结果与讨论:通过野生型(WT)和TGP PSLOX2突变型线的DNA测序确定了稳定转基因PEA系(TGP)的成功CRISPR/CAS9介导的LOX基因编辑(TGP)。还评估了这些线路的LOX活性,PUFA水平和VOC。Compared to WT peas, the TGP lines showed a signi fi cant reduction (p < 0.05) in LOX activity and in the concentration of key VOCs, including hexanal, 2-hexenal, heptanal, (E)-2-heptenal, (E,E)-2,4- heptadienal, 1-octen-3-ol, octanal, (E)-2-octenal (E,E)-2,4-非二烯和Furan-2-苯基。在TGP浮动中,两个必需的PUFAS,亚油酸和二酚酸的含量是LOX的已知底物,表明CRISPRPR介导的基因编辑的效率在最小化其氧化和PUFAS及其产品的进一步调节方面具有效率。vocs的集合
结肠癌是美国癌症的主要原因之一。结肠癌是由结肠癌细胞基因组中的许多基因突变发展而来的。长的非编码RNA(LNCRNA)会导致许多癌症(包括结肠癌)的发育和进展。lncRNA已经并且可以通过簇状的定期间隔短的短质体重复序列(CRISPR)相关的核酸酶9(CRISPR/CAS9)系统的聚类重复序列的基因编辑技术来纠正,以减少结肠癌细胞的增殖。但是,许多用于运输基于CRISPR/CAS9的疗法的当前输送系统需要更多的安全性和效率。基于CRISPR/CAS9的治疗药需要安全有效的递送系统,以更直接,更明确地靶向结肠中存在的癌细胞。本综述将提供有关使用植物衍生的外泌体样纳米颗粒作为纳米载体的效率和安全性的相关证据,以提供基于CRISPR/CAS9的疗法以直接靶向结肠癌细胞。
cw:CommonLit文章,解释器:CRISPR的工作原理,与文本有关的问题#1-7应得的:星期日,4/19说明:在Archie和CommonLit上向#'s 1-7发布答案。必须将答案作为Archie上的PDF提交。Archie指令:执行以下任一项:
成簇的规则间隔回文重复序列被称为 CRISPR。它是一种可以编程来改变、消除或激活基因组的蛋白质。这项尖端技术提供了广泛的实施可能性,并将在未来几年彻底改变口腔保健。最广泛使用的基因组编辑技术包括归巢内切酶、转录激活因子样效应核酸酶、锌指核酸酶和 CRISPR-CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9)。这些适应性强的基因组编辑工具可以以序列特异性的方式改变基因组。由于其高效和准确,基因组编辑方法 CRISPR-Cas9 已引起人们的关注,成为抗击癌症的有力武器。本综述介绍了这种方法及其用途,特别是在牙科领域的用途。
1 印度韦洛尔基督教医学院干细胞研究中心(班加罗尔 inStem 的一个单位);2 印度特里凡得琅 Sree Chitra Tirunal 医学科学与技术研究所;3 美国伯克利加州大学伯克利分校创新基因组学研究所;4 美国旧金山格拉德斯通研究所数据科学与生物技术研究所;5 澳大利亚悉尼新南威尔士大学生物技术与生物分子科学学院;6 印度卡纳塔克邦马尼帕尔高等教育学院;7 印度韦洛尔基督教医学院暨医院血液学系;8 日本茨城县理化学研究所生物资源中心细胞工程部;9 日本红十字会中央血液研究所血液服务总部研究与开发部,日本东京;10 印度韦洛尔基督教医学院生物化学系; 11 加州大学洛杉矶分校微生物学、免疫学和分子遗传学系,美国洛杉矶;12 瑞士苏黎世生物系分子健康科学研究所
研究成果概要(中文):CRISPR-Cas9 是一种多功能技术,可应用于医疗。在 DNA 双链断裂后的修复途径中,与模板 DNA 同源重组 (HDR) 的修复有助于精确编辑,但同时,涉及碱基缺失或插入的 NHEJ 也以高频率发生。我使用 Traffic Light Reporter 系统进行了基于细胞的 HDR 增强因子筛选,该系统可以同时检测具有 HDR 和 NHEJ 的细胞,并确定了与 NHEJ 衍生细胞相比,HDR 衍生细胞中表达较高的几个基因。对这些基因的进一步基因本体分析表明,它们与 DNA 修复和细胞周期有关。
传统的放大方法与指南RNA的分子不适应,因此第一作者和前博士后研究员LoϊcBinan制定了一种创新的策略,以在其原始站点生成每个指南RNA的许多本地副本。通过将其与称为Merfish的基于荧光的空间转录组方法结合起来,在空间环境中,witturb-fish可以揭示每个扰动的身份和细胞的转录组。
亚培养从粘附细胞中去除旧培养基,并用无钙和镁的PBS洗涤它们。使用3-5毫升PBS进行T25瓶,T75瓶子使用5-10毫升。然后用电池完全覆盖电池,用1-2 mL盖住T25瓶,T75瓶的2.5毫升。让细胞在室温下产生8-10分钟,以松开它们。孵育后,将细胞与10 ml培养基仔细混合,以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。扔掉上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
由于其NUP96-MEGFP合并蛋白的表达稳定,并保持U-2 OS系列的典型特性,包括在与癌细胞迁移和转移有关的研究中至关重要的稳健细胞骨架结构,因此选择了该特定克隆的数字195。使用CRISPR技术可确保精确的基因编辑,从而最大程度地减少了可以削弱实验结果完整性的外观作用。这确实会做U-2 OS-CRISPR-NUP96-MEGFP KLON No.195对于高分辨率成像技术和细胞结构的详细研究特别有用,这有助于细胞生物学,癌症研究和核转运现象的高级研究。
该工具在Tulane开发的工具与大学卫生网络/多伦多大学,肺炎儿童健康研究(PERCH)研究的样品进行了测试,以及国际Mycose预防,研究,研究,实施,网络和培训(Imprint)联盟(Impint)。