干细胞(SC)的遗传修饰通常是使用积分载体来实现的,载体的潜在综合遗传毒性和在分化过程中表观遗传沉默的倾向限制了其应用。细胞的遗传修饰应提供可持续水平的转基因表达,而不会损害细胞或其后代的生存能力。我们开发了非病毒,非整合和自主复制的最小尺寸的DNA纳米摩析器,以持续遗传修饰SC及其分化的后代,而不会造成任何分子或遗传损伤。这些DNA载体能够有效地修饰鼠和人类多物种SC,具有最小的影响,并且没有分化介导的转基因沉默或载体损失。我们证明,这些载体在自我更新和靶向分化在体外和体内的自我更新和靶向分化在体外和体内通过胚胎发生和分化为成人组织的稳健和持续的转基因表达,而不会损害其表型特征。
摘要 神经节苷脂单唾液酸 (GM1) 神经节苷脂沉积症是一种罕见的常染色体隐性遗传病,通常由 GLB1 基因中的有害单核苷酸变异 (SNV) 引起。这些变异导致 b-半乳糖苷酶 (b-gal) 活性降低,从而导致与过早死亡相关的神经退行性病变。目前,尚无有效的 GM1 神经节苷脂沉积症治疗方法。正在进行的三项临床试验旨在提供 GLB1 基因的功能性拷贝以阻止疾病进展。在这项研究中,我们表明 41% 的 GLB1 致病 SNV 可以被腺嘌呤碱基编辑器 (ABE) 取代。我们的结果表明,ABE 可以有效地纠正患者来源的成纤维细胞中的致病等位基因,恢复 b-gal 活性的治疗水平。脱靶 DNA 分析未检测到接受治疗的患者细胞中的脱靶编辑活动,除了基于 3D 结构生物信息学预测的不影响 b-gal 活性的旁观者编辑。总之,我们的结果表明基因编辑可能是治疗 GM1 神经节苷脂沉积症的替代策略。
方法在补充了10%FCS,1%谷歌补充剂(Gibco),100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉菌素的IMDM(Gibco)中培养了衍生成近单倍型HAP1细胞的细胞培养。siRNA转染是根据制造商的指南使用Rnaimax(Invitrogen)进行的。在这项研究中使用了以下siRNA:Sinon-targetable(Dharmacon),Sipolg2(地平线,TargetPlus,SmartPool),SIMRPL23(Horizon,Targetplus,TargetPlus,Smartpool)。将所有药物(Aphidicolin,Hu,Olaparib,Rad51i(B02),DNA-PKI(NU74441)和寡霉素A)溶解在DMSO中,并以指示浓度使用。细胞使用具有137CS源的γ提取器(最佳疗法)进行γ辐射。生长测定HAP1细胞以1500个细胞/孔的密度将HAP1细胞铺在96孔板中,并被视为5天。5天后,使用100%甲醇固定细胞,并在室温下使用Crystal Violet染色2H。随后,将晶体紫溶解在10%乙酸中,并使用Biotek Epoch Epoch分光光度计在595 nm处测量强度。使用非线性拟合,sigmoidal,4pl,x是log(浓度),将这些测量值用于棱镜中的IC50计算。在9mm玻璃盖上生长免疫荧光细胞,并在室温下以4%甲醛和0.2%Triton X-100固定10分钟。使用了以下抗体:人类抗克雷斯特(Cortex Biochem,CS1058),兔抗PH3SER10(Campro,#07-081),小鼠抗ERCC6L(PICH)(ABNOVA,ABNOVA,000548421-B01P)。所有初级抗体在4°C的夜间孵育。使用固定缓冲液I(BD生物科学)固定细胞。细胞。二级抗体(分子探针,Invitrogen)和DAPI在室温下孵育2小时。使用延长金(Invitrogen)安装盖玻片。使用具有60倍1.40 Na油目标的Deltavision Deonvolution显微镜(Applied Precision)获取图像。SoftWorx(应用精度),ImageJ,Adobe Photoshop和Illustrator CS6用于处理获得的图像。单倍体插入诱变筛选基因对用APH或HU处理的HAP1细胞的存活至关重要,如先前所述35,使用单倍体插入诱变筛查鉴定。诱变的HAP1细胞是从Brummelkamp实验室获得的。简短地,获得HAP1细胞的诱变如下:在HEK293T细胞中产生了基因陷阱逆转录病毒。每天两次收获逆转录病毒至少三天,并通过离心(使用SW28转子进行2小时,21,000 rpm,4°C,4°C)进行沉淀。在8μg/ml硫酸素硫酸素的存在下,在T175烧瓶中至少连续两天,在8μg/ml硫酸素的存在下,将大约4000万个HAP1细胞通过浓缩基因陷阱病毒的转导而被诱变。在包含10%DMSO和10%FCS的IMDM培养基中冷冻诱变细胞。解冻后,在存在27.5 nm adphidicolin或100μmHu的情况下,将诱变的HAP1细胞转移了10天。传递后,通过胰蛋白酶-EDTA收集细胞,然后进行沉淀。为了最大程度地减少潜在地含有杂合突变的二倍体细胞的混杂,用DAPI染色固定的细胞,以允许使用Astrios Moflo对G1单倍体DNA含量进行分类。将3000万个排序的细胞在56°C下裂解过夜,以使使用DNA迷你试剂盒(QIAGEN)进行基因组DNA分离。插入位点映射基因陷阱插入位点通过LAM-PCR放大,然后进行捕获,ssDNA接头连接和指数放大,并在测序之前使用含有Illumina适配器的引物,如前所述,如前所述35。映射和插入位点的分析以前描述了78。简短地,在对HISEQ 2000或HISEQ 2500(Illumina)进行测序之后,将插入位点映射到人类基因组(H19),允许一个不匹配,并与RefSeq坐标相交,以将插入位点分配给基因。基因区域在相对链上重叠的基因区域没有考虑进行分析,而对于在相同链基因名称上重叠的基因是串联的。对于每种复制和两种药物治疗(APH或HU)基因的必要性都是通过二项式检验确定的。合成致死性。一个基因通过所有Fisher的测试,其p值截止为0.05,效应大小至少为0.12(减法比率wt sense比率 - 复制应力条件感官比率)。
Louise Herring 目前领导麦肯锡在英国、爱尔兰和以色列的 AI 业务 QuantumBlack。在麦肯锡任职期间,Louise 于 2021 年至 2023 年担任 Brambles 顾问,并与其他领先的消费者和面向客户的组织合作,通过数字化转型寻找新的增长途径、增强客户参与模式并提高组织绩效。在 2008 年加入麦肯锡之前,Louise 是普华永道的顾问。她拥有剑桥大学自然科学学士学位和伦敦商学院工商管理硕士学位。
简介:保持牙齿活力对于确保口腔健康和整体福祉至关重要。重要的牙齿是保留其营养,灵敏度和自我修复能力的能力,这要归功于内部健康的牙髓。但是,如果该功能因深腔,创伤或感染而损害,那么干预牙齿修复体以防止不可逆的损失至关重要。保存牙齿健康对于维持骨骼结构和牙齿弓稳定性至关重要,并防止将来并发症,例如严重的感染,脓肿甚至牙齿脱落。在这种情况下,由于其独特的能力在各种细胞类型中区分自身,带来了巨大的组织修复潜力和再生,因此干细胞移植是振兴受损纸浆组织的有前途的选择。目的:鉴于此,这项研究旨在分析牙髓病中干细胞移植的可能性和应用,以强调其特定的指示,涉及的程序以及对患有某些纸浆疾病的患者的造成的益处。方法论:这是一项由PubMed/Medline数据库,虚拟健康库(BVS)和Scielo中包含的文章开发的描述性探索性书目研究。使用描述符“间充质干细胞移植”,“再生牙髓牙齿牙齿牙和牙髓疾病”,进行了对文章的搜索。重复的文章被丢弃并逃离了中央研究主题。包括葡萄牙语,英语和西班牙语的原始文章,文学评论和案例报告。结果:可以将干细胞分为胚胎或成年人,这些胚胎存在于体内某些组织(包括纸浆)中。这些细胞可以从永久牙齿(DPSC)或落叶(棚)中分离出来,并用于牙髓活力损失的恢复性牙齿治疗。结论:进行研究以改善隔热,培养和移植技术以及评估这些长期程序的安全性和有效性至关重要。此外,有必要考虑监管和道德问题。关键字:间充质干细胞移植;再生性牙髓;牙髓疾病。
obayomi,Kehinde Shola,Lau,Sie Yon,Mayowa,Ibitogbe Enoch,Danquah,Michael K,Zhang,Zhang,Jianhua,Chiong,Chiong,Tung,Meunier,Louise和Rahman,Rahman,Mohammad Mahmudur(2022)(2022年)在葡萄源性质地上的进步材料,用于生物播种材料。水过程工程杂志,51。ISSN 2214-7144
2023 年 2 月 14 日 — 路易斯·阿德里安娜·伍德,康迪特·史密斯将军伦纳德·伍德的妻子,出生。1869 年 9 月 20 日,纽约州布法罗,1889 年,路易斯的继父...
我们的回应分为三个部分。首先,我们是全球首批制定运营弹性标准的监管机构之一。其次,我们的外包和第三方风险管理政策一直要求公司对其运营弹性负责,无论它们是否依赖第三方提供重要的业务服务。第三,我们发布了一份关于系统性风险影响的讨论文件,认识到没有一家公司能够充分监控或管理某些第三方可能对金融稳定、市场诚信和消费者保护构成的风险。这份最新出版物目前开放反馈,探讨了银行和 FCA 如何使用《金融服务和市场法案》中提出的权力来评估和加强关键第三方提供的服务的弹性。
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