Biology: - Extraction of nucleic acids from human and environmental matrices - Preparation of essays in molecular biology (QPCR, DDPCR, DGGGE -PCR, PMA -QPCR) - Cellular crops - Cytotssicity test on cellular models of environmental matrices - Ames test - Preparation of analysis of Next Generation Sequencing (ION TORRENT ABD illuminates Nextseq 1000/2000) - 微生物培养物-MALDI -TOF质量光谱法 - 对抗生素的敏感性测试(磁盘扩散) - 实验室活动期间对学员的培训 - 书目研究
有几种用于MSI研究的不同技术可以将其分类为硬和软电离技术。硬电离是指将过量的内部能量添加到分子中,并导致分子的广泛碎片化。这种类型的电离对于分子的结构表征非常有用。6软电离技术使用的能量较少,导致分子的分裂较少。因此,靶分子对于分析保持完整。基质辅助激光解吸/电离(MALDI)是进行软电离的最流行的方法之一。MALDI-MS已应用于多种应用,例如细菌7的质谱指纹和聚合物的特征,8种蛋白质,9和肽,其中10个等。MALDI-MS的过程就像Maldi-MSI一样,激光击中了包含矩阵的样品,然后生成离子以进行下检测,以提供有关样品的分子信息。但是,MALDI-MS和MALDI-MSI之间的关键区别在于空间信息。MALDI-MS提供了有关样品的分子信息,但没有以空间定义的方式(如Maldi-MSI赠款)提供此信息,如图1。Maldi-MSI,结合了样品区域上收集的所有光谱以创建一个离子图像,这是单独使用MALDI-MS实现的信息。16,17另一种广泛使用的用于成像的软电离技术是解吸电喷雾电离(DESI)。20,有趣的是,纳米颗粒增强Maldi在成像中广受欢迎,并且该技术已应用于多种样本类型,包括组织,11,12个3D细胞培养物,例如球体和类器官,13-15,甚至是单细胞成像。desi具有使用液体种剂提取的额外好处,该提取允许在环境条件下分析样品。18其他,不太广泛使用的MSI技术包括次级离子质谱法(SIMS)和激光消融电感耦合等离子体(LA-ICP)。SIMS是一种用于成像显示高空间分辨率的硬电离技术。尽管是以分析物分裂为代价的。基于LA-ICP的成像也显示出更高的空间分辨率,但主要提供拓扑元素。
bafes-有氧细菌内孢子形成c-碳cbafes-有氧细菌收集CSD内孢子训练-DPA冷休克域 - eps二倍酸 - 外多糖物质GFP-绿色荧光蛋白 - 绿色荧光蛋白Maldi -tof - Matrix Assisted Leisure Disruption Ionization - Time of Flight (MCF - Met phase contrast microscopy - ML Transmission Electronic Microscopy - Maximum Ladies MP - Maximum PARCIMONIA NA - NJ Sodium - Nucleotide Otu Nucleotide - Taxonomic Unit Operational PB - Basis PC - PG Cell Wall - Peptideoglycan SASP - Small Proteins Soluble Acid SL - Sensu Lato SS- sensu stricto otu-分类单元TGH-水平基因转移 - 紫外线分类单元 - 紫外线
商业液体LB培养基被用作培养基。7培养溶液是通过在37°C摇动并孵育4、8、16、24、32、52和56小时的培养溶液。将培养物以3200 g离心5分钟,然后将上清液倒入并用蒸馏水重悬于。将悬浮液以3200 g离心5分钟,然后将上清液倒入并用蒸馏水重悬于。用分光光度计测量悬浮液的OD600值,以计算细菌的数量。(OD600 = 1的1×108 CFU/ml计算。)然后将悬浮液用α-Cyano-4羟基苯甲酸(CHCA)溶液稀释,以便将生物的数量应用于MALDI-8030的样品板(图1)是10 5。1μl每种稀释的溶液在样品板上发现,干燥并通过MALDI -8030进行分析。分析条件如表1所示。细菌计算计算后的预处理和分析时间约为1小时。
了解外用药物在人体皮肤上的输送和扩散对于药物和化妆品研究都至关重要。这些信息在药物开发的早期阶段至关重要,可以识别出以最佳浓度输送到目标皮肤区的最有希望的成分。有不同的皮肤成像方法(侵入性和非侵入性)可用于表征和量化药物在体内和体外人体皮肤内的时空分布。本综述的第一部分详细介绍了侵入性成像方法(放射自显影、MALDI 和 SIMS)。第二部分回顾了可应用于体内的非侵入性成像方法:i)荧光(常规、共焦和多光子)和第二谐波产生显微镜;ii)振动光谱成像方法(红外、共焦拉曼和相干拉曼散射显微镜)。最后,提出了选择成像方法的流程图,以指导人体皮肤体外和体内药物输送研究。© 2020 Elsevier BV 保留所有权利。
摘要:用传统质谱法分析核酸时,反离子会造成质量不均匀,限制可分析的 DNA 大小,因此分析起来十分复杂。在这项研究中,我们使用电荷检测质谱法分析兆道尔顿大小的 DNA,从而克服了这一限制。使用正模式电喷雾,我们发现 DNA 质粒的电荷分布截然不同。低电荷群体的电荷像紧凑的 DNA 折纸一样,而高电荷群体的电荷分布范围很广。对于高电荷群体,测量质量与 DNA 序列预期质量之间的偏差始终在 1% 左右。对于低电荷群体,偏差更大且变化更大。高电荷群体归因于随机卷曲配置中的超螺旋质粒,其宽电荷分布是由随机卷曲可以采用的丰富多样的几何形状造成的。高分辨率测量表明,随着电荷的增加,质量分布会略微向低质量方向移动。低电荷群体归因于质粒的浓缩形式。我们认为凝聚形式是由熵捕获引起的,其中随机线圈必须经历几何变化才能挤过泰勒锥并进入电喷雾液滴。对于较大的质粒,剪切(机械破碎)发生在电喷雾期间或电喷雾界面。降低盐浓度可以减少剪切。■简介质谱 (MS) 在核酸表征中发挥着重要作用。1、2 电喷雾和基质辅助激光解吸/电离 (MALDI) 都已用于将 DNA 和 RNA 离子引入气相进行分析,但 MALDI 与飞行时间 (TOF) MS 的组合应用最为广泛。例如,MALDI-TOF 继续用于表征单核苷酸多态性 (SNP),这可提供有关疾病易感性遗传特征的重要信息。对于突变和 SNP 的分析,只需要分析小于 25 nt 的小寡核苷酸(核苷酸)。这是幸运的,因为反离子(通常是 Na +、K + 或 Mg 2+)与 DNA 和 RNA 的高电荷磷酸骨架结合,导致峰宽和灵敏度降低。已经开发出几种方法来脱盐核酸。3、4 然而,由金属离子加合引起的异质性会随着尺寸的增加而增加,并且由于电荷状态分辨率的丧失,常规 MS 不再可能分析兆道尔顿大小的 DNA 和 RNA 物种。另一方面,新型疫苗和基因疗法等新兴疗法携带着大量的遗传物质。基因组完整性对于有效的治疗是必不可少的,对完整基因组的质量测量提供了一种快速而直接的方法来检查缺失和添加。5
矩阵辅助激光解吸电离(MALDI)是一种在蛋白质组学和代谢组学生物学研究中常用的软电离质谱(MS)的一种形式[1-3]。在没有自动进料器的情况下并行快速处理多个样本的能力使其适合于高通量和单细胞应用[4-6]。该方法的关键是使用激光器中的能量促进离子物种产生的矩阵或工程底物[7,8]。底物的特性,包括其化学,电导率和微图像冲击样品电离效率,从而使测量敏感性[8-11]。例如,微米级井可用于隔离不同组成样品,因此可以分别分析它们[12-14]。井阵列也与活动[15,16]或被动加载技术[12,17]兼容,以简化样品的准备。但是,MALDI-MS需要在分析之前将样品干燥。当液滴在平坦的表面上干燥时,由于咖啡环效应,它们倾向于分配有关周长的分析物[18,19]。类似的过程发生在圆柱井中,导致沿周围的降水[20,21],在该井中,由于壁被激光闭塞而抑制信号。两种情况下的结果均降低了灵敏度和由于样本斑点不均匀性而引起的测量变异性增加[18,22]。
Post-ASMS Go Local Tübingen, July 23, 2024, University Hospital Tübingen, The M3 Research Center, Otfried-Müller-Straße 37, 72076 Tübingen 09:00 - 09:15 Registration and Coffee 09:15 - 09:30 Welcome and Introduction Dr. Jörg Sauer, Sales Representatives, Bruker Daltonics, Germany 09:30 - 10:00多模式代谢组学阐明了人类生物流体中的抗病毒核苷,并识别SARS-COV-2中的NAD+途径和SIRT1激活改变了NAD+途径和SIRT1激活,核心设施代谢组学负责 heterogeneity in human breast cancer Dr. Laimdota Zizmare, PostDoc at Core Facility Metabolomics, University Hospital Tübingen 10:30 - 11:00 Redefining Spatial Biology with MALDI Imaging Dr. Andras Kiss, Field Application Support Engineer, Bruker Austria 11:00 - 11:30 Coffee Break 11:30 - 12:00 4D-Proteomics TM Innovation: Meeting Research Challenges Head-on Dr. Torsten蛋白质组学业务开发经理Müller - Dach,Bruker Daltonics 12:00-12:30基于质谱的Timstof基于质谱法的免疫肽组学鉴定精炼肿瘤抗原识别
摘要。Amelia T,Liliasari,Kusnadi,AditiawatiP.2023。从铝土矿采矿区分离和表征重金属还原的土著细菌。生物多样性24:5096-5104。这项研究旨在隔离,鉴定和表征来自印度尼西亚Bintan Island的Tanjungpinang以前的铝土矿采矿区的某些土著细菌菌株。此外,这项研究的重点是评估这些细菌减少重金属铅(PB)和铬(CR)的潜力。在四个采样点上的重金属浓度,土壤样品作为细菌来源的收集以及实验室评估都进行了生物驱动能力。进行了筛查实验,以使用基本的生长培养基,例如营养琼脂(NA)和富含100 ppm pb和Cr金属的营养汤(NB),以鉴定对重金属抗性的细菌菌株。用原子吸收分光光度法(AAS)分析了重金属的还原,而使用MALDI TOF-MS测定了细菌物种。柯比鲍尔方法的修改版本用于降低毒性测试。两种细菌菌株被鉴定为PB和CR还原器,并表现出对两种金属的抗性。基于99.9%的相似性值,分离株被鉴定为阿甲基芽孢杆菌(分离株A)和肺炎克雷伯氏菌(分离株B),将PB降低了约72.7%和34.5%,CR分别降低了87.4%和86.2%。结果表明,富含金属的培养基的毒性降低,在孵育三个小时后,细菌生长,但在21小时后没有毒性。
在现代世界中,口腔的各种炎症性疾病已广泛,特别是牙周炎[1,2]。牙周炎和植入周围炎的主要原因是口腔微生物的组织感染。病理过程中已知的潜在参与者之一是链球菌,在几乎100%的病例中,它们在牙周口袋中被检测到[3-6]。同时,即使使用现代方法,链球菌仍然是识别微生物的最困难之一。当前,一种积极使用的物理方法来诊断包括链球菌在内的微生物,是基质辅助的激光解吸/电离时间 - 质谱质谱法(MALDI-TOFMS)。没有任何有关微生物识别的新技术,没有问题,而Maldi Tofms也是如此。是在具有基因型/蛋白质相似性的那些微型机构中无法进行准确的分歧,并且在数据库中没有可靠的数据[7]。在这方面,紧急任务是检测链球菌的物种鉴定。作为识别链球菌的替代方法,可以使用在生物医学实践中广泛应用的拉曼光谱法(RS)的方法[8]。rs允许分析分子的振动模式,并可以区分相似的分子,这使人们希望解决鉴定紧密相关的细菌物种的问题。鉴于链球菌作为各种局部疾病的致病药物的作用越来越大,需要在此方向上进行进一步的研究。以前,其他作者进行了类似的研究,但它集中在肺炎球菌的物种鉴定上,作为广义感染(肺炎和脑膜炎)的主要病因[9]。该研究的目的是对三种密切相关的链球菌链球菌,口腔链球菌和肺炎链球菌肺炎链球菌的菌株进行频谱研究,并使用拉曼光谱法对周期性诊断的细菌菌株进行快速评估。