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CRISPR耗竭可以对复杂样品中病毒和细菌种群的敏感鉴定。
图4：将HELA细胞接种在苯酯96孔微孔板（15,000个细胞/孔）中，并在37°C下孵育48H，5％CO 2孵育。活细胞用现象641线粒体染色（0.5 µm）在37°C下染色30分钟，然后固定并透化。接下来，将细胞与细胞绘画混合物孵育，其中包括现象512核酸染色（3 µm），现象Hoechst 33342核染色（5 µg/mL），势氟568-腓罗（33 nm），33 nm），现象488 -contovue fluor 488 -contavue fluor 488 -contavue a（contavue fluor a fluor fulor a fluor a fluor）a（100 µgla）an（100 µL）5和m。最小在RT。在Operetta CLS高气结分析系统上获取图像。
补充信息
胎牛血清（FBS）Sigma Aldrich F74524 Hoechst 33258 Sigma Aldrich 861405人类细胞因子阵列R＆D Systems ary005b L-谷氨酰胺Sigma Sigma aldrich aldrich aldrich aldrich g7513 lio bio-techne I bio-techne i bio-techne 3401020202020202020202 1x 1x 1x 1x 1x 1x 1x 1x 1x1x 1x 1x 1x 1x 1x 1x 1x。 Noggin Bio-Techne 3344-NG-050 Normal horse serum (NHS) Vector Laboratories S-2000 Normal goat serum (NGS) Dako X0907 Neurobasal medium ThermoFisher Scientific A1371201 Paraformaldehyde (PFA) ThermoFisher Scientific P/0840/53 Phosphate buffered saline Sigma Aldrich P4417-100TAB Poly-li-Ernithine Merck P3655-10MG SB431542 Miltenyi Biotech 130-106-275 SHH-C24II BIO-TECHNE BRIO-TECHNE 1845-SH-SH-025 SH-025 ALGINATE（Provona Slm 100）
EU/英国申请表 - 2025.02.11
在细胞外基质 +化学定义的培养基中，将患者肿瘤组织样品培养为肿瘤器官。PDO被鉴定为Hoechst阳性细胞簇，使用荧光活力染色单独确定每个PDO的活细胞的数量。药物筛查用每种化合物3剂进行3剂，并计算出TO-PRO-3活细胞测量曲线下的反向面积以量化响应。tempus XT和整个转录组测定法用于在器官和配对的患者肿瘤上执行NGS（如果有）。通过我们的标准管道处理所得数据，以识别可靶向突变，新抗原，CNV和融合。
● 在具有多种肿瘤类型的整个 PDO 队列中，我们观察到了对 SOC 疗法的一系列反应，这为更好地理解提供了一个平台
将患者肿瘤组织样本在细胞外基质 + 化学确定培养基中培养成肿瘤类器官。PDO 被鉴定为 Hoechst 阳性细胞簇，并使用荧光活力染色分别确定每个 PDO 的活细胞和死细胞数量。对每种化合物使用 3 个剂量进行药物筛选，并计算 TO-PRO-3 活细胞测量值的曲线下面积倒数以量化反应。使用 Tempus xT 和全转录组分析对类器官和配对患者肿瘤（如有）进行 NGS。通过我们的标准流程处理所得数据，以识别可靶向的突变、新抗原、CNV 和融合。
联合使用 Wnt 抑制剂和查尔酮复合物靶向肺癌细胞中的上皮-间质转化 (EMT) 通路
苯并呋喃取代的查耳酮衍生物；复合物 1 [(4) ‐ ((1E) ‐ 3 ‐ (1) ‐ 苯并呋喃 ‐ 2 ‐ 基) ‐ 3 ‐ 氧代丙 ‐ 1 ‐ 烯 ‐ 1 ‐ 基] ‐ 2 甲氧基苯基氯乙酸酯) 和复合物 2 [3 ‐ [(1E) ‐ 3 ‐ (1 ‐ 苯并呋喃 ‐ 2 ‐ 基) ‐ 3 ‐ 氧代丙 ‐ 1 ‐ 烯 ‐ 1 ‐ 基)] 苯基氯乙酸酯) 被合成 16,17 并进行了表征 (Alioglu 等人，已提交)。在二甲基亚砜 (DMSO) 中制备查耳酮复合物 (复合物 1 和 2) (50 mM) 和氯硝柳胺 (20 mM) 的储备浓度。复合物浓缩液中的最终 DMSO 浓度确定为 0.2% v/v，文献报道该浓度无毒。18 将复合物的储备液分装并储存在 −20°C 下。Niclosamide 购自 Sigma（目录号：N3510；Sigma-Aldrich）。碘化丙啶 (PI) 购自市售（Sigma-Aldrich）。Hoechst 染料 33342 来自 Enzo Life Sciences。
优化的 HDR 介导的 K-荧光蛋白敲入...
图 2：在 K-562 细胞中通过电穿孔优化 HDR 介导的报告基因敲入。A. LMNA -EGFP 供体质粒单独电穿孔，浓度增加，显示非特异性 EGFP 表达量较低。Cas9 蛋白：crRNA：tracrRNA 电穿孔，LMNA -EGFP 供体质粒浓度增加，显示 EGFP 表达相关增加。B. 放大倍数增加后，HDR 介导的敲入样本中 EGFP 表达的定位与 LMNA 的预期一致，位于细胞核中，并与 Hoechst 染色共定位。C. HDR 介导的敲入细胞群的流式细胞术分析显示，随着 DNA 供体质粒数量的增加，EGFP 表达增加高达 32%。单独 DNA 供体质粒对照的相应分析显示所有剂量的 EGFP 表达均低于 0.5%（未显示数据）。
NeuroDisk：一种自动化神经成像遗传学中连续询问驱动的发现的AI方法
图4。刺激记录和使用壳测量。（a）带有封装器官的3D壳MEA的图像。在孵化器内部保留的同时，刺激和记录了类器官。（b）3D-Shell MEA的示意图，并标有北，东和西的三个传单。（c）图显示了通过所有三个电极将20 µA的刺激电流发送到类器官时，显示了记录的电压。（d）所有三个电极的记录电压轮廓图显示从类器官收集的信号。与（c）中所示的刺激相对应的峰将从此轮廓中删除。（e）八周龄的类器官的代表性最大强度Z练习图显示了核（I）和绿色，紫色，紫色和黄色（ii）中所示的核（Hoechst），神经元干细胞（SOX2）和轴突（NF-H）的存在。染色说明了器官内的细胞同质性。在20倍拍摄图像。比例尺为100 µm。
用壳测量
图4。刺激记录和使用壳测量。（a）带有封装器官的3D壳MEA的图像。在孵化器内部保留的同时，刺激和记录了类器官。（b）3D-Shell MEA的示意图，并标有北，东和西的三个传单。（c）图显示了通过所有三个电极将20 µA的刺激电流发送到类器官时，显示了记录的电压。（d）所有三个电极的记录电压轮廓图显示从类器官收集的信号。与（c）中所示的刺激相对应的峰将从此轮廓中删除。（e）八周龄的类器官的代表性最大强度Z练习图显示了核（I）和绿色，紫色，紫色和黄色（ii）中所示的核（Hoechst），神经元干细胞（SOX2）和轴突（NF-H）的存在。染色说明了器官内的细胞同质性。在20倍拍摄图像。比例尺为100 µm。
专注于处理风险和缓解措施
a Department of Women ' s and Children ' s Health, Uppsala University, Akademiska sjukhuset, SE-751 85 Uppsala, Sweden b Faculty of Pharmacy and Food Science, University of Barcelona, Spain c Late Stage Formulation Sciences, BioPharmaceuticals Development, Dosage Form Design & Development, AstraZeneca, Granta Park, Cambridge, UK d MEMO Research, Division of分子和临床医学，邓迪大学医学院，尼尼韦尔医院，英国邓迪，瑞典邓迪，瑞典，斯德哥尔摩市崛起研究所，后期阶段配方科学，生物制药，生物制药形式的开发，剂型形式设计与开发，阿斯特拉zeneca，germmune Way，Genimmune Way，Genimmune Way，Genimmune Way，Genimmune Way，geraithersburg，geraithersburg，geraithersburg，gertapherburg，Md 2088888，美国Gironcacy，美国GEAMER，USACENCACY。医院巴塞罗那，西班牙h sanofinfentis deutschland GmbH，生物制药产品开发与制造业，工业派克Hoechst，K703。br€uningstr。50，65926 Frankfurt Am Am Main，德国I食品系，隆德大学，P.O。 框124，22100隆德，瑞典50，65926 Frankfurt Am Am Main，德国I食品系，隆德大学，P.O。框124，22100隆德，瑞典
引用：Sha J，Liu W，Wu J，Yanping W，Li X，Ren H，Pang Z，Zhang W，Lee CS，WangP。
Figure 5 (Color online) (a) CLSM images of HepG-2 cells after incubation with TBPCP and TBCP (5 μM) under hypoxic conditions and two-photon irradiation (940 nm, 50 mW, 2 min) followed by staining with C11-BODIPY 581/591, Hoechst 33342, and Fer-1.对于C11-Bodipy 581/591：λEX= 561 nm; λEM= 570–620 nm。用于氧化的C11-Bodipy 581/591，λEX= 488 nm，λem= 500–530 nm。比例尺：10μm。（b）在深色和白光照射下用TBPCP和TBCP（5μM）处理的HEPG-2细胞的GSH水平（400-700 nm，200 mW/cm 2，10 min）。（c）在不同TBPCP处理的条件下，HEPG-2细胞中GPX4表达和GPX4的相对表达的蛋白质印迹分析。（d）在不同TBCP处理的条件下，HEPG-2细胞中GPX4表达和GPX4的相对表达的蛋白质印迹分析。误差线代表平均值±SD（每组n = 3）， * p <0.05，** p <0.01，*** p <0.001。（e）TBPCP和TBCP处理的线粒体和核形态的生物-TEM（5μM）HEPG-2细胞在不同的处理后，比例尺：500 nm：500 nm。