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通过失活 HLA I/II 类基因调节剂和破坏免疫突触来生成免疫逃避同种异体 CAR T 细胞
背景：自体 CAR T 细胞疗法彻底改变了血液系统恶性肿瘤的治疗。然而，使用患者的 T 细胞进行制造限制了这些疗法的广泛使用。使用健康供体 T 细胞制造的现成同种异体 CAR T 细胞可能通过提供产品的一致性、即时可用性和可扩展制造的便利性来解决这些限制。然而，对同种异体 CAR T 细胞的临床反应可能受到免疫排斥的限制。以删除 β2-微球蛋白为中心的免疫“隐身”策略避免了 CD8 T 细胞的排斥，但可能引起强烈的 NK 细胞反应性。此外，CAR T 细胞活化后诱导 HLA II 类表达可能会增加 CD4 T 细胞排斥的风险。我们之前表明，RFX5（HLA I/II 类基因的转录调节因子）的失活可有效抵抗 T 细胞排斥并降低 NK 细胞同种异体反应性。在这里，我们描述了一种额外的抗排斥策略，即失活 CD58 和 ICAM-1，它们是同种反应性 T/NK 细胞有效识别和溶解所需的免疫突触的关键组成部分。同种异体 CAR T 细胞中任一基因的敲除均降低了同种异体反应性，并与 RFX5 KO 结合使用可带来更大的生存益处。方法：使用 CRISPR/Cas9 技术敲除 RFX5、B2M、CD58、ICAM-1 和/或 TRAC。在使用同种异体 T 细胞、NK 细胞或 PBMC 的混合淋巴细胞反应 (MLR) 测定中评估了具有隐形修饰的细胞的生存率。在连续刺激测定中评估了 CAR T 细胞的细胞毒性。结果：靶向删除 RFX5、CD58 和 ICAM-1 的 CAR T 细胞表现出增强的生存率，而未经修饰的 CAR T 细胞很快被 HLA 不匹配的 T 细胞消灭（p<0.0001）。 CD58 KO 与 RFX5 KO 的组合增强了 MLR 测定中的逃避（p<0.0001），而未隐藏的对照和 B2M KO 细胞分别被同种异体 T 细胞和 NK 细胞消除。CD58 KO 和 ICAM-1 KO CAR T 细胞中的 HLA 分子表达不受影响，因此不会引发同种异体 NK 细胞反应性。重要的是，CD58 或 ICAM-1 的失活不会影响细胞毒活性或引发 IL-2 独立的 CAR T 细胞生长。结论：靶向删除 CD58 或 ICAM-1 可有效降低同种异体 CAR T 细胞的 T 细胞排斥，而不会触发 NK 细胞排斥或影响效应功能，并与 RFX5 KO 协同作用。现成的免疫逃避 CAR T 细胞具有抵抗排斥和实现改善治疗反应的潜力。
通过化学重编程从冷冻索组织中有效产生人类多能干细胞
米勒1,2，孟彭顿3，安德烈亚斯·拜耶2，卢汉4,5，乔伊·林肯4,5，春刘1,2 1 1,2 1美国威斯康星州医学院生理学和癌症中心，威斯康星州密尔沃基医学院，威斯康星州，美国威斯康星州2美国加利福尼亚州帕洛阿尔托市斯坦福大学4儿科学系，儿科心脏病学部，威斯康星州医学院，美国威斯康星州密尔沃基，美国威斯康星州，美国威斯康星州5个Herma Heart Institute，Wisconsin，Milwaukee，WI，美国威斯康星州，美国，美国摘要摘要的植物学细胞（IPSCC）的植物学分类（IPSCC），该方法与固定型植物相关（IPSCC）（IPSCC）（IPSCC）病毒矢量方法。我们描述了一种新型，有效的化学方法，用于重编程人脐带组织衍生的间充质干细胞（MSC）中诱导的多能干细胞（IPSC）。与以前的脂肪组织和皮肤（如脂肪组织和皮肤）相比，冷冻的脐带组织提供了丰富的，无创的，长期的存储和道德声音细胞来源。我们的发现不仅展示了使用冷冻脐带对细胞进行化学重编程的可行性和安全性，而且还强调了其在再生医学中的潜力，尤其是在开发更安全，更有效的心血管疾病疗法方面。引言化学重编程为产生诱导多能干细胞（IPSC）的病毒方法提供了令人信服的替代方法，这是再生医学和生物医学研究的基石1。在这里，我们首次成功地对从冷冻脐带组织分离的MSC进行了化学重编程。与病毒重编程不同，后者通过具有插入诱变的媒介引入遗传材料，化学重编程采用小分子来超过遗传修饰，从而最大程度地降低了遗传不稳定的风险并增强了安全谱1,2。这种方法不仅减轻了与基因组改变有关的关注，而且还提供了更可控制和可逆的机制，这对于临床应用至关重要。此外，化学方法的可伸缩性和成本效益超过了病毒技术的方法，为广泛的治疗用途和个性化医学提供了更可行的途径3,4。通过解决与病毒载体相关的局限性，化学重编程成为有前途的途径，有可能彻底改变IPSC的产生，以研究和治疗心血管疾病及其他地区。当前的人类化学重编程方法主要是在脂肪或真皮组织1,3的人间充质干细胞（MSC）上进行的。然而，由于多种原因，脐带组织是一种优越的替代方法：它是MSC 5的丰富来源；它的冷冻形式可确保可持续性和易于访问能力，而无需使用诸如血液PBMC 6的侵入性采购方法；来自脐带组织的MSC表现出更高的增殖率，可能会提高重编程过程的效率7。此外，鉴于使用幼粒细胞时IPSC重编程效率要高得多，脐带与老年供体8的血细胞相比，脐带代表了优越的细胞源。它不仅丰富了再生医学的工具包，而且还为创新的治疗策略铺平了道路，这些策略更安全，更有效且在道德上是合理的。
益生菌菌株增强了鸡肉的T细胞反应
摘要：由于抗菌耐药性的增加，禁止家禽生产中的抗生素增长促进剂和其他抗菌剂会导致增加潜在替代品（如益生菌）的喂养。但是，这些饲料添加剂的作用方式尚未完全理解。他们甚至可以直接影响免疫系统。使用原发性培养的外周血单核细胞（PBMC）进行了先前建立的动物体外系统，以研究免疫调节饲料添加剂的影响。在这里，评估了两种益生菌菌株的不同制剂的免疫调节，枯草芽孢杆菌DSM 32315（BS）和B. amyloliquefaciens Cect 5940（BA）的免疫调节。以1：3（PBMCS：Bacillus）为重要BS（CD4+：P <0.05; CD4+CD25+：P <0.01）的比率为1：3（PBMCS：Bacillus）的T DIV和活化的T-助血细胞增加。此外，重要的BS增强了细胞毒性T细胞的增殖和激活（CD8+：P <0.05； CD8+CD25+：P <0.05）。BS的无细胞益生菌培养上清液增加了活化的T-辅助细胞的计数（CD4+CD25+：P <0.1）。 UV灭活的BS增加了细胞毒性T细胞的比例显着（CD8+：P <0.01）。 我们的结果表明，BS的分泌因子可能参与T-辅助细胞激活和增殖，而它可能通过表面接触刺激细胞毒性T细胞。 用不同的BS制备处理后，我们无法观察到对B细胞的任何影响。 此外，我们发现BA制剂对B细胞没有影响。BS的无细胞益生菌培养上清液增加了活化的T-辅助细胞的计数（CD4+CD25+：P <0.1）。UV灭活的BS增加了细胞毒性T细胞的比例显着（CD8+：P <0.01）。我们的结果表明，BS的分泌因子可能参与T-辅助细胞激活和增殖，而它可能通过表面接触刺激细胞毒性T细胞。用不同的BS制备处理后，我们无法观察到对B细胞的任何影响。此外，我们发现BA制剂对B细胞没有影响。用重要的BA处理后的比例为1：3（PBMCS：杆菌），T-辅助细胞的计数和活化的T-助因细胞增加（CD4+：P <0.01; CD4+CD25+：P <0.05）。BA的无细胞益生菌培养物以及紫外线灭活的BA对T细胞增殖和激活没有影响。 总体而言，我们认为这两种不同的芽孢杆菌菌株增强了T细胞的激活和增殖，这表明两种菌株在体外对鸡肉免疫细胞的免疫调节作用。 因此，我们建议服用这些益生菌可以改善鸡的细胞适应性免疫防御，从而可以预防和减少鸡肉养殖中的抗菌药物。BA的无细胞益生菌培养物以及紫外线灭活的BA对T细胞增殖和激活没有影响。总体而言，我们认为这两种不同的芽孢杆菌菌株增强了T细胞的激活和增殖，这表明两种菌株在体外对鸡肉免疫细胞的免疫调节作用。因此，我们建议服用这些益生菌可以改善鸡的细胞适应性免疫防御，从而可以预防和减少鸡肉养殖中的抗菌药物。
IPSC中的MLC1改变会导致星形胶质细胞谱系中的疾病样细胞液泡表型
摘要背景：具有亚皮质囊肿（MLC）是一种涉及白质的罕见和进行性神经退行性疾病，并未被当前疾病模型充分概括。体细胞重编程，以及基因组工程的进步，可以允许建立用于疾病建模和药物筛查的MLC的体外人类模型。在这项研究中，我们利用细胞重编程和基因编辑技术来开发MLC的诱导多能干细胞（IPSC）模型来概括经典MLC影响的神经系统的细胞环境。方法：外周患者衍生的血液单核细胞（PBMC）的体细胞重编程用于开发MLC的IPSC模型。CRISPR-CAS9基于系统的基因组工程也用于创建该疾病的MLC1敲除模型。以2D细胞培养形式进行了IPSC与神经干细胞（NSC）和星形胶质细胞的分化，然后进行各种细胞和分子生物学方法，以表征疾病模型。结果：由体细胞重编程和基因组工程建立的MLC IPSC的多能性具有很好的特征。IPSC随后与疾病相关的细胞类型分化：神经干细胞（NSC）和星形胶质细胞。 MLC NSC的RNA测序分析揭示了与神经系统疾病和癫痫有关的一组差异表达的基因，这是MLC疾病中常见的临床发现。 该基因集可以作为筛查该疾病潜在治疗性的药物筛查的靶标。IPSC随后与疾病相关的细胞类型分化：神经干细胞（NSC）和星形胶质细胞。MLC NSC的RNA测序分析揭示了与神经系统疾病和癫痫有关的一组差异表达的基因，这是MLC疾病中常见的临床发现。该基因集可以作为筛查该疾病潜在治疗性的药物筛查的靶标。在分化与疾病相关的细胞类型 - 星形胶质细胞后，明确观察到了MLC特征液泡，这在对照组中显然不存在。这种出现概括了该疾病的显着表型标记。结论：通过MLC的IPSC模型的创建和分析，我们的工作解决了对MLC相关细胞模型的迫切需求，用于用于疾病建模和药物筛查测定法。进一步研究可以利用MLC IPSC模型以及生成的转录组数据集和分析，以确定这种衰弱疾病的潜在治疗干预措施。关键字：体细胞重编程，CRISPR-CAS9系统，指示分化引言概括性白细胞脑病带有皮层囊肿（MLC）是一种涉及白质的缓慢进行性退化性脑疾病，它是MLC1或GLC1或GLIAL CAMCAM CAMES跨越的病原变异的结果。这种疾病首先是由荷兰的Marjo van der Knaap博士独立发现的（van der Knaap等，1995），印度阿格拉瓦尔社区中的Bhim Sen Singhal博士（Singhal等，1996）。因此，MLC也被称为Van der Knaap-Singhal疾病（Van der Knaap等，2012）。因果变异的三个主要类别是：MLC1中的常染色体隐性突变，一种常染色体隐性隐性和glialcam中的常染色体显性突变（Capdevila-Nortes等，2013）。MLC1是第一个引起MLC并映射到22QTEL染色体的基因（Topçu等，2000； Leegwater等，2001）。MLC1转化为主要在大脑内的星形胶质细胞中表达的蛋白质（MLC1），尤其是在与血脑屏障的星形细胞末端脚接触（Masaki et al。，2012），在PIA MATER中，以及在Synaptic Cleft（Kater等人2023）中存在的星形胶质细胞。MLC患者的结构特征和观察到的大脑缺陷，例如脑水肿，液体填充囊肿，星形胶质细胞的空泡和降低降低，这表明MLC1可能调节
141个基于PBMC的癌症疫苗，由... 产生 建立统一肿瘤突变负担（TMB）的准则：在跨诊断平台TMB量化的变异的计算机评估中 cxcl10和NRF2启用的间充质干细胞振兴了T淋巴细胞，用于打击胶质母细胞瘤 时间成熟了吗？ 332 CRISPR/CAS9基于大型和... 的集成 人类肺肿瘤微环境中的天然杀伤细胞显示免疫抑制功能 内皮激活和应力指数（EASIX）预测同种异体干细胞移植后死亡率：一项前瞻性研究 汽车正在锐化武器 CAR T细胞和HDT/ASCT的组合疗法... 肥胖对NK细胞的抑制作用 SITC临床免疫肿瘤网络（SCION）... 表达IL 的溶瘤疱疹病毒
抽象背景肿瘤突变负担（TMB）定义为询问的基因组序列的每个兆班堡的体细胞突变数量，证明了对鉴定癌症患者的预测性生物标志物潜力，最有可能对免疫检查点抑制剂做出反应。TMB是通过整个外显子组测序（WES）最佳计算的，但是下一代测序的目标面板以时间效率且具有成本效益的方式提供TMB估计。然而，除了潜在的生物信息学管道外，面板大小和基因覆盖范围的差异是跨实验室TMB估计值的已知驱动因素。通过直接比较来自参与实验室的基于面板的TMB估计值，本研究旨在表征基于面板的TMB估计的理论可变性，并提供有关TMB报告，分析验证要求和参考标准一致性的指南，以维持跨平台TMB估计的一致性。方法十一项实验室使用了来自多种癌症（MC3）样本中的癌症基因组多中心突变的WES数据，并使用其自身的生物信息信息线（PANEL TMB）限制在其目标面板覆盖的基因的外部基因的子集中计算了TMB。使用统一的生物信息学管道从整个外显子组中计算出参考TMB值，所有成员都同意（WES TMB）。线性回归分析，以研究所有32种癌症类型的WES和面板TMB之间的关系。在各种WES TMB值下的面板TMB值的可变性也使用95％的预测限制进行了量化。
基于循环细胞因子特征的细胞肺癌 基因设计的巨噬细胞持续存在于实体瘤中，并局部提供治疗蛋白以激活免疫反应 141个基于PBMC的癌症疫苗，由... 产生 建立统一肿瘤突变负担（TMB）的准则：在跨诊断平台TMB量化的变异的计算机评估中 cxcl10和NRF2启用的间充质干细胞振兴了T淋巴细胞，用于打击胶质母细胞瘤 时间成熟了吗？ 332 CRISPR/CAS9基于大型和... 的集成 人类肺肿瘤微环境中的天然杀伤细胞显示免疫抑制功能 内皮激活和应力指数（EASIX）预测同种异体干细胞移植后死亡率：一项前瞻性研究 汽车正在锐化武器 CAR T细胞和HDT/ASCT的组合疗法... 肥胖对NK细胞的抑制作用 SITC临床免疫肿瘤网络（SCION）... 表达IL 的溶瘤疱疹病毒
抽象背景免疫检查点抑制剂（ICI）疗法已大大提高了非小细胞肺癌（NSCLC）患者的总生存率（OS）；但是，它的响应率仍然适中。在这项研究中，我们开发了一个基于机器的基于机器的平台，即基于细胞因子的ICI反应指数（CIRI），以根据外周血细胞因子特征来预测NSCLC患者的ICI反应。方法我们分别在培训和验证队列中分别接受了抗PD-1/PD-L1单一疗法或联合化学疗法的NSCLC患者的123例和99例NSCLC患者。在基线（前）和治疗后6周（治疗期间：EDT）从患者获得的外周血中检查了93种细胞因子的血浆浓度。集合学习随机生存森林分类剂是为了选择特征细胞因子并预测接受ICI治疗的患者的OS。在基线和治疗时分别选择了14个和19个细胞因子，以生成CIRI模型（即PROCIRI14和EDTCIRI19），这两者都成功地鉴定出了两个完全独立的人群中OS较差的患者。在人口水平上，如一致性指数（C-Indices）所示，PROCIRI14和EDTCIRI19的预测准确性分别为0.700和0.751在验证群体中。在单个水平上，CIRI评分较高的患者表现出较差的OS [危险比（HR）：0.274和0.163，以及PROCIRI14和EDTCIRI19的P <0.0001和P = 0.0044]。通过包括其他循环和临床特征，在高级模型中观察到了提高的预测功效（PROCIRI21和EDTCIRI27）。验证队列中的c指数分别为0.764和0.757，而PROCIRI21和EDTCIRI27的HRS分别为0.141（P <0.0001）和0.158（P = 0.038）。结论CIRI模型在确定NSCLC患者的抗PD-1/PD-L1治疗方面具有高度准确且可重复性，并且可能有助于在治疗早期和/或治疗早期进行临床决策。