*这些作者对这项工作的贡献同样贡献:jingxuan he(juh709@psu.edu),ling-nan zou(lxz7@psu.edu)摘要我们描述了通过sp绘制的肽映射的肽映射,这是一个替代性c(sparc-map),一个方法可以识别两个互动互动的互动蛋白。我们的方法基于细菌宿主内的体内亲和力选择,并使用高吞吐量DNA测序结果来推断蛋白质 - 蛋白质相互作用(PPI)接口的位置。SPARC-MAP仅使用常规微生物技术,而不依赖专门的仪器或重新建立蛋白质复合物的体外;它可以调节以检测PPI在广泛的亲和力上。它可以多路复用以并联探测多个PPI。它的非特异性背景可以精确测量,从而使PPI的敏感检测能够检测。使用SPARC-MAP,我们在(p21-PCNA复合物中恢复已知接口。我们还使用SPARC-MAP来探测嘌呤体,这是六种嘌呤生物合成酶的弱结合的复合物,在那里尚无PPI接口。在那里,我们确定满足底物渠道结构要求的接口;我们还确定了参与多种不同相互作用的蛋白质表面,我们使用现场人体细胞中特定于位点的光叠链链接来验证。最后,我们表明SPARC-MAP结果可以对基于机器学习的结构预测对输出施加严格的约束。
图6。使用Qiagen多路复用PCR加套件有效的19-PLEX PCR。使用Qiagen Multiplex PCR Plus套件的标准条件进行了19个目标(99-955 bp)的多重PCR,而无需进一步优化(QIAGEN)或使用供应商A II的各种热启动DNA聚合酶。使用琼脂糖凝胶进行分析。B分析使用Qiaxcel高级系统。Qiagen多路复用PCR加套件可导致所有目标的特定扩增,而无需优化。尽管使用不同的酶浓度进行了长时间的优化,但使用Supper A II的试剂盒的多重PCR也会导致片段缺失,即使使用较高的浓度也是如此。m:gelpilot 100 bp加梯子。
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TALE 碱基编辑器是最近添加到基因组编辑工具箱中的。这些分子工具是转录激活因子样效应结构域 (TALE)、分裂 DddA 脱氨酶半体和尿嘧啶糖基化酶抑制剂 (UGI) 的融合,它们具有直接编辑双链 DNA 的独特能力,将胞嘧啶 (C) 转化为胸腺嘧啶 (T)。为了剖析 TALE-BE 的编辑规则,我们将数十个靶向核基因组位点的 TALE-BE 的筛选与基于将 TALE-BE 靶位点集合精确敲入细胞基因组的中/高通量策略相结合。后一种方法使我们能够深入了解 cellulo 中的编辑规则,同时排除不同基因组位点之间的表观遗传和微环境差异等混杂因素。利用获得的知识,我们设计了靶向 CD52 的 TALE-BE,并实现了非常高的基因敲除频率(高达 80% 的表型 CD52 敲除)。我们进一步证明 TALE-BE 仅产生微不足道的插入/缺失和副产物。最后,我们将两种分子工具(TALE-BE 和 TALEN)结合起来进行多重基因组工程,产生高水平的双基因敲除(~75%),而不会在两个靶位点之间产生易位。
在每个书签处以及影片结尾处,都有要提出和讨论的问题,如本包中所述。您的角色是确保小组充分涵盖每个要点。每个问题都以粗体显示。这不是脚本 - 您可能希望讨论其他内容,或者可能会出现其他问题,但这些是要涵盖的关键点。
气候变化严重影响了全球森林生态系统,由于温度升高,降水模式转移和极端天气事件,压力木本植物。这些压力威胁着生物多样性,并破坏了森林在碳固换,木材生产和生态系统稳定性中所发挥的重要作用。鉴于树木的少年阶段,传统的森林管理策略,例如选择性育种,无法跟上气候变化的迅速速度。 多路复用基因组编辑,特别是通过CRISPR技术,提供了一种有希望的解决方案,可以加速木本植物中气候富度特征的发展。 通过同时靶向多个基因,多重CRISPR可以有效地修改控制胁迫耐受性,抗病性和其他关键弹性因素的多基因性状。 这项迷你审查研究了多重CRISPR技术在森林管理,育种和农业生态实践中的潜力,展示了它们如何改善树木的弹性并支持可持续林业,以应对气候变化的日益增长的挑战。鉴于树木的少年阶段,传统的森林管理策略,例如选择性育种,无法跟上气候变化的迅速速度。多路复用基因组编辑,特别是通过CRISPR技术,提供了一种有希望的解决方案,可以加速木本植物中气候富度特征的发展。通过同时靶向多个基因,多重CRISPR可以有效地修改控制胁迫耐受性,抗病性和其他关键弹性因素的多基因性状。这项迷你审查研究了多重CRISPR技术在森林管理,育种和农业生态实践中的潜力,展示了它们如何改善树木的弹性并支持可持续林业,以应对气候变化的日益增长的挑战。
大小标准由已知长度的荧光标记 DNA 片段组成,可作为分子标尺。大小标准标记的荧光染料与 MLPA 探针产品不同。当片段根据大小迁移时,毛细管电泳仪中的检测器会检测到大小标准和 MLPA 扩增子的荧光 - 小片段比大片段通过得更快。将每个 MLPA 扩增子的迁移与大小标准的每个片段的迁移进行比较,以确定大小,从而确定 MLPA 扩增子的身份。
– FirePlex 多重测定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 – Fireplex-96 免疫测定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... 9 – 高通量 FirePlex 免疫测定 . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... . ... 9 – Abcam 如何帮助您为工作流程选择合适的多重免疫测定法?.................... ... .... .... .... .11
高效基因敲除和遗传相互作用:IN4MER CRISPR/Cas12a 多重敲除平台 Nazanin Esmaeili Anvar 1,2,* , Chenchu Lin 1,* , Xingdi Ma 1,2,* , Lori L. Wilson 1 , Ryan Steger 3 , Annabel K. Sangree 3 , Medina Colic 1 , Sidney H. Wang 4 , John G. Doench 3 , Traver Hart 1,5,6
在这些书签中以及电影的结尾处,如此包中概述了一些问题要询问和讨论。您的角色是确保小组充分涵盖每个要点。每个问题都是粗体。这不是脚本 - 您可能希望讨论其他内容,或者可能会出现其他问题,但是,这些是要涵盖的关键点。