图 1 hiPSC-NSC 的生成和核型分析。A、在 Matrigel 上生长的 R-iPSC4-hiPSC 菌落。B、用胶原酶 IV 消化 hiPSC 后形成的胚状体 (EB)。C、用 TGF β 抑制剂 SB421543 和 BMP 抑制剂 dorsomorphin 处理的 EB 接种到聚-l-鸟氨酸和层粘连蛋白包被的板上后 7-10 天出现玫瑰花结状结构。D、通过解离玫瑰花结状结构并接种到聚-l-鸟氨酸和层粘连蛋白包被的板上获得神经外胚层细胞。E、F、这些细胞表达 NSC 标记物 Nestin (E) 并在分化第 30 天分化为表达微管相关蛋白 2 (MAP2) 的神经元 (F)。细胞核用 Hoechst 33342 (蓝色) 染色。比例尺:100 µ m。G、H、基于全基因组 SNP 阵列的 hiPSC-NSC 核型分析。针对位于该区域的阵列上所有 SNP,绘制了每条染色体的 B 等位基因频率(上图)和 log 2 R 比率(下图)。每个点都是一个 SNP。虽然第 10 代(p10)的细胞没有显示任何主要核型异常(G),但 p16 的 hiPSC-NSC 表现出 1 号染色体整个长臂的重复,dup(1)q(H)
在这里,我们报告了与配方[Cu(bipy)(2h4mebz)] No 3(1),[Cu(phen)(2h4mebz)] no 3(2H4Mebz)] No 3(2),[Cu(bipy)(bipy)(bipy)(2h4ocbz)no 3(2h4ocbz)no 3(2h4ocbz] no 3(3(2h4ocbz))(2H4MEBZ)和[cu(2H4MEBZ)(2H4MEBZ)](2H4MEBZ)和[cu(2H4MEBZ)和[cu(2H4MEBZ)(2H4MEBZ)] NO 3(cu(2h4mebz))NO 3(cu(phen)和[cu(2h cu(2H),配体是2-羟基-4-甲氧基苯甲酮(2H4mebz),2-羟基-4-(章鱼)苯甲酮(2H4OCBZ),2,2' - 二吡啶胺(bipy)(bipy)和1,10-苯甲状腺纤维(eN)。所有化合物都呈现两个二齿配体,一种单位离子2-羟基苯二苯甲酮,形成一个六元的螯合物环和二二聚二聚体环,形成了五元的螯合物环,以及一个位于轴向位置的硝酸盐,以及一个位于轴向位置,如轴向位置所示,由复杂的晶体结构2。复合/DNA相互作用研究,揭示了它们之间的中等作用。此外,复合物1 - 4与BSA(牛血清白蛋白)中等相互作用。对HCT116(人类结肠癌)和HEPG2(人肝细胞癌)癌细胞的化合物进行了评估,以及对非癌细胞的MRC-5(人肺成纤维细胞)。细胞毒性的结果表明,复合物2和4比1和3的细胞毒性更高,表明PEN配体的存在可能在增加化合物的生物学作用中起重要作用。
(◀图 4) B. 与 pHrodo 染料结合的双环和转铁蛋白与细胞一起孵育 18 小时,并在 Incucyte 上进行分析。C. 和 D. 将 HT1080 细胞接种过夜。将细胞在无血清培养基中孵育 60 分钟,温度为 37 °C。对于 D. 细胞在 37 °C 下用载体 (0.1% DMSO) 或 Dyngo 4a (30 µM) 预处理 30 分钟。然后将细胞与结合的双环 (1.0 µM;红色) 在 4 °C 下孵育 1 小时。然后将细胞转移到 37 °C 下 1.5 分钟以进行内吞。洗涤后,在 -20 °C 下用 80% 丙酮固定和透化细胞 10 分钟。然后将细胞在 10% 山羊血清中封闭 1 小时,并用一抗 (指示) 标记。然后用二抗(绿色)和 Hoechst(蓝色)清洗细胞并标记。三重培养孔的代表性图像。放大 40 倍。(▲ 图 5)A. 和 B. 新鲜分离的人类近端曲小管细胞接种在 transwell 插入物中,Bicycles 测试浓度为 10μM。通过质谱法测量极化细胞的跨上皮吸收和分泌通量。结果标准化为基线 FITC 标记的转铁蛋白摄取(AB 和 BA)。测量单层完整性(80-120 Ω.cm 2 跨上皮电阻)作为质量控制。
摘要:描述的是用于活细胞的配体指导的催化剂,生物正交化学的光催化激活。催化基是通过束缚的配体定位于DNA或微管蛋白的,红光(660 nm)光催化用于引发一系列DHTZ氧化,分子内二二二二二二二二二二二二氧化物,以及消除释放现场化合物的消除。Silarhodamine(SiR)染料,更常用地用作生物荧光团,用作具有高细胞相容性并产生最小单线氧的光催化剂。Hoechst染料(siR-H)和紫杉醇(siR-T)的商业上可用的共轭物分别用于将SIR定位于细胞核和微管蛋白。计算用于帮助设计新的氧化还原激活的光电,以释放苯酚或N-CA4,一种微管二动剂。在模型研究中,仅使用2 µm的SIR和40 µM光地摄影,在5分钟内完成了分离。原位光谱研究支持一种涉及快速分子内多尔斯 - 阿尔德反应的机制和确定消除步骤的速率。在细胞研究中,这种分离过程在光(25 nm)和siR-H染料(500 nm)的低浓度下成功。分解N-CA4会导致微管解聚和伴随细胞区域的降低。对照研究表明,H-H爵士在细胞内而不是在细胞外环境中催化脉冲。使用Sir-T,相同的染料作为光催化剂和荧光报告剂进行微管蛋白去聚合,并且在共聚焦显微镜下,由于活细胞中光催化脉冲,可以实时可视化微管蛋白去聚合。
补充图2。nf-k b调节肠道干细胞的增殖。(a)与野生型(ESG TS /+)相比,祖细胞特异性NF-K B耗竭(ESG TS /REL RNAI)10天后蝇的后肠。DNA用Hoechst(青色)标记的DNA,用ESG(黄色)标记的祖细胞,由ProS(Magenta)标记的肠内分泌细胞和由Armadillo(Magenta)标记的细胞边界。(b)与野生型相比,祖细胞特异性耗竭30天后蝇的后肠中肠。(c)野生型和祖细胞特异性的中肠中的pH3+有丝分裂细胞在10和30天后枯竭。使用ANOVA进行了显着性,然后进行成对Tukey测试。(d)pH3+细胞在IKK G同源物kenny(键)(e)在祖细胞特异性重击中的30天老蝇中每个核ESG+祖细胞的祖细胞特异性敲低后的pH3+细胞。(f)来自ESG TS,UAS-CFP,SU(H)-GFP的图像在祖细胞特异性耗竭30天后苍蝇。用ESG(黄色)和Notch阳性肠肠细胞前体标记的祖细胞(h)(Magenta)。(g)祖细胞池中祖细胞库内的su(h)+肠球前体的比例在特定于祖细胞的NF K B敲低时。使用学生的t检验发现了D,E和G的意义。A和B的比例尺为25 µm。A和B的比例尺为25 µm。
分离染色体的流式细胞术是细胞遗传学的一种新方法,可快速测量单个中期染色体。在这种方法中,用适当的荧光染料染色的水悬浮液中的染色体被限制在激发染料的窄激光束中高速流动。发射的荧光通过光度法测量,累积的数据形成染色体荧光的频率分布。该频率分布的峰值归因于单个染色体或具有相似荧光的染色体组;峰值平均值与染色体荧光成正比,峰值面积与染色体出现频率成正比。因此,频率分布可作为核型(1、2)。此外,流式分选可根据染色体的染色特性分离染色体(3、4),这与传统的中期染色体纯化方法不同,后者依赖于速度或等密度沉降、区域离心或选择性过滤(5)。纯化单个中期染色体很重要,原因如下。富集或纯染色体部分已进行生化分析,以提供有关 DNA 或蛋白质结构的信息(6),将遗传信息转移到整个细胞(7-9),或通过体外杂交绘制基因图谱(10)。但一般来说,传统技术无法提供足够纯度的染色体,无法进行高分辨率生物或生化研究。通过基于溴化乙锭荧光的流式分选,我们以 90% 的纯度将雄性鹿 Muntiocus muntjak (2n = 7) (4) 的每个染色体和中国仓鼠 M3-1 细胞系的 14 种染色体类型分离成 8 个染色体组 (1, 3)。在我们之前对溴化乙锭染色的人类染色体的研究中,我们仅从雄性 (2n = 46) 的 24 种染色体类型中分辨出 8 个染色体组 (2, 3)。在本研究中,使用 DNA 荧光染料 33258 Hoechst 和改进的仪器,
Trumpler GmbH & Co. KG Chemische Fabrik。申请号:1782106 :: 商标 Elite 商标。2. Cassingham, DM、Roentgen, G.、Tzikas, A.、WO 2019/158341 A1 – 同时鞣制和染色含胶原纤维材料的方法。3. Cassingham, DM、Fekete, L.、Nicollet, M.、Graciet, J.-C.、Roentgen, G.、WO 2022/136403 A1 – 使用反应性蛋白交联剂交联含蛋白基质以及鞣制和染色皮革的方法。 4. Avicuero ® - Huntsman Textile Effects (Switzerland) GmbH 的注册商标,AVICUERO 商标申请 Huntsman Advanced Materials (Switzerland) GMBH - 序列号 97099875 :: Justia 商标。 5. Heyna, J., Schumacher, W., DE 965902,“Verfahren zum Fixieren wasserloeslicher Organischer Verbindungen auf Unterlagen faseriger Struktur”,1957-09-19 发布,分配给 Hoechst AG。 6. Siegel, E.,“反应基团”。见 K. Venkataraman(编辑)。合成染料化学。卷。六、1972 年,纽约;伦敦:学术出版社。 p。 36. 7. Rattee, ID,《活性染料 - 染料固定和染料-纤维键水解的物理化学方面》,收录于 K. Venkataraman (ed.)《合成染料化学》,第 VIII 卷,1978 年,纽约、伦敦:Academic Press,第 2 页及后续页,ISBN 0-12-717008-1 8. Hunger, K.,《3. 主要应用的染料类别》,收录于《工业染料:化学、特性、应用》。2003 年,Weinheim:WILEY-VCH Verlag。第 113、117-118 页。ISBN 978-3-662-01950-4。 9. 通过对脱灰牛皮和 DyTan ® 鞣制皮的氨基酸谱进行比较得出结论。 10. ISO 20136:2020 / IULTCS/IUC 37 – 皮革 - 测定
图4。AFUPMV-1M感染的A. fumigatus的蛋白质组改变了。在生理和氧化应激条件下,使用质谱法(MS)表征了Fumigatus AF293和环己酰亚胺病毒(VC)的蛋白质含量。a。通过其存在/不存在鉴定蛋白的分布。只有每组3个三分之一(n = 3)中出现的蛋白质出现在最终列表中。b。通过方差分析(ANOVA)的未校正值<0.05(ANOVA),总共有117种蛋白质在菌株和生长条件下具有差异性丰富。c。在对照条件下以及通过QRT-PCR分析的对照条件下以及氧化挑战(5 mM H 2 O 2,4H)下,AF293与VC和RI的相对mRNA水平。分析的基因:BRF1,pol III transcranced Genes:U6 snRNA(U6),tRNA-arg(arg),tRNA-phe(phe)和tRNA-phe(phe)和tRNA-tyr(tyr),pol i-pol i-transciped procyclin(proc)。数据是平均 + s.e.m.,n = 3。** = 0.0085,*** = 0.0002,**** <0.0001。d。通过QRT-PCR分析,AF293与VC和RI的相对MIS6水平相对于VC和RI(5 mM H 2 O 2,4H)。数据是平均 + s.e.m,n = 3。e。 5天后,在使用10 mM羟基脲的固体GMM培养基上抑制生长。gmm用作对照。f-g。有丝分裂测定。分生孢子5小时,然后在指定的时间段内在YG培养基中再次洗涤并再次孵育。**** <0.0001。通过Hoechst染色和光学显微镜评估每个分生孢子(F)和分生孢子直径(G)中核的数量(每次重复计数50种生殖,这是三个独立实验±SD的平均值)。分生孢子悬浮液,以说明每个实验之前的分生孢子生存力差异。
Richard M. Felder 是北卡罗来纳州立大学 Hoechst Celanese 化学工程名誉教授。他获得了纽约城市大学的工学学士学位和普林斯顿大学的化学工程博士学位,在加入北卡罗来纳州立大学任教之前,他曾在原子能研究机构(英国哈威尔)和布鲁克海文国家实验室工作。他撰写或与他人合作撰写了 200 多篇有关化学过程工程和工程教育的论文,并在美国和国外的工业和研究机构和大学举办了数百场研讨会、讲习班和短期课程。自 1991 年以来,他一直共同指导美国工程教育协会赞助的国家有效教学研究所。他是《化学工程》出版委员会的成员,自 1988 年以来一直为该期刊撰写“随想”专栏。他获得的荣誉包括 RJ Reynolds 教学、研究和推广卓越奖、AT&T 基金会工程教育卓越奖、化学制造商协会国家催化剂奖、ASEE Chester F. Carlson 工程教育创新奖、ASEE 化学工程部教学奖学金终身成就奖,以及因其工程教育出版物获得的多个国家和地区奖项,其中包括 1988、1989、1996 和 2003 年 ASEE William J. Wickenden 杰出论文奖。他的许多出版物可以在 Ronald W. Rousseau 找到,他是 Cecil J.“Pete”Silas 捐赠主席,也是佐治亚理工学院化学与生物分子工程学院的院长。他是的执行编辑、的出版委员会成员和的主题编辑;他曾担任 Wiley 化学工程系列和 的顾问委员会成员、 的咨询编辑和 的副主编。他是 (Wiley, 1987) 的主编。除了致力于本科教育之外,他还是分离科学与技术领域的活跃研究者。他的工作涉及许多主题,最近关注的是晶体成核和生长的基础以及晶体科学与技术的应用。他对化学分离技术领域的贡献获得了美国化学工程师学会 (AIChE) 分离部门的 Clarence G. Gerhold 奖。他是美国化学工程师学会和美国科学促进会的会员。他毕业于路易斯安那州立大学,并当选为 LSU 工程杰出人物。他曾担任化学研究委员会主席、AIChE 董事会成员和 AIChE 出版委员会主席。博士。费尔德和卢梭共同获得了美国化学工程师学会颁发的 2002 年沃伦 K. 刘易斯化学工程教育贡献奖。