与宫颈癌细胞增殖有关(Wu and Yang,2018;Lv and Guan,2018)。值得注意的是,与游离 CDDP 相比,CD59 抗体偶联制剂的细胞存活率明显降低。miR-1284 和 CDDP 的结合可对宫颈癌细胞产生协同抗癌作用。我们预计 miR-1284 可能会增加 HeLa 癌细胞的化学敏感性,从而导致增强的细胞杀伤效果。必须注意的是,CLSM 和流式细胞仪分析中观察到 CD/LP-miCDDP 的细胞存活率明显低于 LP-miCDDP,这是由于其细胞内化率较高。观察到 CDDP、LP-miCDDP 和 CD/LP-miCDDP 的 IC50 值分别为 12.4 µg/ml、7.23 µg/ml 和 3.12 µg/ml,与
用叶酸结合壳聚糖功能化的纳米复合材料 (Fe3O4/GO) 将 DOX 的负载效率提高到 0.98 mg mg-1,同时仍保持 10.5 emu g-1 的高磁饱和度。21 研究还表明,由于氢键的减弱和壳聚糖的降解,复合材料能够有效促进 pH 触发药物的释放。在另一项研究中,Karimi 和 Namazi 成功制造并利用了一种多功能 Fe3O4@PEG 涂层树枝状聚合物,并用 GO 修饰以有效地递送 DOX。7 根据体外结果,据报道该纳米复合材料表现出高细胞摄取百分比,并表现出优异的诱导乳腺癌细胞 (MCF-17) 凋亡的能力,同时保持与正常细胞系 (MCF-10A) 的生物相容性。最近,我们还成功合成并利用羧酸盐功能化的 Fe3O4 纳米粒子来有效负载和释放 DOX,用于对 HeLa(宫颈癌)细胞系进行化疗。8 根据研究,我们证明不同的羧酸盐部分在决定 Fe3O4 纳米粒子的 DOX 负载和 pH 控制释放能力方面起着至关重要的作用。结果表明,用柠檬酸功能化的纳米粒子在诱导 HeLa 细胞死亡方面表现出最高的效率,这是由于 DOX 和 Fe3O4 纳米粒子表面的柠檬酸残基之间的强相互作用。此外,载药 Fe3O4 纳米粒子与可选择性识别癌细胞靶标的特定配体的结合也已被广泛研究作为靶向递送载体。在各种类型的配体中,叶酸 (FA) 受到了广泛关注,因为已知叶酸受体在多种癌细胞(如脑、皮肤、乳腺、肾脏和肺部)中选择性过表达。21此外,还因为其分子量小且结合力高(K d = 1 10 10 M)。22,23 因此,引导磁场的外部靶向策略和 FA 结合相结合有望增强 Fe3O4 基纳米载体将负载药物精确递送至靶细胞的能力。例如,Yang 等人成功地将 FA 结合到负载有聚乙二醇 PEG 和聚(3-己内酯)PCL 的二嵌段共聚物的 Fe3O4 纳米粒子上,以有效递送抗癌药物。 24 根据结果,FA 附着在聚合物胶束上,负责药物载体的特定识别,以达到癌细胞靶标,这由高细胞摄取量表明。此外,据报道,FA 共轭铁修饰的多壁碳纳米管也表现出作为靶向 DOX 纳米载体诱导 HeLa 细胞凋亡的优异能力。25 在这里,据报道,纳米载体具有较高的 DOX 负载能力 (32 mg mg 1 ) 和由外部近红外辐射触发的延长释放能力。然而,目前大多数 FA 结合都涉及使用大而笨重的锚定分子,例如聚合物或碳基材料,或除 DOX 之外的单独部分。因此,这些用于 FA 和药物的多个结合和锚定分子的存在会限制最佳药物负载能力并降低 Fe 3 O 4 纳米粒子的磁化强度。因此,本研究报告了利用双功能天冬氨酸
图4:将HELA细胞接种在苯酯96孔微孔板(15,000个细胞/孔)中,并在37°C下孵育48H,5%CO 2孵育。活细胞用现象641线粒体染色(0.5 µm)在37°C下染色30分钟,然后固定并透化。接下来,将细胞与细胞绘画混合物孵育,其中包括现象512核酸染色(3 µm),现象Hoechst 33342核染色(5 µg/mL),势氟568-腓罗(33 nm),33 nm),现象488 -contovue fluor 488 -contavue fluor 488 -contavue a(contavue fluor a fluor fulor a fluor a fluor)a(100 µgla)an(100 µL)5和m。最小在RT。在Operetta CLS高气结分析系统上获取图像。
方案 1:将富含 C 的 ssDNA 与 CD 结合并在中性 pH 下形成水凝胶以封装 Dox 的方案。通过将溶液的 pH 从碱性变为中性,实现了 CD-DNA 混合水凝胶的可视溶胶-凝胶转变。研究了药物从水凝胶中体外时间和 pH 依赖性释放曲线。虽然发现水凝胶在正常生理 pH 下可稳定一个月,但在与肿瘤微环境相关的酸性 pH 下,药物分子在 10-11 天内完全溶解并持续释放。对 HeLa 细胞进行的细胞活力测定表明,由于酸性 pH 有利于水凝胶破裂,在载有 Dox 的混合水凝胶存在下,它们被有效缓慢杀死。
补充图5。低温促进混合DS/HT121- 6中的IM折叠。在(a)IC缓冲液和(b)从HELA细胞中获得的杂种-DS/HT121-6的1d 1 H NMR光谱的 Imino区域作为温度的函数(指示)。红色和灰色框分别突出显示针对Im-和dsDNA分析的Imino信号。Note that while the signal intensity pertinent to iM (highlighted in the red box) observed at 4 °C was essentially reduced to zero when the temperature was increased to 37 °C, the alterations in the NMR signal intensities (integral intensities – considering temperature- dependent line broadening and the inherently low signal-to-noise ratio in the in-cell NMR spectra) corresponding to the dsDNA segment (gray box) were最小。
Number Cas9-expressing cell lines 1, ATCC: CCL-185 A549 , adherent 2, Coriell Institute GM12878 , suspension 3, ATCC: CCL-247 HCT116 , adherent 4, ATCC: CRL-1573 HEK293 , adherent 5, ATCC: CCL-2 HeLa , adherent 6, ATCC: HB-8065 Hep G2 , adherent 7, ATCC: TIB-152 Jurkat , suspension 8, ATCC: CCL-243 K562 , suspension 9, ATCC: HTB-22 MCF7 , adherent 10, ATCC: HTB-132 MDA-MB-468 , adherent 11, ATCC: CRL-5807 NCI-H358 , adherent 12, ATCC: CRL-5872 NCI-H1437,遵守13,ATCC:CRL-5887 NCI-H1693,ADHERENT 14,ATCC:CRL-2577 RKO,RKO,RKO,辅助15,ATCC:CRL-2137 SK-N-AS,sk-n-as,ASCCC:CCL-235 SW837,ATCC:ATCC:ATCC:TIB:TIB:TIB:TIB:TIB:TIB:TIB:TIB:TIB:TIB:TIB:TIB-202: U-2 OS,附着
图 4:(a) 高压冷冻的 HeLa 细胞 FIB-SEM 体积切片。样品由 EMBL 的 Anna Steyer 和 Yannick Schwab 提供。(b) 传统机器学习的分割结果。使用在预训练的 VGG16 模型中应用第一个卷积层获得的特征来训练随机森林算法。该模型使用 ZEISS ZEN 软件中的 AI 工具包进行训练。(c) 该图描绘了与 (b) 相同的结果,不同之处在于使用条件随机场清理了输出以去除孤立像素。虽然分割能够检测到来自线粒体的大多数像素,但无法识别这些物体中的大量像素,因此很难将它们与背景完全区分开来。此外,大量非线粒体像素被错误地标记为线粒体。
我们提出了一种具有极化多重照明的单次定量差异相比(DPC)方法。在我们系统的照明模块中,可编程的LED阵列分为四个象限,并覆盖了四个不同极化角度的偏振膜。我们在成像模块中的像素之前使用偏振摄像头。通过将自定义LED阵列上的偏振膜与相机中的极化器匹配,可以从单件采集图像中计算出两组不对称的照明采集图像。与相传函数结合使用,我们可以计算样品的定量相。我们介绍了设计,实现和实验图像数据,证明了我们方法获得相位分辨率目标的定量相位图像以及HELA细胞的能力。
摘要我们已经开发了一种无细胞的系统,用于研究哺乳动物细胞中mRNA的合成。该系统由透析和浓缩的全细胞提取物组成,从HeLa细胞,小分子和转录所需的辅助因子和外源添加DNA组成。RNA聚合酶II的准确介绍完全取决于添加含有启动子的真核DNA。在最佳DNA和提取浓度下,易于检测到来自腺病毒血清型2后期启动子的转录起始,并且可以使用超过4000个核苷酸的特定转录本。在体外合成的RNA包含与体内transkipt相同的5'限制RNase T1 Undeclepleotide。RNA合成还可以在早期和中间腺病毒启动子位点准确地启动。
批次 数量 描述 2865325 10 kU SuperScript IV RT 200 U/µL 2830740 4 kU RNase 抑制剂 40 U/µL 2805294 0.45 kU E.coli RNase H 2 u/µL 2789387 0.25 mL 10mM dNTP 混合物 2810212 0.02 mL 总 HeLa RNA 10 ng/µL 2794806 0.025 mL 反义对照引物,10µM 2789394 0.25 mL 随机六聚体,50 ng/µL 2789395 0.05 mL Oligo (dT)20,50 µM 2839396 0.025 mL 正向对照引物, 10 µM 2789374 1 mL 5X SuperScript™ IV RT 缓冲液 2821527 0.25 mL 0.1 M DTT 2825122 1.2 mL DEPC 处理水