许多蛋白质家族由多种高度同源蛋白组成,无论它们是由不同基因编码还是来自相同基因组位置的编码。某些同工型的优势与各种病理状况(例如癌症)有关。研究中蛋白质同工型的检测和相对定量通常是通过免疫印迹,免疫组织化学或免疫荧光来完成的,其中使用针对特定家族成员的同工型特异性表位的抗体。但是,同工型特异性抗体并非总是可用的,因此无法破译同工型特异性蛋白表达模式。在这里,我们描述了多功能11氨基酸标签的插入到感兴趣蛋白质的基因组位置中。此标签是开发的,由Promega(美国威斯康星州Fitchburg)发行。本协议描述了高度同源蛋白的精确蛋白质表达分析,通过hibit标签的表达,当缺失特定抗体时,可以实现蛋白质表达定量。可以通过传统方法(例如蛋白质印迹或免疫荧光)以及在荧光素酶二元报道器系统中分析蛋白质表达,从而可以使用板读取器进行可靠且快速的相对表达定量。
新的抗Hibitmagne®珠子为您提供了快速,方便的程序,以使用IP和CO-IP方法从哺乳动物,酵母和细菌细胞中富集hibit标记的蛋白质和相关蛋白质复合物。因此,该产品为蛋白质生物学和基于质量的蛋白质组学研究打开了更多的可能性。高亲和力抗体可确保具有最小非特异性背景的特定标签特异性结合。Drkbit肽可用于轻轻地从抗Hibit magne珠子中洗脱hibit标记的蛋白质。