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改进的 LbCas12a 变体具有改变的 PAM 特异性......
Cas12a（以前称为 Cpf1）核酸酶在基因组工程中的广泛使用受到它们需要相当长的 TTTV 原型间隔区相邻基序 (PAM) 序列的限制。在这里，我们旨在放宽这些 PAM 限制，并通过将其相应的 RR 和 RVR 变体的突变与改变的 PAM 特异性相结合，生成了在哺乳动物和植物细胞中活跃的四种 Cas12a 直系同源物的新型 PAM 突变变体。选择表现出最高活性的 LbCas12a-RVRR，使用基于质粒的测定法深入表征其在哺乳动物细胞中的 PAM 偏好。LbCas12a-RVRR 的共识 PAM 序列类似于 TNTN 基序，但也包括 TACV、TTCV CTCV 和 CCCV。经发现，改良的 LbCas12a (impLbCas12a) 中的 D156R 突变以 PAM 依赖的方式进一步提高了该变体的活性。由于 impLbCas12a 和最近报道的 enAsCas12a 变体的 PAM 偏好重叠但仍有差异，它们相互补充，为基因组编辑和转录组调节应用提供了更高的效率。
改进的 LbCas12a 变体具有改变的 PAM 特异性......
Cas12a（以前称为 Cpf1）核酸酶在基因组工程中的广泛使用受到它们需要相当长的 TTTV 原型间隔区相邻基序 (PAM) 序列的限制。在这里，我们旨在放宽这些 PAM 限制，并通过将其相应的 RR 和 RVR 变体的突变与改变的 PAM 特异性相结合，生成了在哺乳动物和植物细胞中活跃的四种 Cas12a 直系同源物的新型 PAM 突变变体。选择表现出最高活性的 LbCas12a-RVRR，使用基于质粒的测定法深入表征其在哺乳动物细胞中的 PAM 偏好。LbCas12a-RVRR 的共识 PAM 序列类似于 TNTN 基序，但也包括 TACV、TTCV CTCV 和 CCCV。经发现，改良的 LbCas12a (impLbCas12a) 中的 D156R 突变以 PAM 依赖的方式进一步提高了该变体的活性。由于 impLbCas12a 和最近报道的 enAsCas12a 变体的 PAM 偏好重叠但仍有差异，它们相互补充，为基因组编辑和转录组调节应用提供了更高的效率。
使用 CRISPR 干扰和扩展的 PAM 序列来调节微生物代谢率
基因组编辑 CRISPR/Cas9 技术已导致人工转录抑制因子（也称为 CRISPR 干扰 (CRISPRi)）的开发。由 crRNA 引导的失活 Cas9 (dCas9) 蛋白可以特异性地结合靶 DNA 序列，包括启动子和操纵子，而不会切割 DNA。原型间隔区相邻基序 (PAM) 序列依赖性在靶向特异性 CRISPRi 的设计中可能是不利的，因为 PAM 序列对于 CRISPR/Cas9 系统的 DNA 切割至关重要。我们在 L-阿拉伯糖诱导的 P BAD 启动子的控制下，在大肠杆菌中构建了一个染色体整合的 dCas9 系统 (1 araBAD : dcas9)。将携带各种 crRNA 的质粒转化到表达 dCas9 的大肠杆菌中，这些 crRNA 具有针对 gal 启动子（-10 区域）和 gal 操纵子中的 galETK 结构基因的靶序列。在有或没有无偿 L-阿拉伯糖的情况下监测细胞生长和/或半乳糖代谢率。靶向转录延长会部分减缓 D-半乳糖消耗和细胞生长，但靶向转录起始会完全抑制 D-半乳糖消耗和细胞生长。此外，RT-qPCR 分析表明，具有几种修饰 PAM 序列的 CRISPRi 可以抑制靶 DNA 的转录。这些结果表明，可以通过使用 CRISPRi 靶向结构基因或调控区域来控制细胞代谢率和细胞生长；此外，松散的 PAM 序列依赖性可以扩展 CRISPRi 的 DNA 靶标。
多巴胺和尿酸的电化学测定
摘要通过使用十二烷基苯甲酸钠（SDBS）和十二烷基硫酸钠（SDS）作为碳糊电电子（CPES）的表面修饰剂（CPES），开发了一种选择性和敏感的方法，用于同时使用十二烷基苯甲酸盐（SDBS）和十二烷基硫酸钠（SDS）来确定多巴胺和尿酸的选择性和敏感方法。在较低的SDS和SDB浓度下，由于表面活性剂与CPE的石蜡的疏水链相互作用，它们在CPE表面形成负电荷的单层。在磷酸盐缓冲溶液中，SDS的表面活性剂的优化浓度为2 mm，SDB的SDB为1 mM（分别为0.1 m，pH 7和pH 6）。与普通CPE相比，用SD（CPE-SD）和用SDB（CPE-SDB）修饰的CPE显示出在0.230 V和0.230 V和尿酸（UA）的电化学反应改善，并在0.345 V时在0.345 V时，由于静电相互作用，由于静电相互作用，在静电相互作用且表面呈稳定的分析和表面上的静电量和表面均可分配为SD和SDESS和SDED的均匀分析。在最佳实验条件下，设计的电极对DA的线性响应从0.53μm到31.6μm，UA从5.95μm到118.97μm。在CPE-SD中发现DA和UA的检测极限为0.26和1.10 µm，而CPE-SDBS的检测限为0.22和0.22和0.38 µm。CPE-SDB和CPE-SD显示出良好的可重复性，可重复性，稳定性和高选择性，可确定血清血清样品中DA和UA。关键字：多巴胺，尿酸，碳糊电极，十二烷基硫酸钠，十二烷基苯甲酸钠
用于基因敲除和转录调控的 PAM 柔性 Cas9 变体的高通量筛选
1. 纽约基因组中心，纽约，纽约州，美国 2. 纽约大学生物学系，纽约，纽约州，美国 3. 这些作者贡献相同 * 电子邮件：neville@sanjanalab.org 关键词：Cas9、诱变、汇集 CRISPR 筛选、CRISPRa、CRISPRi、原间隔区相邻基序
DA PAM 385-64 弹药和爆炸物安全标准
第 2 章 一般安全，第 10 页 迫在眉睫的危险 • 2–1，第 10 页 危害分析和风险评估 • 2–2，第 10 页 人员资格 • 2–3，第 12 页 使用书面程序 • 2–4，第 12 页 人员和爆炸物限制 • 2–5，第 12 页 处理和移动预防措施 • 2–6，第 12 页 内务管理 • 2–7，第 13 页 弹药和爆炸物的测试、拆卸和改造 • 2–8，第 14 页 爆炸物处理训练辅助工具 • 2–9，第 14 页 现场安全 • 2–10，第 15 页 钓鱼和枪支俱乐部 • 2–11，第 15 页 公开演示、展览和庆祝活动 • 2–12，第 16 页 静态或公开展示 • 2–13，第 16 页 军犬爆炸物训练辅助工具 • 2–14，第 16 页 户外娱乐和文化活动 • 2–15，第 16 页 未爆炸弹药安全教育 • 2–16，第 17 页 物料搬运设备 • 2–17，第 17 页 大赦 • 2–18，第 19 页
Omni-ID® Fit 700（全球）-CIPAM
1 引用的性能是使用标准测试方法实现的。读取范围将因读取器硬件和输出功率而异。 2 EPC 和用户内存可重新编程。TID 在制造时锁定。
PAM-7Q - u-blox
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Kikusui - 直流电源 (PAM 系列)
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