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关岛2024预防健康和卫生服务区...
执行摘要预防性健康和卫生服务（PHHS）块赠款允许五十（50）个州，哥伦比亚特区，两个（2）个美洲印第安人部落，五（5）个美国领土和三（3）个自由关联的州，以解决其自己独特的公共健康需求和创新和社区驱动方法的独特公共健康需求和挑战。（来源：www.cdc.gov/phhsblockgrant/about.htm）作为美国关岛美国领土的主要公共卫生机构，公共卫生和社会服务部（DPHSS）正在提交此工作计划，相对于PHHS Block Block Block Block Block Block Grant FY 2024（2024年10月至9月2025年2025年10月2025日）预算分配。在PHHS Block赠款咨询委员会的指导下，建议对计划，目标和活动的资金与美国健康人民2030年健康改善计划中的国家健康目标保持一致。资金假设：分配给关岛的2024财年PHHS Block Grant的总奖励总额为396,949.00美元。年度基本分配为$此金额，除了向上述国家，领土和自由相关的国家提供的其他分配，已获得美国立法机关的批准，并由疾病控制与预防中心（CDC）批准。资金将用于支持关岛独特的公共健康需求和挑战，并支付人员，租金，办公家具，设备，用品和间接费用等运营成本。
化学修饰的 AsCas12a 向导 RNA 可改善不同组织中脂质纳米颗粒介导的体内基因编辑
（Cytiva）。LNP 货物是编码工程 AsCas12a 核酸酶和 gRNA 的 mRNA，重量比为 1:1。通过 RiboGreen 测定法（ThermoFisher Scientific）评估 LNP 的包封率大于 80%，多分散性指数 (PDI) <0.2，通过 Zetasizer 分析（Malvern Panalytical，型号 ZSU3205）评估平均直径大小 <105 nm。• 细胞培养处理：用指定浓度的包封 AsCas12a mRNA 的 LNP 处理细胞，并在转染后 72 小时分离 gDNA。原代人肝细胞 (PHH) 的转染包括重组人载脂蛋白 E。进行基于扩增子的下一代测序 (NGS) 以确定编辑百分比。 • 小鼠眼内体内编辑：通过前房内注射将 LNP 递送至每只 hMYOC Y437H（具有 Y437H 突变的人类肌动蛋白基因）敲入小鼠的一只眼中。注射后一周，解剖眼球，从前房分离 mRNA。采用基于转录本的 RT-ddPCR 检测来测量剩余 hMYOC mRNA 的程度。 • 小鼠肝脏内体内编辑：通过尾静脉静脉注射将 LNP 递送至 hMYOC Y437H 小鼠。注射后一周，解剖肝脏，分离 gDNA，并进行基于扩增子的 NGS 以确定编辑百分比。 • 体外结合亲和力测量：将标记的未修饰的向导与重组工程 AsCas12a 和浓度不断增加的修饰“测试”向导混合，在室温下孵育 3 小时，然后在硝酸纤维素印迹膜 (Cytiva) 和 Hybond N+ 膜 (Cytiva) 上进行双重过滤分离。在每个膜上定量荧光标记的未修饰向导，并计算结合的未修饰向导的百分比。标记的未修饰向导的结合百分比降低是由于来自修饰的“测试”向导的结合竞争。