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工程化的 AsCas12a 核酸酶有助于快速...
Cas12a 特异性的参考文献：Kim 等人。Nat Biotech 2016，Kleinstiver 等人。Nat Biotech 2016，Strohkendl 等人。Mol Cell 2018，Swarts 等人。Biochem Soc Trans 2019
引文：Fan, R., Chai, Z., Xing, S., Chen, K., Qiu, F., Chai, T., Qiu, JL, Zhang, Z., Zhang, H., and Gao, C. (2020). 缩短 sgRNA-DNA 介
2018 ；Chen 等人，2017 ；Kleinstiver 等人，2016 ；Lee 等人，2018 ；Slaymaker 等人，2016）。增加和减少 sgRNA-DNA 界面的长度都会显著降低五种 Cas9 变体中的四种的编辑效率，Sniper-Cas9 是个例外（Lee et al., 2018）。但这种影响的基础尚不清楚。最近，Fu 等人观察到与靶标存在大量错配的 sgRNA 能够引导 SpCas9 切口双链 DNA（Fu et al., 2019）。同样，Szczelkun 等人描述了截短的 sgRNA（互补区为 ∆ 7 nt）与嗜热链球菌 Cas9 (StCas9) 结合导致缺口分子的积累 ( Szczelkun 等人，2014 )。这些观察结果表明，截短/延长的间隔区衍生片段对核酸酶的 HNH 和 RuvC 切割域施加了不同程度的影响，使得它们在某些情况下会切开目标 DNA，而不是将其切割。在这里，我们试图检验这一假设。
从复活的蛋白质推断 CRISPR 相关核酸内切酶的进化
* 1 CIC nanoGUNE BRTA，西班牙圣塞瓦斯蒂安。 2 西班牙马德里拉蒙卡哈尔大学医院遗传学服务中心、IRYCIS 和罕见疾病生物医学研究中心 (CIBERER) 3 西班牙马德里国家生物技术中心 (CNB-CSIC) 分子和细胞生物学系和罕见疾病生物医学网络研究中心 (CIBERER-ISCIII)。 4 INGEMM，拉巴斯大学医院，CIBERER-ISCIII，马德里，西班牙。 5 晶体学研究实验室，IACT（CSIC-UGR），阿米拉，格拉纳达，西班牙 6 布鲁塞尔大学间生物信息学研究所，ULB-VUB，布鲁塞尔 1050，比利时 7 布鲁塞尔结构生物学，布鲁塞尔自由大学，布鲁塞尔 1050，比利时 8 结构生物学研究中心，VIB，布鲁塞尔 1050，比利时。 9 美国马萨诸塞州波士顿 02114 马萨诸塞州总医院基因组医学中心和病理学系 10 美国马萨诸塞州波士顿 02115 哈佛医学院病理学系 11 西班牙巴塞罗那 Integra Therapeutics SL。 12 西班牙巴塞罗那庞贝法布拉大学医学与生命科学系。
CRISPR/CAS9
CRISPR/CAS9作为可编程基因组编辑工具的广泛使用受到了脱靶DNA裂解的阻碍（Cong等，2013; Doudna，2020; Fu等，2013; Jinek et al。，2013）。虽然对此类脱离目标编辑事件的分析使CAS9变体的发展具有更大的歧视（Chen等，2017； Kleinstiver等，2016; Slaymaker等，2016），Cas9拒绝或接受Mismismatches的基本分子机制是贫穷的20; Slaymaker和Gaudelli，2021）。在这里，我们使用动力学分析来指导在不匹配监视的不同阶段的CAS9的低温EM结构测定。我们观察到在引导RNA（GRNA）和DNA靶链（TS）之间形成的双链体的独特，未描述的线性构象（TS），该（TS）发生在存在PAM-DISTAL不匹配的情况下，从而阻止Cas9激活。典型的扭结GRNA：TS双链体是CAS9激活的先决条件，充当结构支架，可促进Cas9构象型裂解所需的构象重排。我们观察到，高度耐受性的远端不匹配通过通过RUVC结构域中的柔性环稳定而稳定扭曲的双工构象来实现这种扭结的构象。我们的结果提供了对基本结构机制的分子见解，这些结构机制可能有助于通过CAS9进行离靶机制，并提供了一个分子蓝图，用于设计下一代高富达Cas9变体，可选择性地减少脱离目标DNA裂解，同时又有有效的触发型DNA，同时保留了有效的触发型DNA。
外科部第 50 届 GALLIE 日
7:30 - 8:00 早餐 8:00 - 8:10 开幕词：Michael G. Fehlings 博士、Carol Swallow GALLIE-BATEMAN 博士、MCMURRICH 和转化研究演讲 |会议主席：Mojgan Hodaie 博士 8:10 – 8:25 Julian Daza (SSTP)、Peter Smith、Shabbir Alibhai、Erin Kennedy、Duminda Wijeysundera、FIT 术后研究人员：“术前虚弱对大型手术后老年患者严重术后残疾的影响：一项多中心前瞻性队列研究” 8:25 – 8:40 Jack W. Hickmott、Gajeni Prabaharan、Tom Enbar、Ricky Siu、Varanan Vejeyathaas、Kriesha Eyer、Cindi M. Morshead：“将星形胶质细胞转化为神经元：开发基因治疗方法修复中风损伤的大脑” 8:40 – 8:55 Chloe R. Wong (SSTP)、Alice Zhu、Helene Retrouvey、Heather L. Baltzer、Christopher Witiw：“成本效用分析大拇指腕掌关节骨关节炎的“大拇指切除术和韧带重建肌腱插入与缝合悬吊关节成形术” 8:55 – 9:10 Kumi Mesaki、Haruchika Yamamoto、Stephen Juvet、Jonathan Yeung、Zehong Guan、Akhi Akhter、Cameron Dickie、Henna Mangat、Aizhou Wang、Gavin W. Wilson、Andrea Mariscal、Jim Hu、Alan R. Davidson、Benjamin P. Kleinstiver、Marcelo Cypel、Mingyao Liu、Shaf Keshavjee：“利用 CRISPR-Cas 技术对供体肺进行基因组编辑以进行免疫学修改用于移植” 9:10 – 9:25 Alex Landry (SSTP)、Jeff Zuccato、Vikas Patil、Mat Voisin、Justin Wang、Yosef Ellenbogen、Chloe Gui、 Andrew Ajisebutu、Farshad Nassiri、Gelareh Zadeh：“脑脊液甲基化组和蛋白质组的整合可避免中枢神经系统淋巴瘤手术活检的需要” 9:25 – 9:40 Kevin R. An、Dominique Vervoort、Feng Qiu、Derrick Y. Tam、Rodolfo V. Rocha、Lamia Harik、Sameer Hirji、Mario FL Gaudino、Harindra C. Wijeysundera、Stephen E. Fremes：“重度冠状动脉疾病女性患者经皮冠状动脉介入治疗与冠状动脉搭桥术的长期疗效对比” 9:40 - 10:40 电子海报展示