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基于 CRISPR-Cas9 的基因组工程...
（Doudna 和 Charpentier，2014 年）并在图 1a 中以示意图形式显示。许多细菌物种都有 CRISPR 和 Cas 基因座的变体，其中作为基因组编辑工具研究最广泛的变体是 CRISPR-Cas9 系统（Makarova 等人，2011 年）。CRISPR-Cas9 介导的基因组编辑需要一个 Cas9 引导 RNA（gRNA）复合物，其中包含 Cas9、CRISPR RNA（crRNA）和反式激活 CRISPR RNA（tracrRNA）（见框 1：CRISPR 术语）。如前所述，可以通过多种方法将该复合物引入靶细胞（Lino 等人，2018 年；Shi 等人，2021 年）。在 crRNA 的引导下，该复合物与补体 DNA 结合，并伴有侧翼的原始间隔区相邻基序 5 0 -NGG-3 0（对于化脓性链球菌 Cas9）（ Chylinski 等人，2013）。Cas9-gRNA 复合物在靶位点诱导双链断裂（ Deltcheva 等人，2011；Shah 等人，2013），靶细胞可以通过非同源末端连接 (NHEJ)（ Hefferin 和 Tomkinson，2005）或同源定向修复 (HDR)（ Liang 等人，1998）进行修复。在 NHEJ 中，断裂的 DNA 链被重新连接，可以直接重新连接，也可以在随机核苷酸插入或缺失后重新连接（ Takata 等人，1998）。这通常会导致移码突变和过早的终止密码子，因此，这种机制很容易用于敲除目的蛋白的表达。在 HDR 中，双链断裂是使用姐妹染色单体作为同源模板链来修复的。通过多次交换、DNA 合成和连接，受损链可以得到精确修复（Takata 等，1998）。不用姐妹染色单体作为模板链，而是将含有所需突变或基因盒的外源 DNA 模板以单链或双链 DNA 的形式引入，同源臂在外侧（Chen 等，2011；Radecke 等，2010；Rouet 等，1994）。多年来，越来越多的实验皮肤病学领域的研究利用了 CRISPR-Cas9 工具箱，尽管目前的数量有限，但在过去 5 年中有所增加（图 1 b 和 c 以及表 1）。本综述旨在认识到在人类表皮角质形成细胞 (KC) 中进行的所有 CRISPR-Cas9 工作，以确定在不同人类 KC 细胞来源中可用的最佳实践和成功策略的关键决定因素，同时为未来使用 CRISPR-Cas9 进行研究提供关键考虑，无论是基础应用还是临床应用。
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Gilead Cooper KC Gilead的实践具有很强的国际因素。他曾出现在香港，BVI，百慕大，开曼和尼维斯的法庭上，并参与了泽西岛，根西岛和直布罗陀的诉讼。他在伊姆兰·汗（Imran Khan）在巴基斯坦最高法院对纳瓦兹·谢里夫（Nawaz Sharif）的行动中提供了有关巴拿马文件的专家建议，这导致谢里夫被任命为总理。Gilead专门研究复杂的高价值纠纷，通常涉及欺诈，违反信任和信托职责的指控以及专业的疏忽。Chambers＆Partners 2024说Gilead是“最优秀的KCS之一”，并且“他提供了Rolls Royce服务”。该指南补充说：“ Gilead（…）具有对法律的百科全书知识”。Fenner Moeran KC Fenner拥有广泛的基础统治 /商业实践，重点是诉讼。尽管他在养老金和金融服务，民事欺诈和资产恢复以及复杂信托/私人客户纠纷方面都有专业，但他还定期在诉讼总统事务以及公司，破产，财产和一般商业事务中行动。芬纳被召唤到安圭拉和北爱尔兰的酒吧，并在开曼，BVI，巴哈马，泽西岛和根西岛以及其他离岸司法管辖区定期诉讼和建议。法律500 2024说：“ Fenner非常出色。他在技术细节上很棒，但也是一流的拥护者，并且与客户在一起。Chambers＆Partners 2024说，Fenner“对法律的深刻了解，再加上他细致的分析，使他与众不同”。Jonathan Hilliard KC Jonathan拥有广泛的信托和商业实践。他的大部分时间都花在了私人，商业信托纠纷和欺诈案件上，无论是在海上和其他司法管辖区，例如香港，他最近在最终上诉法院在商业信托案中成功出现在最终上诉法院中，以验证与债券发行有关的QuistClose Trust案。他的诉讼经常将他带入其他法律领域，并且他在家庭，监管，破产和公法要素方面具有丰富的案件经验。他在这项工作方面也具有重要的咨询实践。他始终在信托，婚姻的目录中排名：信托，海上，民事欺诈，传统欺诈行为和高净值工作。Chambers＆Partners 2024将Jonathan描述为“真正的辉煌KC”和“一个非常聪明的人：他是Langer，复杂的事情的首选”。该指南补充说：“他这一代人的火力很少”。西蒙·阿特金森·西蒙（Simon Atkinson Simon）是一位经验丰富且需求从业者，专门从事信托和遗产工作（陆上和海上），财产和商业诉讼以及专业过失工作。Simon经常在复杂，多方和多个管辖区案件中指导。最新的指示与国际元素有关，在香港，新加坡，海峡群岛，百慕大，特立尼达和多巴哥，英属维尔京群岛，列希滕斯坦和瑞士。他在中东拥有有关资产和/或当事方的特殊争议经验。他是超级响应的，并且在工作中仰卧起来。Chambers＆Partners 2024说，西蒙是“商业和弗兰克的交付，他的恳求非常彻底”。 Chambers＆Partners 2023说：“ Simon的技术知识超级。Chambers＆Partners 2024说，西蒙是“商业和弗兰克的交付，他的恳求非常彻底”。Chambers＆Partners 2023说：“ Simon的技术知识超级。