Next Generation Sequencing: Manual Process Eppendorf Concentrator Plus ABI 7500 Fast Real-Time PCR System Thermal cycler Qubit Tapestation 2200 Tapestation 4200 Fluoroskan microplate fluorometer Illumina NextSeq 500 NGS platform Illumina NextSeq 550Dx NGS platform Illumina NovaSeq 6000 NGS platform GEN-SOP-212 GEN-SOP-213 GEN-SOP-214 Gen-SOP-169 Gen-SOP-144 Gen-SOP-164基因组DNA,CTDNA和RNA从列出的样本类型中提取的房屋中提取,并从外部来源收到的样品作为主要样品
使用 Kohl 和 Ascoli [13] 改进的间接酶联免疫吸附测定法对 IgY 浓度进行定量,并对洗涤和封闭缓冲液的体积、包被抗体的浓度、终止液的类型和微孔板读数仪的波长进行了修改。用紫外线灭菌后,用 2.5 µ g/mL 浓度的山羊抗 IgY 免疫球蛋白 G (IgG) (SAB3700195,Sigma-Aldrich) 作为捕获抗体包被微孔板。用 pH 9.6 的缓冲碳酸氢盐 (0.005 M 碳酸盐碳酸氢盐) 稀释抗体,并将微孔板在 4°C 下孵育过夜。用磷酸盐缓冲盐水和吐温-20 (PBST-20,pH 7.4) 清洗微孔板 3 次。随后用2%牛血清白蛋白(BSA)封闭微孔板(每孔100 µL),37 ℃孵育1 h,用0.05% PBST清洗微孔板3次,加入血清样品至100 µL(1:100稀释),37 ℃孵育1 h。
荧光素酶测定允许研究转录基因表达,病毒生命周期,细胞活力和生化过程,使其成为药物开发的重要工具。您是否正在寻找记者基因,ATP检测,我们的荧光素酶发光测定选项以便利的微板格式提供了高灵敏度。
ecoplates应进行运动读数,以捕获底物代谢的曲线。这可以通过使用微板读取器(例如MicroStation™)重复读取微板块来实现。是一个更好的选择,尤其是在分析许多样品时,是完全自动化的ODIN®孵化器/读取器,每20分钟每20分钟自动读取50层。MicroStation和Odin配备了记录所有数据并促进分析的软件。
评估了以下制造商的两个不同的96孔PCR板块(每批3板):Eppendorf(Twin.tec®PCR板),供应商“ 4T”和供应商“ AR”。每个PCR板的48孔中有100 µL的棋盘图案中的超纯水。将板用eppendorf热密封膜密封,并在500 x g处离心1分钟,然后在96°C下放入Mastercycler®X50s 40分钟。此外,将板混合(EppendorfMixmate®,RT和1200 rpm的10分钟)和离心(Eppendorf离心机5920 R,RT时1分钟,500 x g)。随后将90 µL的等分试样从每个井转移到UV-VIS,96/F微板,以测量微孔板分光光度计(Xmark™,Bio-Rad®)上的吸光度。测量了从220 nm到400 nm的吸光度波长光谱。未孵育的水用于设置空白值。在260 nm处的吸光度和50μg/mL的因子用于计算每个样品中源自UV浸泡的可刺激物的假DNA浓度。
EasySep™总核酸提取试剂盒来自含有多达1 x 10^6细胞的细胞悬浮液(≤5x 10^6细胞/ml)的核酸。在样品裂解后,easepSep™总核酸急流螺丝™捕获核酸,并使用Erythroclear™磁铁(目录#01737)进行标准和全血的制剂,或96-Well pcr Microplate磁铁(目录#100-100-100-13044)进行96-Well in 96-Well in 96-Well形式。残留蛋白和细胞成分通过用70%乙醇洗涤分离的核酸去除,并使用洗脱缓冲液从Rapidspheres™释放。最终分离的分数包含纯化的核酸,可以立即使用Nanodrop™分光光度计直接定量,额外纯化(例如DNA去除),或用于下游应用。
用于样品制备•8管条(Thermo Fisher Scientific,Cat。编号ab0264)或其他不含核酸酶的PCR级管条,固定在PCR架中,或已验证的96孔板,这些板已验证以与您的FACS仪器一起使用•Microplate Film(USA Scientific,Cat。编号2920-0010)用于分类之前的密封管/板•铝单选项卡箔封封(美国科学,猫。编号2938-4100)或帽条(Thermo Fisher Scientific,Cat。编号ab0784/ab0850)•用于96孔板或管条的低速台式离心机•合适的容器中的干冰,用于闪光灯冷冻电池•(可选的)BD FACS PRACES PRACES PRACES PRES pre-SORT SORT SORT BUFFER(BD BISCIENCES,BD BISCIENCES,CAT。编号563503)•(可选)智能seq ht套件裂解组件(cat。编号634439)或10x裂解缓冲液(Takara Bio,Cat。编号635013)用于排序额外的板
Tristar 3和Tristar 5多模片读取器的高范围和低范围标准曲线如图2。所有曲线表现出极好的线性。对于Tristar 3的96孔微孔板中计算的检测极限为0.069 pg/µl dsDNA(13.8 pg/井),对于Tristar 5的Tristar 3和0.083 pg/µl dsDNA(16.6 pg/well)在384孔板中进行测量时,Tristar 3和0.110 pg/µl dsDNA(7.6 pg/well)计算出的检测限为0.272 pg/µl dsDNA(19.0 pg/well),对于Tristar 5。使用所使用的设置,可以在33秒内测量完整的96孔板。