•Purecol®(CAT#5005)•干细胞•具有血清和抗生素的细胞培养基•细胞培养瓶•胰蛋白酶-EDTA(Fisher Scientific,Cat#25-200-114)•地塞米松(Dex)(Dex)(Sigma-Aldrich,CAT#D2915-100MG,CAT) -Aldrich,CAT#i5879-5g)•印霉素(IM)(Sigma -Aldrich,CAT#i7378-25g)•4%多羟基甲醛(Thermofisher,CAT#047392-9M) 0.22 µm过滤器•DI水•血细胞•细胞培养板•血清学移液器•Eppendorf Tubes
与细胞的cAMP浓度成正比。在所有测定中使用 0.5 mM IBMX(磷酸二酯酶抑制剂),以防止cAMP产生的长矛信号减少。 在标准测定后,通过用5 mM二甲双胍和30 µM福务蛋白处理细胞来进行测定。 然后在615 nm处测量荧光强度,发现弹枪信号的减小如图9C所示。 在CAMP标准曲线中获得的615 nm处的LANCE信号计数将允许确定刺激细胞中产生的cAMP量[23]。 基于该测定法,已经发现在二甲双胍处理的细胞中降低了细胞内cAMP水平(表2),因此我们的结果证实,二甲双胍通过降低细胞内cAMP水平下调cAMP信号传导。0.5 mM IBMX(磷酸二酯酶抑制剂),以防止cAMP产生的长矛信号减少。在标准测定后,通过用5 mM二甲双胍和30 µM福务蛋白处理细胞来进行测定。然后在615 nm处测量荧光强度,发现弹枪信号的减小如图9C所示。在CAMP标准曲线中获得的615 nm处的LANCE信号计数将允许确定刺激细胞中产生的cAMP量[23]。基于该测定法,已经发现在二甲双胍处理的细胞中降低了细胞内cAMP水平(表2),因此我们的结果证实,二甲双胍通过降低细胞内cAMP水平下调cAMP信号传导。
试剂或资源源标识符化学品,肽和重组蛋白Puelink RNA Mini Kit Invitrogen 12183018A ISCRIPT™ISCRIPT™cDNA合成Kit Kit Biorad 1708840 Sybr™SELICS SYBR™SELECT MASTER MASTER MASTER MIST 4-12%,10井Genscript M00653胶原酶II Sigma C2-28-100MG DMEM(无葡萄糖)GIBCO GIBCO 11-966-025 FBS FISHER FISHER FISHER SCOCICILIFIC SH3010903 PENICILLIN SH30103 PhosSTOP Roche 4906845001 IBMX Sigma 410957 Insulin Sigma I5500 Indomethacin Sigma 405268 Triiodothyronine (T3) Sigma T6397 Dexamethasone Sigma 265005 Rosiglitazone Sigma PHR2932 LipidTOX deep red neutral lipid stain Fisher Scientific H34477超级阻止诱因37535抗体抗KHK Sigma HPA007040抗HIF1α(D2U3T)细胞信号传导14179抗PPARγ(C26H12)细胞信号2443 C/EBPα细胞信号8178 Anti-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-EBPα细胞信号8178 Anti-al timnigin-αtubin tim-αtubin(38)细胞信号2250质粒和siRNA PVSV-G添加剂138479 PCL-ECO ADDGENE 12371 PBABE-NEOLARGE TCDNA ADDGENE 1780人HIF1A 3091 sirna accell drm-a-a-a-a-004018230001生物。n/a