PBST

IPB-D2鸡的抗病性状

使用 Kohl 和 Ascoli [13] 改进的间接酶联免疫吸附测定法对 IgY 浓度进行定量，并对洗涤和封闭缓冲液的体积、包被抗体的浓度、终止液的类型和微孔板读数仪的波长进行了修改。用紫外线灭菌后，用 2.5 µ g/mL 浓度的山羊抗 IgY 免疫球蛋白 G (IgG) (SAB3700195，Sigma-Aldrich) 作为捕获抗体包被微孔板。用 pH 9.6 的缓冲碳酸氢盐 (0.005 M 碳酸盐碳酸氢盐) 稀释抗体，并将微孔板在 4°C 下孵育过夜。用磷酸盐缓冲盐水和吐温-20 (PBST-20，pH 7.4) 清洗微孔板 3 次。随后用2%牛血清白蛋白（BSA）封闭微孔板（每孔100 µL），37 ℃孵育1 h，用0.05% PBST清洗微孔板3次，加入血清样品至100 µL（1:100稀释），37 ℃孵育1 h。