（6 个碱基插入）的效率。使用较长 ssDNA HDR 模板的初步实验表明，与较短 ssDNA 模板具有类似的优势和行为。具有不对称同源臂的模板的 HDR 插入。使用具有不对称同源臂的 HDR 模板导致 EcoRI 插入率与对称同源臂的插入率相似。使用靶向链模板获得了高 HDR 效率，其中
生物混合 3D 打印组织传感器平台，用于无线、实时和连续监测药物引起的心脏毒性
药物引起的心脏毒性被视为药物开发早期阶段的一大障碍。约有 30% 的潜在药物在临床试验中因安全问题被拒绝[1]，据报道，在总共 1,430 种药物中，有 793 种有心血管副作用。[2] 以蒽环类抗癌药物阿霉素 (DOX) 为例，尽管根据长期使用积累的临床数据制定了详尽的药物剂量方案，但仍有 8–26% 的患者出现心脏毒性。[3] 虽然有一些临床前心脏毒性测试，包括基于兔浦肯野细胞 [4] 和过表达人类 ether-a-go-go 相关基因的 HEK293 细胞的单细胞测定[5]，但非肌细胞单细胞不能完全预测化合物的心脏毒性潜力。[6,7]
生成杂种 - 肾细胞 - 线 - 使用-Crispr- ...
使用CRISPR/CAS9系统进行基因编辑是一种非常有效的方法，用于在永生细胞系的基因组DNA中产生突变。此过程从一个直接的克隆步骤开始，以生成编码CAS9酶的单个质粒以及合成指导RNA（SGRNA），该质子（SGRNA）被选为靶向基因组中的特定位点。该质粒单独将其转染到细胞中，以通过非同源末端连接途径在所需的基因座上产生随机的插入缺失等位基因（“ indels”），或与同源性的有向修复模板寡核核苷酸一起产生特定点突变。在这里，我们描述了在IMCD3和HEK293细胞中执行基因编辑的程序，并随后分离带有感兴趣的突变的克隆细胞系。
病毒载体制造中宿主细胞蛋白的分析
符合安全要求。FDA出版了2022年的指南，该指南为开发人类基因疗法（GT）产品提供建议，以影响影响成人和儿科患者的神经退行性疾病。建议基于最先进的制造业，剩余的HCP水平与合理达到的水平一样低。此外，在单克隆抗体（MAB）生物处理过程中进行了许多HCP监测以及评估相关风险的工作。病毒矢量生产为mAb提供了其他挑战。3关键因素包括向量类型，HEK293表达系统本身以及上游和下游过程的变化之间的差异。2 HCP可以通过掺入，封装或共纯化与病毒载体相互作用。在重组病毒载体产生的情况下，也应考虑辅助病毒或辅助病毒成分。通过早期测量HCP含量，可以大大降低过程开发成本。