驾驶员疲劳是导致道路交通事故的重要因素,驾驶员疲劳检测因其重要性而引起了广泛关注。尽管已经提出了许多方法来完成这项具有挑战性的任务,但疲劳机制的特征仍在很大程度上有待研究。为了解决这个问题,我们在本文中开发了一种新颖的多重有限穿透水平可视性图 (Multiplex LPHVG) 方法,该方法不仅可以检测疲劳驾驶,还可以探究大脑疲劳行为。重要的是,我们使用我们的方法从不同受试者在警觉和疲劳驾驶状态下执行模拟驾驶任务时记录的 EEG 信号构建大脑网络。然后,我们使用聚类系数、全局效率和特征路径长度来表征从不同大脑状态下生成的网络的拓扑结构。此外,我们将平均边重叠与网络测量相结合以区分警觉和精神疲劳状态。高精度分类结果清楚地证明并验证了我们的多路复用 LPHVG 方法在脑电信号疲劳检测中的有效性。此外,我们的研究结果还表明,随着大脑从警觉状态转变为精神疲劳状态,聚类系数显著增加,这为疲劳驾驶相关的大脑行为提供了新的见解。
急性腹部感染,例如穿孔腹膜炎和腹腔内脓肿可能是致命的。此外,抗菌(AMR)细菌的传播现在已成为全球一个严重的问题,这使得抗菌选择极为困难(Thompson,2022)。在2019年,据报道,全球感染AMR引起的死亡人数为495万。据报道,这些死亡人数为127万,是由于直接的AMR感染(Thompson,2022)。AMR发生率增加的原因之一是过度使用广谱抗菌剂。在细菌培养测试中,大约需要5天的时间才能完全识别病原细菌并提供抗菌易感性结果(Pardo等,2016)。因此,严重的病例通常需要使用广谱抗菌剂。这种临床状况强调了迫切需要研究快速鉴定病因生物,以选择适当的较窄的蛋白酶抗菌剂。
通过RNA引导的核酸酶(例如SP Cas9)编辑的基因组编辑,已用于许多不同的植物特种中。然而,尚未得到充分记录在多大程度上可以通过多重独立基因座对准。在这里,我们基于高度内含器优化的ZCAS9I基因开发了一个工具包,该基因允许组装核酸酶构建体,该核酸酶构建体表达高达32个单导RNA(SGRNA)。我们使用此工具包探索了两个主要模型物种中多路复用的限制,并报告了无基因八个八个八杆的分离(8 3)Nicotiana Benthamiana和Duodecuple(12 3)拟南芥Thaliana thaliana突变线(分别是T 1和T 2,分别是T 1和T 2)。我们开发了新的本坦氏菌(N. benthamiana)的新颖的反式标记,最重要的是SL -Fast2,可与良好的拟南芥种子植物植物标记物和FCY-upp相当,并基于在存在先例的情况下产生有毒的5-氟中性含量。用九个不同的sgrNA靶向八个基因,并依靠fcy-upp选择非转基因t 1,我们确定了n。benthamiana突变型的n。benthamiana突变线,并具有惊人的高效效率:所有ana-属于所有基因的植物(大约112/11/11/11 target serited)。此外,我们在A. thaliana的24个sgrnas阵列获得了12个基因。效率在a中的显着较低。thaliana,我们的结果表明CAS9的可用性是这种高阶多路复用应用程序中的限制因素。我们通过表型筛选和扩增子测序的结合来识别十二指肠突变系。所呈现的资源和结果为如何使用多路复用来生成复杂的基因型或在功能上询问候选基因的基团。
(未经同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者此版本于 2020 年 6 月 26 日发布。;https://doi.org/10.1101/2020.06.25.170977 doi:bioRxiv preprint
细菌感染可能发生在各种身体组织中,包括呼吸道,尿路,胃肠道和血流。这项研究旨在使用表型和基因型方法鉴定三种重要的致病物种 - 大肠杆菌,克雷伯氏菌和铜绿假单胞菌。细菌分离株最初通过标准诊断测试鉴定,并通过多重PCR确认。将与每种病原体相对应的三个随机选择的分离株进行基因测序,并与NCBI的参考菌株进行比较。此外,从乳杆菌属的氧化锌(ZnO)纳米颗粒的抗生物胶片活性。提取物。使用FTIR,XRD,FE-SEM和AFM对合成的ZnO纳米颗粒进行表征。XRD分析显示出不同的峰值指示晶相,而AFM和FE-SEM显示球形纳米颗粒,平均直径为58.30 nm。该研究还评估了ZnO纳米颗粒抑制生物膜形成的能力。结果表明,样本类型(烧伤,伤口和尿液)与感染病原体之间没有统计学意义的关联(P = 0.37)。多重PCR扩增在28个分离株中成功成功,共同感染如下:57.15%的分离株显示三重感染(所有三种病原体),而在57.14%(E. coli and P. aeruginosa)中观察到双重感染,e.luginosa和46.42%(E. coli and K. pneos and aerug anderos and Aerimonia和46.42%)和46.46%(和46.42%)和46%。分离株的肺炎。用ZnO纳米颗粒处理后观察到生物膜形成的显着降低(P≤0.001)。在50.01%(大肠杆菌),28.58%(铜绿假单胞菌)和17.86%(K。肺炎)中检测到单一感染。测序分析显示,大肠杆菌,铜绿假单胞菌和K.肺炎的参考基因的相似性分别为99%和98%。总而言之,基因型和表型方法对病原体鉴定有效,ZnO纳米颗粒在抑制生物膜形成方面具有显着潜力,为对抗细菌感染提供了有希望的方法。
基于成簇、规则间隔、短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas) 的系统彻底改变了许多生物体(包括植物)的基因组编辑。植物中的大多数 CRISPR-Cas 策略依赖于使用农杆菌进行遗传转化来提供基因编辑试剂,例如 Cas 核酸酶或合成向导 RNA (sgRNA)。虽然 Cas 核酸酶是编辑方法中的恒定元素,但 sgRNA 是靶向特异性的,通常需要筛选过程来识别最有效的 sgRNA。植物病毒衍生载体是将 sgRNA 快速有效地递送到成年植物中的一种替代方法,因为病毒具有基因组扩增和系统运动的能力,这种策略称为病毒诱导的基因组编辑。我们对马铃薯病毒 X (PVX) 进行了改造,以构建一种可在成年茄科植物中轻松表达多个 sgRNA 的载体。使用基于 PVX 的载体,本氏烟基因被有效靶向,在组成性表达化脓性链球菌 Cas9 的转化株系中产生近 80% 的插入/缺失。有趣的是,结果表明 PVX 载体允许表达不间隔 sgRNA 阵列,在成年植物组织中几天内实现高效的多重编辑。此外,可以从受感染组织或受感染植物种子再生的植物中获得无病毒编辑的后代,这些后代表现出高遗传双等位基因突变率。总之,这种新的 PVX 载体可以轻松、快速和高效地表达 sgRNA 阵列以进行多重 CRISPR-Cas 基因组编辑,并将成为跨不同植物物种(尤其是茄科作物)进行功能基因分析和精准育种的有用工具。
简介 在哺乳动物细胞系中产生有利的基因组特征是基因功能研究极为宝贵的策略之一。1,2 基因组编辑主要通过使用传统方法进行,例如 RNA 干扰 3,4 和同源重组。然而,除了染色体 DNA 的自发裂解之外,所需突变体的频率低和特异性低导致了位点特异性核酸酶的发明。最近,成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关 (Cas) 系统为在特定基因组位点快速有效地进行基因编辑打开了一扇有希望的窗口。5,6 CRISPR/Cas9 系统由两个组件组成:向导 RNA (gRNA) 和 Cas9 蛋白。Cas9 蛋白的核酸酶活性可在任何被 gRNA 识别的基因组区域中诱导 DNA 双链断裂 (DSB)。该 gRNA 必须伴随目标基因座中相邻的原间隔基序 (PAM) 序列。7,8 NGG 是化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 的 PAM 序列,是最
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1 中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,2 农业农村部桂林农作物害虫科学观测实验站,桂林,3 中国农业科学院作物科学研究所,国家农作物基因资源与遗传改良重大科学研究设施,北京,4 南京农业大学,植物病虫害监测与治理教育部重点实验室,南京,5 上海交通大学农业与生物学院,微生物代谢国家重点实验室,上海,6 浙江大学生物技术研究所,水稻生物学国家重点实验室,杭州,