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全基因组测序和分析 - Illumina
全基因组测序和分析 - 基于 Illumina Rhabdoid (RT) Illumina 基因组板的文库构建（350-450bp 插入大小）：将 96 孔格式的 2ug 基因组 DNA 通过 Covaris E210 超声处理 30 秒进行碎裂，使用 20% 的“占空比”和 5 的“强度”。双端测序文库是按照 BC 癌症机构基因组科学中心 96 孔基因组 ~350bp-450bp 插入 Illumina 文库构建协议在 Biomek FX 机器人（Beckman-Coulter，美国）上准备的。简单来说，DNA在96孔微量滴定板中用Ampure XP SPRI 珠子纯化（每60uL DNA 40-45uL 珠子），在单一反应中分别用T4 DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶和T4多核苷酸激酶进行末端修复和磷酸化，然后用Ampure XP SPRI 珠子进行清理，并用Klenow片段（3'到5'外显子减去）进行3' A加尾。用Ampure XP SPRI 珠子清理后，进行picogreen定量以确定下一步接头连接反应中使用的Illumina PE接头的数量。使用 Ampure XP SPRI 珠子纯化接头连接产物，然后使用 Illumina 的 PE 索引引物组，用 Phusion DNA 聚合酶（美国赛默飞世尔科技公司）进行 PCR 扩增，循环条件为：98˚C 30 秒，然后 6 个循环，98˚C 15 秒，62˚C 30 秒，72˚C 30 秒，最后在 72˚C 延伸 5 分钟。使用 Ampure XP SPRI 珠子纯化 PCR 产物，并使用高灵敏度分析（美国珀金埃尔默公司）用 Caliper LabChip GX 检查 DNA 样本。所需大小范围的 PCR 产物经过凝胶纯化（在内部定制机器人中使用 8% PAGE 或 1.5% Metaphor 琼脂糖），并使用 Agilent DNA 1000 系列 II 检测和 Quant-iT dsDNA HS 检测试剂盒使用 Qubit 荧光计（Invitrogen）评估和量化 DNA 质量，然后稀释至 8nM。在使用 v3 化学法在 Illumina HiSeq 2000/2500 平台上生成 100bp 配对末端读数之前，通过 Quant-iT dsDNA HS 检测确认最终浓度。全基因组亚硫酸盐-Seq 文库构建和测序：使用 1-5 mg Qubit（Life Technologies，加利福尼亚州卡尔斯巴德）定量基因组 DNA 进行文库构建，如所述（Gascard 等人，2015 年）。为了追踪亚硫酸盐转化的效率，将 1 ng 未甲基化的 lambda DNA (Promega) 掺入使用 Qubit 荧光法定量的 1 µg 基因组 DNA 中，并排列在 96 孔微量滴定板中。使用 Covaris 超声处理将 DNA 剪切至 300 bp 的目标大小，并使用 DNA 连接酶和 dNTP 在 30o C 下对片段进行末端修复 30 分钟。使用 2:1 AMPure XP 珠子与样品比例纯化修复后的 DNA，并在 40 µL 洗脱缓冲液中洗脱以准备 A 尾；这涉及使用 Klenow 片段和 dATP 将腺苷添加到 DNA 片段的 3' 端，然后在 37o C 下孵育 30 分钟。用磁珠清理反应后，将胞嘧啶甲基化双端接头（5'-AmCAmCTmCTTTmCmCmCTAmCAmCGAmCGmCTmCTTmCmCGATmCT-3' 和 3'-GAGmCmCGTAAGGAmCGAmCTTGGmCGAGAAGGmCTAG-5'）在 30oC 下连接到 DNA 20 分钟，并纯化接头两侧的 DNA 片段珠。在亚硫酸盐转化之前，用 10 个 PCR 循环扩增一份文库片段，并在 Agilent Bioanalyzer 高灵敏度 DNA 芯片上进行大小测定。扩增子的长度在 200-700 bp 之间。使用 EZ Methylation-Gold 试剂盒（Zymo Research）按照制造商的方案实现甲基化接头连接的 DNA 片段的亚硫酸盐转化。五次循环
扭曲经济的大力推动
许多国家通过采用现代技术而迅速化了工业化和发展。为什么贫穷的国家不采用更多的生产力技术？哪些政策可以有效地促进技术采用？标准观点强调了技术采用扭曲或障碍的作用（例如，Parente和Prescott，1999； Hsieh和Klenow，2014； Cole等人。，2016年； Bento和Restuccia，2017年）。根据这种观点，消除扭曲是明显的政策响应。另一种观点强调了互补性和协调失败的作用：贫穷国家的企业使用非生产性技术，因为其他企业使用非生产力的技术，即使收养人数的收益随收养者的数量而增加，因此他们将从协调决策中获得所有利益。根据这种观点，策略可以通过协调公司的决策具有较大的总体影响。这种观点在政策界具有悠久的传统（例如，罗森斯坦 - 罗丹，1943年； Hirschman，1958年），并得到了最近的理论著作的支持（例如Murphy等人。，1989; Matsuyama，1995年； Ciccone，2002）。但是，关于经济发展的协调失败观点的定量分析很少。我们的纸在定量框架中桥接了这两个范式。本文有两个贡献。首先，我们的理论分析范围不超出确定多个平衡的存在，表明即使不存在，技术采用的互补性也可以扩大扭曲和政策的影响。其次，我们基于骨料和微观数据的量化分析研究了多重平衡和协调失败的经验相关性，更重要的是，在没有多重平衡的情况下，放大通道的经济意义。在我们所说的大推动区域中，特质扭曲的影响比没有这种互补性的模型大三倍。我们模型中的这种扩增有助于解决贫穷国家和富裕国家之间没有协调失败的巨大收入差距。在我们的模型中，企业是前异质性的，产生不同的商品，受到特殊扭曲的影响，并且通过输入输出链接彼此连接。公司首先选择是否支付固定成本并进入市场。主动公司可以运行传统技术，或者在支付采用成本后，便是一种更有生产力的现代技术。我们首先分析
一个用于体外心脏电生理学的可访问平台
图1。点击编辑的概述和开发。a，单击编辑器的示意图（CE），它是由RNA程序编程的DNA nickase，DNA依赖性DNA聚合酶和ssDNA绑扎域组成的融合蛋白（例如，嗯，核酸内切酶； Huhe）与导向RNA（GRNA）配对。Click-DNA（clkDNA）模板是一种单链DNA寡核苷酸，它编码底漆结合位点（PBS），聚合酶模板（PT）和Huhe识别位点B，从709序列产生的系统生成树47序列47，描绘了Huains多样性的小型元素，该序列是47个序列。量表表示序列之间的分数相关性。c，与ssDNA分子共价磷酸酪氨酸加合物形成共价磷酸酪氨酸加合物的示意图，其中huhe结合了识别顺序以引发单点样共轭反应。d，逐步点击编辑机制，涉及：（1）DNA目标位点释放非目标链（NTS）3'基因组瓣，（2）NTS laps plap杂交与clkDNA PBS，（3）NTS-NTS-NTS-NTS-PBS连接与DNA依赖性DNA Polimentsion（4）nts-pbs intthers（3） clkDNA的编码PT，（5）新合成的3'和天然基因组5'襟翼之间的平衡，以及（6）5'-flap裂解，导致编辑结合。e，在HEK 293T细胞中的点击编辑转染的示意图，涉及CE质粒的共转染（Porcine Circovirus 2（PCV2）Huhe Huhe与NSPCAS9（H840A）融合，并从e.coli dna Polymerase I（DNA Polymerase I（DNA Polymerase I（DNA Polymerase I（DNA Polymerase I（DNA））中， clkDNA和一个（或两个）GRNA质粒（S）。ngrna）针对非编辑链的目标编辑效率。f，g，使用DNMT1 GRNA和带有PBS13-PT12的clkDNA插入或读取突变（Indels）的 f，g， f，g， f，g， f，g， f，g， f，g，使用PBS13-PT12编码A +3- 5 cag deletion（使用A +49 nick; Panel f）或rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 gkdna A +3-5 clkDNA A +49-PT12替换（带有+5“ 2b”刻度；面板G）。 CE1，CE（PCV2-NSPCAS9（H840A）-ECKLENOW），带有一个GRNA，以指导非目标链刻度； CE1.N2，CE1带有额外的grna来指导刻痕（即f，g， f，g， f，g， f，g， f，g， f，g，使用PBS13-PT12编码A +3- 5 cag deletion（使用A +49 nick; Panel f）或rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 gkdna A +3-5 clkDNA A +49-PT12替换（带有+5“ 2b”刻度；面板G）。 CE1，CE（PCV2-NSPCAS9（H840A）-ECKLENOW），带有一个GRNA，以指导非目标链刻度； CE1.N2，CE1带有额外的grna来指导刻痕（即f，g， f，g， f，g， f，g， f，g，使用PBS13-PT12编码A +3- 5 cag deletion（使用A +49 nick; Panel f）或rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 gkdna A +3-5 clkDNA A +49-PT12替换（带有+5“ 2b”刻度；面板G）。 CE1，CE（PCV2-NSPCAS9（H840A）-ECKLENOW），带有一个GRNA，以指导非目标链刻度； CE1.N2，CE1带有额外的grna来指导刻痕（即f，g， f，g， f，g， f，g，使用PBS13-PT12编码A +3- 5 cag deletion（使用A +49 nick; Panel f）或rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 gkdna A +3-5 clkDNA A +49-PT12替换（带有+5“ 2b”刻度；面板G）。 CE1，CE（PCV2-NSPCAS9（H840A）-ECKLENOW），带有一个GRNA，以指导非目标链刻度； CE1.N2，CE1带有额外的grna来指导刻痕（即f，g， f，g， f，g，使用PBS13-PT12编码A +3- 5 cag deletion（使用A +49 nick; Panel f）或rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 gkdna A +3-5 clkDNA A +49-PT12替换（带有+5“ 2b”刻度；面板G）。 CE1，CE（PCV2-NSPCAS9（H840A）-ECKLENOW），带有一个GRNA，以指导非目标链刻度； CE1.N2，CE1带有额外的grna来指导刻痕（即f，g， f，g，使用PBS13-PT12编码A +3- 5 cag deletion（使用A +49 nick; Panel f）或rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 gkdna A +3-5 clkDNA A +49-PT12替换（带有+5“ 2b”刻度；面板G）。 CE1，CE（PCV2-NSPCAS9（H840A）-ECKLENOW），带有一个GRNA，以指导非目标链刻度； CE1.N2，CE1带有额外的grna来指导刻痕（即f，g，使用PBS13-PT12编码A +3- 5 cag deletion（使用A +49 nick; Panel f）或rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 grna a +rnf2 gkdna A +3-5 clkDNA A +49-PT12替换（带有+5“ 2b”刻度；面板G）。CE1，CE（PCV2-NSPCAS9（H840A）-ECKLENOW），带有一个GRNA，以指导非目标链刻度； CE1.N2，CE1带有额外的grna来指导刻痕（即
扭曲经济中的贸易与技术采用
在过去四十年中，发展中国家已显著深入地融入全球供应链。这一过程刺激了采用先进技术的现代制造企业的出现，这些企业大量使用来自国际的中间投入。然而，发展中国家融入世界贸易体系是否带来了预期的红利仍是一个有争议的问题。批评这一过程的人强调了两个明显的异常现象。首先，尽管最近出现了贸易自由化现象，但许多低收入国家采用现代技术的速度仍然异常低（Hsieh 和 Klenow，2014 年；Buera、Hopenhayn、Shin 和 Trachter，2021 年）。其次，一些发展中国家在采用现代技术的同时，总劳动生产率却停滞不前（Diao、Ellis、McMillan 和 Rodrik，2021 年）。现有文献对这些所谓的异常现象提供了一些可能的解释。经济发展的大推动理论认为，固定生产成本和市场规模不足是低收入国家采用现代技术的主要障碍（Murphy、Shleifer 和 Vishny，1989 年）。另一部分关于（不）适当技术的文献将上述模式归因于现代技术与低收入国家的资源禀赋之间可能存在的不匹配（Basu 和 Weil，1998 年；Acemoglu 和 Zilibotti，2001 年）。根据经济理论和详细的企业层面数据，我们认为劳动力市场扭曲为这两个异常现象提供了另一种解释。具体来说，我们在一个标准的数量贸易模型中引入了两个关键因素：技术采用和劳动力市场扭曲。我们通过分析表明这两个因素在开放经济体中是如何相互作用，从而影响总劳动生产率和福利的。此外，我们量化了我们的模型，并表明劳动力市场扭曲导致现代技术采用效率低下，并削弱了贸易主导的现代制造业增长对低收入国家总劳动生产率的影响。我们开发的模型是一个多国、多行业的一般均衡框架，其中企业在劳动力市场扭曲的情况下自行选择传统或现代技术类型。每个国家除了劳动力之外，还拥有一系列异质企业，每个企业都对应一个管理资本单位。每个行业的公司都会选择能够最大化其利润的技术类型。技术在总要素生产率以及使用管理资本、劳动力和中间投入的强度方面有所不同。在实证相关案例中，现代技术节省劳动力并需要大量中间投入。因此，减少贸易壁垒可以提供