PANDNA试剂盒包含3个洗涤缓冲液(CW1,CW2和PW1),以提取各种样品类型。CBB套件仅包含2个洗涤缓冲液(CW1和CW2)。缓冲CW1,CW2和PW1作为浓缩物提供。CW1和CW2的最终乙醇浓度使用60%。PW1最终乙醇浓度使用70%。在使用之前,如瓶子上所示,将适当的乙醇量(96-100%)添加到缓冲液CW1,CW2和PW1中。注意:并非所有缓冲区都在每个过程中使用。
采集了 30 位捐献者的唾液样本,其中 90% 的分析前 DNA 质量 >2 µg。从 27 个样本中提取了 HMW DNA,其中 93% 的产量 >500 ng。提取后,使用 Qubit dsDNA BR 检测试剂盒对 DNA 进行定量,并使用 Femto Pulse 系统(安捷伦科技公司)进行表征。使用 SMRTbell ® 制备试剂盒 3.0 为部分样本制备 HiFi 文库,并使用 SPRQ™ 化学方法在 Revio 系统上进行测序。每个样本都在一个 Revio SMRT 测序池上进行测序。表 1 总结了五个代表性样本的测序数据。这些样本产生了 4.7 到 15.9 µg 的 HMW DNA。HiFi 测序产量为 119 到 133 Gb 的 HiFi 数据,每个基因组的覆盖率为 27 到 40 倍,足以进行全面的 WGS 变异检测。 75% 到 95% 的读数映射到人类参考基因组 (GRCh38)。
初始版本2024年10月1日仅研究使用。不适用于诊断程序。©2024加利福尼亚州的太平洋生物科学(“ PACBIO”)。保留所有权利。本文档中的信息如有更改,恕不另行通知。PACBIO对本文档中的任何错误或遗漏不承担任何责任。某些通知,条款,条件和/或使用限制可能与您使用PACBIO产品和/或第三方产品有关。请参阅适用的PACBIO销售条款和条件以及PACB.com/license的适用许可条款。太平洋生物科学,PACBIO徽标,PACBIO,Circulomics,Omniome,Smrt,Smrt,Smrtbell,Iso-Seq,Sequel,sequel,Nanobind,sbb,sbb,sbb,revio,onso,apton,apton,kinnex,peretarget和sprq是Pacbio的商标。
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纳米素是一个新型的磁盘,上面覆盖了高密度的微型和纳米结构二氧化硅,可用于快速提取和纯化高质量的DNA和RNA。高表面积和独特的结合机制使其具有非凡的结合能力,可以在微离心管格式中隔离高纯度,高分子量(HMW)DNA。它使用标准的液化,绑定,洗涤和洗脱程序,对于二氧化硅DNA提取技术是常见的。每个管中使用一个磁盘。但是,与磁珠和二氧化硅自旋柱不同,这些磁珠剪切了大DNA,纳米蛋白磁盘结合并释放了DNA而不破碎的DNA,以将DNA长到巨囊中。
注意紫外线纯度如果在该特定样品类型的预期范围内。通常,从培养的哺乳动物细胞中提取的DNA导致260/230> 1.7和260/280> 1.8的紫外线纯度。紫外线纯度略微超出此范围的样品可能仍然很好地序列。紫外线纯度远远超出此范围的样品应谨慎对待。•由于细胞输入过高导致的裂解不足,纯度可能会降低。我们建议输入
• KingFisher Apex 使用带条形码的 96 深孔样品板(Thermo Fisher 95040450B)。如果仪器未检测到条形码,它将显示错误消息。点击“确定”将允许脚本继续(它仍将适用于非条形码版本的板)。如果检测到错误的板或尖端梳条形码,仪器将显示错误消息(例如,如果插入的是 24 深孔板而不是 96 深孔板)。
如果紫外线纯度在该特定样品类型的预期范围内,则需要它。通常,人类全血DNA的紫外线纯度为260/230> 1.3和260/280> 1.8。紫外线纯度略微超出此范围的样品可能仍然很好地序列。紫外线纯度远远超出此范围的样品应谨慎对待。•DNA纯度可能会受到不当解冻和/或在开始
•哺乳动物红细胞(RBC)通常不包含核,因此不能用于DNA提取•在RBC裂解方法中,首先将RBC从血液样本中裂解,然后从血液样本中取出,然后从白细胞中提取DNA(WBC)(WBC)•使用较高的DNA•使用RBC裂解方法提取量的DNA,并允许在RBC裂解方法中提取量,并将其量化用于RBC裂解方法,以使RBC溶解的量为量,并允许在RBC裂解方法中提取量的量。试剂
纳米生HT CBB试剂盒(102-762-700; 96 rxn)•最多可用于200μl人/哺乳动物血液,非哺乳动物动物血液1,培养的细胞和细菌•预期的HMW DNA产量:血液和培养的哺乳动物细胞和2-10μg的3-15μg
