1个医学生物化学和微生物学系,乌普萨拉大学,乌普萨拉大学,哈斯尔加坦3,751 23瑞典乌普萨拉; lauracarra91@gmail.com(L.G.C.); john.pettersson@imbim.uu.se(J.H.-O.P.); ake.lundkvist@imbim.uu.se(Å.l。)2 CBRN国防与安全,瑞典国防研究机构,水泥厂20,906 21Umeå,瑞典; andreas.sjodin@foi.se(A.S。); caroline.ohrman@foi.se(C.ö.); linda.karlsson@foi.se(L.K.); mats.forsman@foi.se(M.F.)3美国亚利桑那州北亚利桑那大学的病原体和微生物研究所,美国亚利桑那州86011; ryelan.mcdonough@nau.edu(r.f.m. ); jason.sahl@nau.edu(J.W.S. ); dawn.birdsell@nau.edu(d.b. ); dave.wagner@nau.edu(d.m.w.) 4生物医学和临床科学系,洪水和感染司,林克平大学,581 85Linköping,瑞典; peter.wilhelmsson@liu.se(p.w. ); per-eric.lindgren@liu.se(P.-E.L.)5临床微生物学系,约恩科派对县临床微生物学系,551 85Jönköping,瑞典6悉尼悉尼传染病研究所,用于传染病研究所希腊鸟类学会/希腊鸟类鸟类学会,希腊雅典10437; cbarboutis@ornithologi.gr 8estaciónbiológicadoñana,CSIC,AVDA。 américovespucio 26,41092 Sevilla,西班牙; jordi@ebd.csic.es 9 Ciber Epidemiologi an y Saludpública(Ciberesp),28029马德里,西班牙10 Migres Foundation,P.O。3美国亚利桑那州北亚利桑那大学的病原体和微生物研究所,美国亚利桑那州86011; ryelan.mcdonough@nau.edu(r.f.m.); jason.sahl@nau.edu(J.W.S.); dawn.birdsell@nau.edu(d.b.); dave.wagner@nau.edu(d.m.w.)4生物医学和临床科学系,洪水和感染司,林克平大学,581 85Linköping,瑞典; peter.wilhelmsson@liu.se(p.w.); per-eric.lindgren@liu.se(P.-E.L.)5临床微生物学系,约恩科派对县临床微生物学系,551 85Jönköping,瑞典6悉尼悉尼传染病研究所,用于传染病研究所希腊鸟类学会/希腊鸟类鸟类学会,希腊雅典10437; cbarboutis@ornithologi.gr 8estaciónbiológicadoñana,CSIC,AVDA。américovespucio 26,41092 Sevilla,西班牙; jordi@ebd.csic.es 9 Ciber Epidemiologi an y Saludpública(Ciberesp),28029马德里,西班牙10 Migres Foundation,P.O。Box 152,11380 Tarifa,西班牙; aonrubia@fundacionmigres.org 11以色列鸟铃中心(IBRC),以色列鸟类学中心(IOC),以色列保护自然保护协会(SPNI),Tel-Aviv 6618602,以色列; Yosefkiat@gmail.com 12独立研究员,通过Cesare Lippi 35,40026 Imola,意大利BO; dariocarmen@alice.it 13诺比瓦尔大学(Uppsala University),诺比瓦(Norbyvägen)18d,752,瑞典乌普萨拉(Uppsala),乌普萨拉大学(Uppsala University)进化生物学中心生物学系; thomas.jaenson@ebc.uu.se 14 Anses,Inrae,écolenationalevététérinaired'Alfort,Umr Bipar,Umr Bipar,Laboratoire deSantéanimale,F-94700 Maisons-Animale,F-94700 Maisons-Alfort; sara.moutailler@anses.fr 15瑞典自然历史博物馆环境研究与监测部,瑞典104 05; thord.fransson@nrm.se 16医学科学系,乌普萨拉大学临床微生物学部分,瑞典751 85乌普萨拉; kenneth.l.nilsson@medsci.uu.se 17医学科学系,动物科学科学中心,乌普萨拉大学,瑞典751 85; bjorn.olsen@medsci.uu.se *通信:tove.hoffman@medsci.uu.seBox 152,11380 Tarifa,西班牙; aonrubia@fundacionmigres.org 11以色列鸟铃中心(IBRC),以色列鸟类学中心(IOC),以色列保护自然保护协会(SPNI),Tel-Aviv 6618602,以色列; Yosefkiat@gmail.com 12独立研究员,通过Cesare Lippi 35,40026 Imola,意大利BO; dariocarmen@alice.it 13诺比瓦尔大学(Uppsala University),诺比瓦(Norbyvägen)18d,752,瑞典乌普萨拉(Uppsala),乌普萨拉大学(Uppsala University)进化生物学中心生物学系; thomas.jaenson@ebc.uu.se 14 Anses,Inrae,écolenationalevététérinaired'Alfort,Umr Bipar,Umr Bipar,Laboratoire deSantéanimale,F-94700 Maisons-Animale,F-94700 Maisons-Alfort; sara.moutailler@anses.fr 15瑞典自然历史博物馆环境研究与监测部,瑞典104 05; thord.fransson@nrm.se 16医学科学系,乌普萨拉大学临床微生物学部分,瑞典751 85乌普萨拉; kenneth.l.nilsson@medsci.uu.se 17医学科学系,动物科学科学中心,乌普萨拉大学,瑞典751 85; bjorn.olsen@medsci.uu.se *通信:tove.hoffman@medsci.uu.se
QIAamp DNA Blood Midi 程序可产生可直接进行限制性消化或扩增的纯 DNA。使用合适的离心机转子,大约 1.5 小时内可同时制备八个样本,手动操作时间约为 30 分钟。QIAamp DNA Blood Midi 试剂盒适用于用 EDTA、柠檬酸盐或肝素处理的全血,样本可以是新鲜或冷冻的。无需分离白细胞。该程序不需要苯酚/氯仿提取或酒精沉淀,只需极少的操作。DNA 在缓冲液 AE 或水中洗脱,可直接加入 PCR 或其他酶促反应,也可以安全地储存在 –30 至 –15°C 下以备后用。纯化的 DNA 几乎不含蛋白质、核酸酶和其他污染物或下游应用的抑制剂。DNA 的大小范围高达 50 kb,主要为约 30 kb 的片段。
hromosomal neuploidy在大多数孕期妊娠损失中造成了大多数,但感染会导致≈15%的早期流产(1)。证明,支持tick骨的性感染与早期妊娠损失的关联很少,并且很大程度上仅限于病例报告和小病例系列。tick虫与妊娠疾病的轶事疾病包括莱姆病,巴贝斯病,立克疾病和埃里希病(2,3)。candidatus midichloriaceae代表了一家细胞内细菌生物家族,最初是在ixodes ricinus tick的卵巢中鉴定出来的,这是欧洲莱姆病的主要副作用。系统发育分析导致提出的念珠菌中氯酸盐的提议分为第三家族,该命令与立克西西亚和质子酸乳腺科不同,但可能更类似于anaplasmata-ceae(4)。该家庭的一些成员拥有独特的室内生命周期,展示了越来越多的非人类宿主(例如水生无脊椎动物,生物学家和各种农场)的端主主义
7。加入8毫升冰冷的PM3缓冲液,并通过将管反转10到15次中和裂解物,立即混合。(不要涡旋!)- 注:•确保培养细胞的密度最佳,缓冲液体积(PM1,PM2,PM3)应与培养体积成比例地增加。(ex。培养体积,60〜120 ml:PM1,8 ml; PM2,8毫升; PM3,8 ml培养体积,120〜240 ml:PM1,16 ml; PM2,16毫升; PM3,16毫升)•处理120〜240 ml细菌时,需要额外的PM1,PM2和PM3的缓冲液体积时,可以单独购买缓冲液。•确保将细胞颗粒完全悬浮在缓冲液PM1中。•添加缓冲液PM2和缓冲液PM3后,完全混合样品混合物。通过离心8。在4°C下以≥5,000xg的距离离心20分钟。(最好在4°C下以15,000〜20,000 xg离心15分钟)。- 如果上清液仍包含悬浮物,则将上清液转移到干净的离心管上,然后重复此离心步骤。质粒的结合9。将上清液从步骤8传递到平衡的PM MIDI列。让其通过重力流动到PM MIDI柱并丢弃滤液。WASH PM MIDI第10列。通过施加12.5 mL PW缓冲液洗涤PM MIDI柱。允许PW缓冲液通过重力流量流经PM MIDI柱并丢弃滤液。
Introduction ................................................................................................................ 7
提取核酸是任何分子生物学研究的起点,因此被认为是一个关键过程。质粒被认为是原核生物进化的主要驱动力,因为它们可以在人群之间迁移,使其成为侧向DNA转移和微生物战争的有效药物。质粒的重要性超出了微生物的进化,因为它们被广泛用作基础研究(例如随机诱变)的遗传工程载体,以及在生物技术学(例如胰岛素生产),合成生物学,农业,农业,农业工程(例如,Bioss的遗传工程)和医学(E. g.g.,g。由于质质剂DNA(pDNA)的有效生产方法的需求已响应于基因治疗和疫苗的快速进步,因为与病毒载体相关的有利安全问题,因此pDNA在基因治疗和疫苗中的快速进步。Himedia的Hipura®用于质粒DNA纯化的预填充墨盒(MIDIPREP)提供了高产量的质粒DNA和无麻烦的自动化溶液,以提取。
提取核酸是任何分子生物学研究的起点,因此被认为是一个关键过程。质粒被认为是原核生物进化的主要驱动力,因为它们可以在人群之间迁移,使其成为侧向DNA转移和微生物战争的有效药物。质粒的重要性超出了微生物的进化,因为它们被广泛用作基础研究(例如随机诱变)的遗传工程载体,以及在生物技术学(例如胰岛素生产),合成生物学,农业,农业,农业工程(例如,Bioss的遗传工程)和医学(E. g.g.,g。由于质质剂DNA(pDNA)的有效生产方法的需求已响应于基因治疗和疫苗的快速进步,因为与病毒载体相关的有利安全问题,因此pDNA在基因治疗和疫苗中的快速进步。从细菌细胞中纯化的质粒DNA可以用内毒素污染至不同的扩展,具体取决于纯化方法。报告表明,内毒素可以降低许多真核细胞系中的转染效率。HIMEDIA的HIPURA®无内毒素质粒MIDIPREP DNA纯化试剂盒的预填充墨盒可提供无内毒素,高产量质粒DNA和无麻烦的自动化溶液,以萃取。
•DNA大小 - 能够恢复基因组和线粒体DNA尺寸片段˃50kb。如果存在,也将回收寄生,微生物和病毒DNA。•DNA产量 - 色谱柱的DNA结合能力为125 µg。通常,哺乳动物组织产生:每毫克骨骼,心脏,肺和脑组织1-3 µg DNA,每毫克肝脏和肾脏3-5 µg DNA。人类全血将产生3-7 µg DNA,每100 µL取样。•洗脱体积 - DNA可以洗脱至200 µL DNA洗脱缓冲液或水。•设备 - 水浴或热块(55°C),离心机或真空源和歧管,微离心,涡流,圆锥管(15 - 50 mL)和微量离心管。•DNA应用 - 使用Quick -DNA™MidiPrep Plus套件分离的DNA可用于生命科学研究(例如下一代SEQ。),基因分型,牲畜育种,兽医研究和常规应用测试。
