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随机饱和诱变生成高度多样化的定向进化文库
为了了解每种野生型氨基酸对不同侧链性质的可及性，我们将所有 20 种氨基酸分为 8 类：非极性（NP、M、I、L、V、A）、极性不带电（PU、S、T、Q、N）、带正电荷（PC、R、K、L）、带负电荷（NC、D、E）、芳香族（Ar、F、T、Y）和三个特殊基团 P、C、G，由于其性质不同，每个基团仅由一个氨基酸组成。通过易错 PCR，每种野生型氨基酸都有一些不可接近的性质类别，如图 4c 所示。此外，在
诱导诱变 - 农业营销服务
根据当前国家有机计划法规的定义，7 CFR 205.2定义的排除方法的术语定义为：用于通过自然条件或过程中不可能的多种方式来对生物进行基因修饰或影响其生长和发育的多种方法，并且不被视为与有机生产兼容。这些方法包括细胞融合，微囊化和大囊化以及重组DNA技术（包括基因缺失，基因加倍，引入外源基因，并通过重组DNA技术实现基因的位置）。这种方法不包括使用传统育种，结合，发酵，杂交，体外受精或组织培养。重要的是要注意，此定义是指在自然条件下不可能的，而在自然条件下不可能。
引文：Saud A Abdulsamad 等人。“基因编辑技术：同源重组、反义 mRNA、RNAi、定点诱变和 CRISPR/
RecA/Rad51家族蛋白诱导的DNA结构的内在动态特性：DNA作为基因组材料可能比RNA更具优势”。美国国家科学院院刊98.15（2001）：8425-8432。
小麦白粉病的诱变揭示了一个控制NLR和串联激酶介导的免疫的基因
blumeria graminis f。 sp。tritici（BGT）是全球重要的真菌小麦病原体。某些小麦基因型包含抗霉菌抗性（PM）基因，这些基因编码了识别特定真菌分泌效应子蛋白的免疫受体，将其定义为活力（AVR）因子。识别AVR因子对于理解小麦抵抗的机制，功能和耐用性至关重要。在这里，我们提出了AVRXPOSE，这是一种通过在PM基因上产生抗病收益来鉴定BGT中AVR基因的方法。我们首先识别六个BGT突变体，并在PM3B和PM3C上获得毒力。他们都有响应AVRPM3 B2/C2基因或其启动子区域内的可转座元件的点突变，缺失或插入。我们进一步选择了PM3A上的六个突变体，旨在识别PM3A识别的尚未识别的AVRPM3 A3，此外还鉴定出预先描述的AVRPM3 A2/F2。令人惊讶的是，所获得的突变体中的PM3A毒力总是伴随着对无关的串联激酶抗性基因WTK4的额外毒力增益。未观察到对11个额外的R基因的毒力，表明PM3A和WTK4的毒力增加是特定的。几个独立获得的PM3A-WTK4突变体在BGT-646中具有突变，该基因编码了推定的，非分泌的Ankyrin重复蛋白。基因分析表明，BGT-646调节效应子的子集
准确的更新的双链测序诱变测定法，可重复检测到低于一十分三百万的突变频率
条显示了用V2化学产生的每个小鼠文库的每样本突变频率，威尔逊二项式置信区间（95％）。条上方的数字代表总突变碱基。与未处理的对照相比，支架上方上方的数字代表每个治疗组的每种组织类型的倍数变化。MF平均为5.7 x 10 -8，小鼠肝对对照样品的MF平均为6.4 x 10 -8。p值是从比较两组的准散孔概括的线性模型中计算得出的，并根据错误的发现率进行了调整以考虑多个比较。（** p值<0.01，*** p值<0.001）仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2024 Twinstrand Biosciences，Inc。保留所有权利。所有商标都是Twinstrand Biosciences，Inc。或其各自所有者的财产。
C08.诱变及其用途
曲霉菌属真菌的致突变作用是由于其含有称为霉菌毒素的化合物，其中包括剧毒的低分子量化合物——黄曲霉毒素。最常见的是黄曲霉毒素B1（AFB1）。具有致突变、致癌、毒性和免疫抑制作用。据估计，约有 45 亿人接触了高剂量的黄曲霉毒素。世界上每年约有55万至60万。新的肝癌病例是由接触高剂量黄曲霉毒素引起的。为此，发达国家纷纷对谷物中黄曲霉毒素的含量作出限制。黄曲霉毒素污染最常发生在谷物、油菜籽、香料、坚果、辣椒和干果中。乳制品也可能受到意外污染。
J. A MER . S OC . H ORT . S CI . 148(6):266 – 275. 2023. https://doi.org/10.21273/JASHS05311-23 CRISPR/Cas9 介导的菊粉双靶向诱变
摘要 。橡胶蒲公英 ( Taraxacum kok-saghyz ) 是一种天然产橡胶的蒲公英，具有成为工业作物的潜力。菊粉是橡胶蒲公英中的储存碳水化合物，其合成与橡胶生产竞争同化碳。我们使用成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白 (Cas) 系统同时靶向编码 1-果聚糖的基因中的两个位点：果聚糖-1-果糖基转移酶基因 (1-FFT)，这是菊粉生物合成中的关键酶。使用发根农杆菌和根癌农杆菌介导的植物转化方法产生具有 CRISPR/Cas9 元件的转基因植物。通过 A 的转化率分别为 71% 和 64%。 rhizogenes 和 A. tumefaciens 介导的转化分别对转基因橡胶蒲公英和根癌农杆菌介导的转化进行了研究。通过限制性位点丢失法和桑格测序证实了诱变。在通过 A. rhizogenes 获得的 13 株转基因植物中，有 6 株显示 1-FFT 基因内的两个靶位点均进行了编辑。使用 A. rhizogenes 介导的转化在 10 周内获得了转基因橡胶蒲公英植物，这比 A. tumafaciens 转化子所需的 6 个月要快得多。在通过 A. tumefaciens 获得的 11 株转基因植物中，有 5 株在两个靶位点都发生了突变。逆转录聚合酶链式反应证实了所有编辑转化子中 Cas9 的表达。A. rhizogenes 介导的双突变转化子和 A. tumefaciens 介导的双突变转化子的菊粉含量都低于野生型植物。此外，A. rhizogenes 介导的转化体的橡胶含量高于野生型植物。因此，本研究验证了使用 CRISPR/Cas9 基因编辑作为橡胶蒲公英中产生有用突变的有效工具，并且可以在未来的作物改良方法中实施。
2023技术报告 - 诱导诱变
DNA：在细胞内发现的双链螺旋分子，其中包含生物体发育和功能所需的遗传信息。氢键连接嘌呤和嘧啶核苷酸碱基对，形成双螺旋结构。核苷酸：由DNA和RNA组成的分子，由含氮的核苷酸酶，磷酸基团和糖组成。DNA中的糖是脱氧核糖，而RNA中的糖为核糖。核碱酶：含氮分子，是核苷酸的组成部分。在DNA中，这些碱是腺嘌呤（a），胞嘧啶（C），鸟嘌呤（G）和胸腺素（T）。DNA碱基搭配在一起，连接了双螺旋的两个链。在DNA的正常情况下，腺嘌呤将与胸骨（A-T）配对，而胞嘧啶将与鸟嘌呤（G-C）搭配。在RNA中，胸腺氨酸被核碱尿嘧啶（U）取代。 核仁酶通常称为碱基。 嘌呤：在DNA和RNA中发现的两类核苷酸酶之一，其中包括腺嘌呤（a）和鸟嘌呤（G）。 嘧啶：在DNA和RNA中发现的两类核苷酸酶之一，其中包括胞嘧啶（C），胸腺嘧啶（T）和尿嘧啶（U）。 DNA聚合酶：在DNA复制过程中负责形成新的DNA副本的一类酶。 在DNA复制过程中，将一个双链DNA分子复制成两个相同的DNA分子。 此过程对于细胞分裂至关重要。 某些DNA聚合酶能够纠正错误，而另一些DNA聚合酶缺乏这种能力或显示误差校正减少。在RNA中，胸腺氨酸被核碱尿嘧啶（U）取代。核仁酶通常称为碱基。嘌呤：在DNA和RNA中发现的两类核苷酸酶之一，其中包括腺嘌呤（a）和鸟嘌呤（G）。嘧啶：在DNA和RNA中发现的两类核苷酸酶之一，其中包括胞嘧啶（C），胸腺嘧啶（T）和尿嘧啶（U）。DNA聚合酶：在DNA复制过程中负责形成新的DNA副本的一类酶。在DNA复制过程中，将一个双链DNA分子复制成两个相同的DNA分子。此过程对于细胞分裂至关重要。某些DNA聚合酶能够纠正错误，而另一些DNA聚合酶缺乏这种能力或显示误差校正减少。转录：将DNA转录为RNA的细胞过程。RNA：一种核酸，其中包含从DNA复制的信息。虽然RNA具有许多功能，但其中许多与在细胞内生产蛋白质有关。翻译：使用RNA携带的遗传信息的细胞过程用于与细胞传达如何将氨基酸连接在一起形成蛋白质（多肽）。RNA序列（通过核糖体）在三个核苷酸的片段中读取，称为密码子，这对应于一个氨基酸。单个核苷酸的变化可能会导致氨基酸链和随后的蛋白质形成的变化。蛋白质：蛋白质是由氨基酸组成的分子，是身体结构的基础。蛋白质在酶，细胞因子和其他活组织中发现。
CRISPR-Cas9 介导亚洲柑橘木虱 (Diaphorina citri) 的诱变
摘要 影响全球柑橘产业的最具破坏性的疾病是黄龙病 (HLB)，其病原体是 Candidatus Liberibacter asiaticus。HLB 主要通过昆虫媒介柑橘木虱 (Diaphorina citri) 传播。为了阻止柑橘木虱引起的 HLB 的快速传播，人们采用了传统的媒介控制策略，例如喷洒杀虫剂、释放天敌和大量引入天然寄生蜂。然而，仅靠这些方法无法遏制疾病的传播。为了通过对柑橘木虱基因组进行特定改造来进一步扩展可用于控制柑橘木虱的工具，我们开发了基于 CRISPR-Cas9 的基因改造协议。到目前为止，由于柑橘木虱卵通常很脆弱且体积很大，因此对柑橘木虱进行基因组编辑一直是一项挑战。本文介绍了收集和准备卵子以将 Cas9 核糖核蛋白 (RNP) 引入早期胚胎的优化方法，以及将 RNP 注射到成年雌性血腔中进行卵巢转导的替代方法。利用这些方法，我们产生了可见的体细胞突变，表明它们适合在 D. citri 中进行基因编辑。这些方法代表了推进 D. citri 研究的第一步，为未来基于基因的控制 HLB 的系统做准备。
利用非整合型Wus2载体增强玉米转化和定点诱变
摘要：高效的遗传转化是快速进行基因功能分析和作物性状改良的先决条件。我们最近证明，使用我们的快速农杆菌介导转化方法，具有 NptII /G418 选择和兼容辅助质粒的新型 T-DNA 双元载体可以有效地转化玉米自交系 B104。在这项工作中，我们实施了非整合型 Wuschel2 (Wus2) T-DNA 载体方法进行农杆菌介导的 B104 转化，并测试了其对难转化自交系 B73 转化和基因编辑的潜力。非整合型 Wus2 (NIW) T-DNA 载体辅助转化方法使用两株农杆菌菌株：一株携带目的基因 (GOI) 构建体，另一株提供 NIW 构建体。为了监测 Wus2 与玉米基因组的共整合，我们将由强组成型启动子驱动的玉米 Wus2 表达盒与新的可见标记 RUBY 相结合，后者产生紫色色素甜菜碱。作为 GOI 构建体，我们使用之前测试过的 CRISPR-Cas9 构建体 pKL2359 进行 Glossy2 基因诱变。当 GOI 和 NIW 构建体都由 LBA4404Thy 菌株递送时，B104 转化频率显著提高了约两倍（10% vs. 18.8%）。重要的是，我们能够使用 NIW 辅助转化方法转化顽固性自交系 B73，并通过省略选择剂 G418 获得了三株无转基因编辑植物。这些结果表明，NIW 辅助转化可以提高玉米 B104 转化频率，并为 CRISPR 技术用于无转基因基因组编辑提供一种新选择。