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暑期课堂上通过视觉选择对果蝇进行 CRISPR/Cas9 基因编辑
(A) 顶部：将目标 Gal4（深蓝色，顶部构建体）与编码 Cas9 的版本 2 (V2) 供体菌株杂交，该菌株由 X 上的 vasa 启动子控制（未显示），而 CyO 上的供体构建体则包含 T2A。LexA 由 floxed 3xP3-RFP、黄色+ 盒标记，两侧是 Gal4 同源臂和 U6 驱动的向导 RNA（CyOHACKy.V2,y +、RFP +）。从上往下第三行：得到的 HACKed 染色体，其中 Gal4 ORF 已被破坏并由 T2A.LexA 替换，由视觉标记黄色+和 RFP+标记。底部：与 hs- Cre 杂交后，黄色 +、RFP + 盒被移除。
无疤痕去除大型抗性岛可导致抗生素的敏感性和增加的鲍曼尼杆菌的自然转化性
摘要在基因组成方面具有巨大的多样性，包括多种推定的抗生素耐药性基因，阿巴岛是鲍曼尼杆菌杆菌多药的潜在贡献者。但是，ABAR对抗生素耐药性和细菌生理学的有效贡献仍然难以捉摸。为了解决这个问题，我们试图准确删除Abar Islands并恢复其插入站点的完整性。为此，我们设计了一种多功能无疤的基因组编辑策略。我们在最近的两个鲍曼尼菌临床菌株中形成了这种遗传修饰：分别携带19.7 kbp和86.2 kbp的Abar1和Abar1岛的菌株AB5075和菌株AYE。然后，在父母菌株及其固定衍生物之间进行抗生素敏感性。通过该岛的开放阅读框（ORF）的预测功能所预期的，抗抗性的抗抗药性在野生型和ABAR11固定的AB5075菌株之间相同。ABAR1具有25个ORF，预测抗生素类别具有抗性，并且AYE ABAR1固定衍生物显示出对多种类别的抗生素的可疑性。此外，ABARS的固化恢复了高水平的自然转化性。的确，大多数阿巴群岛都被插入与自然转化有关的通讯基因中。我们的数据表明，Abar插入有效地失活，并且还原的通信是功能性的。固化始终导致高度转换，因此很容易遗传诱因。ABAR的修改提供了对Abar获取功能的洞察力的见解。
美国与印度之间气候合作的未来
作者感谢印度经济咨询委员会尼蒂·奥亚格（Niti Aayog），美国国务院，美国能源部，美国大使馆，新德里，印度大使馆，华盛顿特区，能源，环境与水委员会，社会和经济进步中心，能源和资源基金会，清洁基金会，及其临时委员会和经济进步中心，及其融入了我们的水平及其梅伯特群落，及其内部委员会和国际培养基。参与此卷。本出版物反映了个人作者的个人研究，分析和观点，并不一定代表其雇主，ORF America，其分支机构或合作伙伴的地位。
DNA转座子通过富集转录因子结合基序
从基因组的非编码区域通过突变依次出现。除其他外，此类突变分析转录并创建一个新的开放阅读框（ORF）。尽管ORF出现的机制有充分的文献证明，但对实现新转录事件的机制知之甚少。然而，在许多物种中，已经报道了基因组所有区域的缺乏和非常突出的转录之间的连续体。在这项研究中，我们使用新组装的基因组和七个果蝇的近交系列的转录组和转录组搜索了从头转录本，该基因组和一个来自六个欧洲和一个非洲人口的近交系列。此设置使我们能够检测Sam ple特定的从头转录本，并将其与其他样品中的同源非转录区以及遗传和基因间控制序列进行比较。我们研究了与转换元件（TES）的关联，并富集了从头开始出现的转录本上游的转录因子基序，并将其与调节元素进行了比较。我们发现，从头的成绩单与TES重叠的频率比偶然性的频率更高。新转录本的出现cor与高鸟嘌呤 - 环蛋白含量和TE表达的区域有关。此外，从头转录本的上游区域高度丰富了调节基序。这种基序在与TES（尤其是DNA TES）重叠的新转录物中更丰富，并且比上游的“非转录同源物”更保守上游。总体而言，我们的研究表明，TE插入对于转录本的出现很重要，部分是通过引入DNA te家族的新调节图案。
1 LeishGEdit 工具箱的 Bar-seq 策略 2
LeishGEdit 引物设计流程为基因组中每个给定的 ORF 设计了总共六个引物序列，以实现 CRISPR-Cas9 基因编辑，从而允许用大量可用标签标记感兴趣基因的 N 端或 C 端，并删除 ORF 的两个等位基因（图 1B 和 C）。设计了两个 sgRNA 引物，一个靶向目标基因的 5'UTR，一个靶向 3'UTR。sgRNA 引物由 T7 RNAP 启动子序列、20 nt sgRNA 靶序列（用于在感兴趣的位点引入 DSB）和 20 nt 与 CRISPR-Cas9 主链序列的重叠组成，从而允许通过 PCR 生成 sgRNA 模板。需要一个包含整个 sgRNA 主链序列 [20] 的额外通用引物来扩增两个 sgRNA。四种引物专为 pPLOT 和 pT 质粒扩增而设计，可以以不同的组合使用 82 来产生供体 DNA。这些引物包括：上游正向引物 (#1)、83 上游反向引物 (#2)、下游正向引物 (#3) 和下游反向引物 (#4)。可以选择性地设计 84 额外引物，以允许使用从 pPOT 质粒模板扩增的供体 85 构建体进行 CRISPR-Cas9 介导的基因编辑 [21]。供体 DNA 引物包含紧邻 sgRNA 靶序列及其 PAM 位点的 30 nt HF 序列 86，以及与 pT、pPLOT 和 pPOT 质粒兼容的引物结合位点 87。虽然上游正向引物和下游 88 反向引物位置始终根据所选的 sgRNA 而变化，但上游反向引物 89 (#2) 和下游正向引物 (#4) 针对每个基因设计在相同的位置。90
分析了地方性环境中的瘟疫反刍动物病毒（PPRV）暴发的时空风险：范围审查
1。引言一种称为Peste des Petits反刍动物（PPR）的病毒会影响小型反刍动物，主要是绵羊和山羊，但它也会感染家畜。PPR病毒（PPRV）是paramyxoviridae属的菌群的单链，非分段的RNA病毒（1）。PPRV的基因组跨越15,948个核苷酸（NT），并结构为六个开放式阅读帧（ORF）。由这些ORF编码的六种结构蛋白是聚合酶（P）或大蛋白（L），融合蛋白（F），磷酸蛋白（P），基质蛋白（M），黑凝集素蛋白（H）和核蛋白（N）。此外，非结构蛋白C和V由ORF转录单元（2）编码。通过使用部分基因序列的系统发育研究，通过系统发育研究从两种结构蛋白N或F中描述了四个谱系（3）这些PPRV的谱系分布在包括非洲，亚洲和欧洲在内的几个地理区域中（4）。所有四个PPRV谱系都存在于非洲，自1940年以来，西非国家一直局部局部病毒。当前的证据表明，谱系I病毒不再循环，因为自2001年以来就没有发现这种血统（5）。血统II主要出现在西非，尽管最近在刚果民主共和国（DRC）和坦桑尼亚报道了这一点（6）。北部和西部的北部都没有报道谱系III，尽管在科莫罗斯群岛以及东北，东部和中非都可以找到它。非洲最常见的血统IV已在15个不同的国家中记录在第15个国家中。（6）。迄今为止，它已在非洲的北部，西部，中部和东部地区进行了确定，并且正在逐渐向南移动。随着PPRV继续散布在以前未感染的地区，数以千万万的家庭小型反刍动物和野生动植物面临感染的风险。但是，在以前未感染的地区发现的PPRV感染以及被感染的国家的谱系混合物共同强调了PPR的地理和时间动态特征（7）。年度全球经济损失估计，这些损失的年度经济损失约为1.45美元，这些损失的一半，这些损失的一半，这些损失影响了非洲和一季度的ASIA。这些损失是由死亡率造成的，死亡率最高为20％，而发病率达到100％（8,9）。由于对绵羊和山羊农民的高影响力PPR，粮食和农业组织（FAO）和世界动物健康组织（以前称为OIE）已正式启动了一项全球旨在消除PPR的计划。
crispr cas9
NHEJ修复途径是最活跃的修复机制，经常导致核苷酸（Indels）的小插入或缺失到DSB位置。由NHEJ介导的DSB修复的随机性具有重要的实际意义，因为表达Cas9和ARNG的细胞群将导致广泛的突变。在大多数情况下，NHEJ在靶DNA中产生了小散析，从而导致氨基酸框架中的缺失，插入或突变导致靶向基因的开放式读数（ORF）中的过早终止密码子。理想的最终结果是突变，靶向基因的功能损失。但是，必须通过实验验证给定突变细胞的“敲除”表型的强度。
内利斯议定书 DV 通知和住宿申请
职务头衔： 组织： 基地： 城市： 州： 值班电话： 抵达日期： 抵达时间： 抵达方式（POV/MilAir（如果是，请提供飞机呼号）/ComAir 等）： 离开日期： 离开时间： 离开方式（POV/MilAir（如果是，请提供飞机呼号）/ComAir 等）： 您是否需要基地内住宿？如不需要，请提供基地外酒店名称： 访问目的： 您请求访问的组织/单位： 提供访客和职务头衔的完整列表： 您为什么选择 NAFB 进行访问？ 您想“告诉”我们什么？ 我们想“告诉”您什么？： 随行配偶的姓名： 配偶的首选姓名： 配偶是否受命？： ORF 礼物交换（如果是，请提供哪种）： 饮料偏好： 食物过敏：
马里兰州阿片类药物赔偿基金支出报告
如上所述，符合条件的特许县有资格在收到阿片类药物补偿基金后 30 天内获得定向减排资金。为了获得资金，其余 50 个市政分区必须按照州-分区协议的要求实施地方减排计划。地方减排计划必须遵守国家和解协议附件 E 中确定的资金要求以及第 7-331 节中确定的限制，该限制将 ORF 的支出限制在大会批准的某些类型的阿片类药物相关用途上，这些用途通常必须是基于证据的用途。这些用途在下面的附录 C 中提供。地方减排计划必须每五年更新一次。经与马里兰州卫生部协商，马里兰州药物过量应对办公室在 2024 财政年度收到、审查并批准了来自九个分区的地方减排计划。