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Invitrogen转染产品
CRISPR-CAS9是一种用于基因组编辑和工程的既定方法，包括在对特定基因组裂解事件不完善的修复后，基因表达敲除诱导。Invitrogen™Lentipool V2人CRISPR文库已开发用于功能丧失研究，以确定基因在调节细胞过程中的作用以及对化合物，药物或任何可能影响这些过程的任何扰动者的细胞反应。Lentipool V2人类CRISPR库中包含的CRISPR-CAS9指南RNA（GRNA）是基于专有GRNA设计算法设计的，该算法选择指南以最大程度地敲除效率而不牺牲特异性。每个库包含每个基因的四个序列验证的不同的GRNA矢量构建体，包装为慢病毒颗粒。Lentipool V2人CRISPR库由定制或预定义集合的grnas组成，以特定基因家族为目标，以慢病毒合并格式进行功能基因组学筛选，请参见第29页。
Lentipool V2人CRISPR库 - 用户指南实现特定于目标效率-truecut-hifi-cas9-
为了更好地了解Truecut Hifi Cas9的高保真度，我们评估了HEK293基因组中的其他基因。使用TEG-Seq进行了更多全基因组筛查，以检测HEK1，HEK4，VEG1和VEG3基因中的靶标。数据表明，Truecut Hifi Cas9比WT-CAS9和供应商I高保真CAS9蛋白产生的脱离目标较少（图1）。将每个编辑位点的脱靶编辑百分比与靶向编辑的百分比进行了比较，以确定相应站点的脱靶/靶向概率比。每个编辑事件均与其概率比（图1A）绘制，并根据概率将OFF目标的总数分组（图1B）。结果表明，与WT-CAS9和供应商I高保真CAS9相比，Truecut Hifi Cas9产生的脱靶编辑明显少得多。truecut hifi cas9只有一个非目标编辑的概率> 10％。相比之下，WT-CAS9和供应商I高保真CAS9分别具有16和6折叠目标（图1B）。
EP0402 TAQ DNA聚合酶（rec。） Invitrogen转染产品 Lentipool V2人CRISPR库 - 用户指南 实现特定于目标效率-truecut-hifi-cas9-
批量描述01263642 0.5 KU TAQ DNA聚合酶（rec。）2655825 2 x 1.25 ml 10x TAQ缓冲液（NH4）2SO4 2667128 2 x 1.25 ml 10x TAQ缓冲液与KCl 2655522 2 x 1.25 ml 25mm 25mm 25mm mgcl2