Although PLCP intends to document on an ongoing basis that the non-grandfathered corn ethanol it produces at its Steamboat Rock, Iowa facility through the PLCP Steamboat Rock Corn Process meets the appropriate greenhouse gas (GHG) emissions reduction requirements, EPA has performed a threshold lifecycle GHG emissions analysis based on the information in the PLCP petition to determine if it appears that corn ethanol produced at the如果满足某些条件,设施可能会减少所需的温室气体。本文档中解释的结果分析涉及到2010年3月26日发布的最终规则(75 FR 14670)使用的相同方法和建模的直接应用(“ 2010年3月RFS Rule”)。根据原料的数量以及用于生产一定量的玉米乙醇的原料和能量的数量,对2010年3月RFS规则完成的分析之间的差异是评估更有效的燃料生产过程。基于PLCP请愿书中提供的数据,我们的分析发现,如果PLCP满足本文档中指定的所有条件以表明这种乙醇符合至少20%的生命周期性的清洁空中,则通过PLCP Steamboat Rock玉米工艺产生的非祖父玉米乙醇可能能够成为可再生燃料。2
木瓜蛋白酶样免疫蛋白酶 (PLCP) 是作物保护的有希望的工程目标,因为它们在番茄、玉米和柑橘等主要作物的植物免疫中发挥着重要作用 (Misas-Villamil 等人,2016 年)。病原体分泌的 PLCP 抑制剂种类繁多,凸显了这些蛋白酶在防御各种病原体方面的重要性。例如,番茄中质外体免疫 PLCP 疫霉菌抑制蛋白酶 1 (Pip1) 的消耗会导致对细菌、真菌和卵菌番茄病原体的超敏性 (Ilyas 等人,2015 年)。然而,Pip1 在野生型番茄中的免疫力并不理想,因为 Pip1 在感染过程中受到多种病原体分泌的抑制剂的抑制,例如来自卵菌晚疫病原体 Phytophthora infestans 的胱抑素样 EpiC2B (Tian 等人,2007)。在这里,我们测试了是否可以通过将 Pip1 改造成 EpiC2B 不敏感的蛋白酶来增加基于 Pip1 的对晚疫病的免疫力。为了指导 Pip1 诱变,我们使用 AlphaFold-Multimer 生成了 EpiC2B-Pip1 复合物的结构模型 (Evans 等人,2022)。该结构模型代表了胱抑素 (EpiC2B) 的三部分楔与木瓜蛋白酶 (Pip1) 的底物结合槽之间的经典相互作用。该模型表明,由于 Pip1 与 EpiC2B 的相互作用表面大于底物结合槽,因此可以对 Pip1 进行工程改造以防止抑制,而不会影响 Pip1 底物特异性(图 1a)。我们选择了九个残基对 Pip1 进行定向诱变,这些残基预计会直接与 EpiC2B 相互作用,但不在底物结合槽中(图 1a)。为了最大程度地破坏蛋白酶-抑制剂相互作用,我们将这些残基替换为带相反电荷的大氨基酸。随后