图 3. Neon NxT 重悬基因组编辑缓冲液在不同细胞类型和靶标的 CRISPR-Cas9 基因组编辑实验中的表现。靶标位点包括 Jurkat 和 K562 细胞的 ACTN、活化原代 T 细胞的 TRAC、HSC 的 B2M 和原代 NK 细胞的 AAVS1。细胞在 10 µL 或 100 µL 反应中进行电穿孔。(A) GFP 供体 DNA 敲入效率报告为 GFP 阳性细胞的百分比。(B) GFP 供体 DNA 敲入后的细胞活力。(C) 敲除效率报告为与未处理对照相比特定靶标位点的减少百分比。对于原代 NK 细胞,通过基因组切割检测 (GCD) 测定确定的插入/缺失效率 (%) 可作为敲除效率的指标。(D) 敲除细胞的电穿孔后活力。
系统组件....................... ... 11 Neon™ NxT 单通道移液器工作站..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 单通道移液器..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 8 通道移液器工作站..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 8 通道移液器工作站.................................................................................................................................................................................. .................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 15 Neon™ NxT 8 通道移液器.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 16 Neon™ NxT 套件.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 16 Neon™ NxT 套件.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. ..................................................................................................................................................................................................................................................................................................18 Neon™ NxT 尖端..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................18 Neon™ NxT 1 通道管.................. ... ........................................................................................................................................................................................................................................................................19 Neon™ NxT 8 通道管.......................................................................................................................................................................................................................................................................19
1 美国加利福尼亚州欧文市加利福尼亚大学欧文分校神经病学系;2 比利时鲁汶大学医院神经病学系;3 比利时鲁汶鲁汶大学肌肉疾病和神经病变实验室;4 加拿大安大略省多伦多大学健康网络 Ellen & Martin Prosserman 神经肌肉疾病中心;5 加拿大安大略省多伦多大学;6 美国德克萨斯州奥斯汀市奥斯汀神经肌肉中心;7 美国弗吉尼亚州里士满市弗吉尼亚联邦大学神经病学系;8 美国加利福尼亚州卡尔斯巴德市南加州神经病学中心;9 西班牙巴塞罗那圣十字圣保罗医院神经病学系神经肌肉疾病科;10 西班牙巴塞罗那圣保罗生物医学研究所;11 比利时根特市 argenx; 12 意大利米兰卡洛贝斯塔神经学研究所 IRCCS 神经免疫学和神经肌肉疾病系;13 德国柏林夏里特医学院神经病学和神经科学临床研究中心;14 法国马赛蒂莫内医院大学神经肌肉疾病和 ALS 参考中心
介绍在此白皮书中,我们将探讨与数字设备发出的蓝光和屏幕眩光有关的日益关注。随着我们对数字屏幕的工作,教育和娱乐的依赖,对我们的视觉舒适性和整体健康的影响已成为一个关键问题。我们对TCL的NXT Paper Technology进行了深入的检查 - 该解决方案专门针对这些挑战。着眼于有害的蓝色降低和反眩光特性,我们将深入研究技术的运作方式,其发展以及为什么代表个人的无与伦比选择。使用RobustTüV,SGS和Eyesafe认证以支持其质量,TCL NXT Paper(NXT Paper)脱颖而出,是屏幕技术中的重要创新。本文的目的是对与蓝光和眩光有关的问题进行彻底理解,并证明TCL NXT Paper如何提供可行的解决方案。我们还将讨论TCL如何在其运营或产品线中利用这项技术。最终,我们旨在清楚地了解TCL NXT Paper如何改善数字体验,从而在越来越多的屏幕主导的世界中增强用户舒适性和健康状况。了解蓝色浅蓝色光是可见光光谱的基本组成部分,可在380至500纳米范围内的人眼中检测到。它在所有可见光中具有最短的波长和最高的能量,其中约占所有可见光的三分之一。但是,并非所有蓝光都同样具有影响力。医学期刊1确定大多数波长范围。某些波长会严重影响我们的健康,尤其是我们的视力和睡眠方式。数字设备的广泛使用导致屏幕时间使用情况增加,这直接增加了我们对有害蓝光的暴露。最近的报告表明,平均而言,人们每天在数字屏幕前花费大约6小时37分钟,在ZS世代中的平均值甚至更高(6-24岁)。2暴露于有害蓝光的激增与几个健康问题有关。研究3表明,长时间的暴露会导致数字眼菌株,也称为计算机视觉综合征。此综合征的特征是诸如干燥的症状
6. 用 2 mL 电解缓冲液填充 Neon NxT 管(对于 10 μ L Neon NxT 吸头,使用缓冲液 E10)。 7. 将 Neon NxT 管插入 Neon NxT 移液器站。 8. 在设备上设置所需的电穿孔方案和脉冲条件。 9. 将预热的细胞培养板从培养箱移到生物安全柜 10. 要将 Neon NxT 吸头插入 Neon NxT 移液器,请按下移液器上的按钮至第二档以打开夹子。 11. 按照下面的板图或表格对样品进行电穿孔。移取样品溶液,将移液器停靠在站上,然后应用相应的电穿孔方案(11a)。每次电穿孔运行完成后,将样品转移到
产品编号 产品描述 单位大小 MPK1025 Neon 转染系统 10 µL 试剂盒 25 x 2 rxn MPK10025 Neon 转染系统 100 µL 试剂盒 25 x 2 rxn MPK1096 Neon 转染系统 10 µL 试剂盒 96 x 2 rxn MPK10096 Neon 转染系统 100 µL 试剂盒 96 x 2 rxn MPT100 Neon 转染管 100 管 我们鼓励您考虑转换到我们改进的 Invitrogen Neon NxT 电穿孔系统,该系统利用相同、可信赖的电穿孔技术,性能相当或更好。有关系统性能的更多信息,我们建议您查看 Neon 与 Neon NxT 比较应用说明。使用 Neon NxT 电穿孔系统,您将受益于 Neon 转染系统的以下相同方面:
Raiser's Edge已担任RFF的CRM超过25年。它被开发和政府事务团队使用,但主要用于筹款目的。由于几个原因,包括成本,使用困难和缺乏系统集成,我们正在考虑改用新的CRM进行筹款。此外,我们可以通过选择一个范围内的CRM,将CRM的使用扩展到RFF的其他部门(总共六个部门),而不仅仅是用于筹款目的。我们正在寻找有关是否要取代Raiser's Edge NXT或保留它并确定改善其使用并更好地将其与其他系统集成在一起的建议。如果我们替换了Raiser's Edge NXT,我们将开放一种企业解决方案,该解决方案将由多个部门或仅筹款解决方案使用,并使用用于满足其他部门需求的其他集成系统。我们愿意考虑一系列场景。
在各种生命科学应用中,通过转染细胞来改变其基因型或表型至关重要。有多种转染方法可供选择,而选择最佳方法通常取决于与特定应用的兼容性。电穿孔是一种物理转染策略,它使用电脉冲在细胞膜上创建临时孔,核酸或蛋白质可以通过这些孔进入细胞。它是一种高效而强大的工具,已被证明在基于基因编辑的有效载荷(如 CRISPR-Cas9 系统和 TALEN)方面具有出色的性能。赛默飞世尔提供研究级 Invitrogen™ Neon™ NxT 电穿孔系统(配备 10uL 或 100uL 试剂盒)和符合 GMP 标准的 CTS™ Xenon™ 电穿孔系统(配备 1mL SingleShot 或封闭式一次性 5-25 mL MultiShot 耗材)。这两种仪器都采用相同的核心技术。在这项研究中,我们已经证明这些平台具有高度灵活性,并且与具有不同有效载荷的多种哺乳动物细胞类型兼容。此外,我们还展示了两台仪器之间电穿孔条件的可扩展性。Neon NxT 系统上的基因编辑条件可以扩展到 Xenon 系统,后者是专为符合 GMP 的细胞疗法生产而设计的平台。
•所有说明,时间表和材料都在课程网站上http://www.doc.ic.ac.ac.uk/~ajd/robotics/。•将在Panopto上记录并在Panopto上记录现场讲座。•从下周开始,每周将进行实际练习。您将使用基于Raspberry Pi和Lego Mindstorms NXT的机器人套件的4-5名学生组成的固定组工作。•将通过演示评估一些实践,这构成了机器人技术的唯一课程工作要素。•学期结束时的考试将测试课程中的所有内容,但与实际练习特别紧密相关。•在EDSTEM上将给出直播时间以外的一般支持。•我们将在学期结束时进行比赛!
图 2. CTS Cas9 的 TCR 敲除效率高于供应商 A Cas9。将每个 Cas9 (7.5 pmol) 和靶向 alpha 和 beta T 细胞受体基因 (TRAC 和 TRBC) 区域的 Invitrogen ™ TrueGuide ™ 合成 sgRNA (7.5 pmol) 混合以创建 Cas9-RNP 复合物。每个 Cas9-RNP 复合物用于使用 Neon 转染系统 (货号 MPK5000) 转染 500,000 个 T 细胞。 72 小时后收获细胞,用 Invitrogen ™ eBioscience ™ 可固定活力染料 (FVD) 紫罗兰 (货号 65-0863-14) 和 eBioscience ™ 抗 TCR a/b 抗体 (货号 12- 9986-42) 染色,然后在 Invitrogen ™ Attune ™ NxT 流式细胞仪上进行分析,并使用基于 NGS 的 TAV 进行基因分型。 (A) TCR KO 效率的流式细胞术数据示例。与供应商 A Cas9 相比,CTS Cas9 的 KO 效率超过 88.7%,而供应商 A Cas9 的 KO 效率为 61.7%。 (B) 基于 NGS 的 TAV 的平均 KO 效率。与供应商 A Cas9 相比,CTS Cas9 在各种目标上实现了更高的平均 KO 效率。所有反应均重复进行三次 (** P < 0.01)。