开发活体成像技术以提供染色质在活细胞中如何组织的信息对于解释生物过程的调节至关重要。在这里,我们展示了基于 CRISPR/Cas9 的活体成像技术的改进。在这种方法中,sgRNA 支架与 RNA 适体融合,包括 MS2 和 PP7。当死 Cas9 (dCas9) 与嵌合 sgRNA 共表达时,标记 MS2 和 PP7 适体的荧光外壳蛋白 (tdMCP-FP 和 tdPCP-FP) 被招募到目标序列中。与之前使用 dCas9:GFP 的工作相比,我们表明,使用基于适体的 CRISPR 成像构建体,瞬时转化的本氏烟的端粒标记质量得到了改善。标记受适体拷贝数的影响,受启动子类型的影响较小。相同的结构不适用于稳定转化植物和根中的重复标记。RNP 复合物与其靶 DNA 的持续相互作用可能会干扰细胞过程。
新草案序言部分(PP1至PP4)提及了此前有关和平利用外层空间法律框架的决议,旨在促进国际合作,利用空间技术实现可持续发展目标,落实“空间2030”议程。PP5至PP7回顾了建立信任措施、对外层空间活动长期可持续性的新威胁以及改善信息交流以加强外层空间作业安全性的必要性。PP8至PP10承认外空委在提高各国透明度和信任度以及促进外层空间活动长期可持续性方面的作用。
(PP7) 注意到关于可持续卫生筹资、全民健康覆盖和社会健康保险的 WHA58.33 号决议(2005 年)、关于通过采取行动解决健康社会决定因素减少卫生不平等问题的 WHA62.14 号决议(2009 年)、关于可持续卫生筹资结构和全民覆盖问题的 WHA64.9 号决议(2011 年)、关于提高药品、疫苗和其他卫生产品市场透明度的 WHA72.8 号决议(2019 年)、关于加强突发卫生事件防范:实施《国际卫生条例(2005)》的 WHA73.8 号决议(2020 年)、关于加强药品和其他卫生技术的本地生产以改善获取机会的 WHA74.6 号决议(2021 年)、关于健康社会决定因素的 WHA74.16 号决议(2021 年)以及关于福祉和健康促进的 WHA75.19 号决议(2022 年);
s1 -pp1:Marius Husanu; “ Al掺杂的SRTIO 3光催化剂,其性能提高”。s1 -pp2:mihaela botea; “批量分级(BA,SR)TIO 3结构具有增强的热稳定性”。s1 -pp3:liviu nedelcu; “ BA 1-X SR X TiO 3 /聚乙烯复合材料中的热漂移通过宽带介电光谱研究”。s1 -pp4:Oji Babatunde和Emmanuel Imoru; “使用稻壳灰的合成无形二氧化硅开发的基于mullite的陶瓷的形态和相检查”。s1 -pp5:Marius Cristian Cioangher; “用于成骨的应用的SR和GA掺杂的钛酸钡压电法”。s1 -pp6:mihaela bojan&cristian udrea; “用于土壤中重金属检测的Terahertz时域光谱”。S1 -PP7:Cristina Stefania Florica; “基于聚二苯胺和多壁碳纳米管的复合材料与羧酸基团在能量储存中的应用官能化”。 s1 -pp8:teodora burlanescu; “在过滤过程中使用的SERS支持和膜,含有用于应用的聚(乙烯基氯化物)的复合材料”。 S2 -pp1:Lucian Dragos Filip; “在多层异质结构中对绝缘体层在极化方向稳定性中的作用的研究”。 S2 -PP2:Liliana Marinela Balescu; “异质结构中铁电成分的Wurtzite III-V材料”。S1 -PP7:Cristina Stefania Florica; “基于聚二苯胺和多壁碳纳米管的复合材料与羧酸基团在能量储存中的应用官能化”。s1 -pp8:teodora burlanescu; “在过滤过程中使用的SERS支持和膜,含有用于应用的聚(乙烯基氯化物)的复合材料”。S2 -pp1:Lucian Dragos Filip; “在多层异质结构中对绝缘体层在极化方向稳定性中的作用的研究”。S2 -PP2:Liliana Marinela Balescu; “异质结构中铁电成分的Wurtzite III-V材料”。
(pp7)对母亲,新生和儿童死亡的可预防悲剧以及对孕产妇死亡率的直接原因的认知1被确定为产后出血,eClampsia和eClampsia和eClampsia和Eclampsia和Eclampsia和Eclampsia,seppsis,sppsis,Embolism和Unsake ate Script Who型号的妇女妇女的损害,而多责任则是Mortal the Mortheration the Morter the Mortheration-2认识到孕产妇死亡的间接原因,包括艾滋病毒/艾滋病,贫血,疟疾,糖尿病,心脏呼吸疾病,结核病和营养不良,随着孕产妇死亡的一部分的比例而稳步增加,因此需要增强国家健康基础设施和机构的急诊和及时的临时性,并且作为急诊症,临时次数,作为先前的信息,促进临时性,并作为先前的诊断和临时,促进了您的临时,朝止,促使您的出生效果,朝着临时,促使您的诊所和临时及疟疾,腹泻和先天异常是5岁以下儿童死亡的主要原因;而且,除非我们提供最需要的质量和何时质量的有效干预措施,否则我们将不会在2030年之前朝着普遍的健康覆盖范围迈进;
1 国家战略框架 I 2001-2006、国家战略框架 II 2007-2012、巴基斯坦艾滋病战略 III 2015-2020、巴基斯坦艾滋病战略 III(2017 年修订版)2017-2021。 2 世卫组织将艾滋病毒集中流行定义为艾滋病毒在一个或多个特定亚群中迅速传播,但在一般人群中尚未完全确定的流行。https://www.who.int/hiv/pub/guidelines/arv2013/intro/keyterms/en/ 3 这是该国自 2003 年以来第九次此类疫情。 4 确实,这些战略被用于设计由全球基金资助的部分项目。但这忽略了国家或省级战略的重点,该战略旨在指导整个艾滋病项目,无论资金来源如何。 5 例如,请参见下文第 3 节中关于目标结果的数据 6 第 48 页和第 50 页《2019 年国家艾滋病毒项目审查》 7 第 7、51-2 页,PAS III 2017 年修订版 8 第 9-10 页,PAS III 2017 年修订版 9 第 6-8 页,PAS III 2017 年修订版 10 第 48 页《2019 年国家艾滋病毒项目审查》
剪接是去除前 mRNA 片段(称为内含子)同时将片段(称为外显子)连接在一起形成成熟 mRNA 的过程 1 。可变剪接是一种现象,其中基因的不同外显子片段剪接在一起形成具有不同序列的成熟 mRNA,大大扩展了单个基因编码的蛋白质库。可变剪接过程深深嵌入基因调控网络中,并控制 90% 以上的人类基因的基因异构体表达 2 。鉴于其普遍性,RNA 剪接失调与许多疾病有关也就不足为奇了 3 – 5 。RNA 测序是一种强大的工具,可用于“读取”转录组并识别不同细胞类型、条件和疾病中可变剪接的变化 2、5、6。但是,缺乏一种可扩展的工具来精确且可逆地“编写”可变剪接。尽管针对特定基因异构体进行降解的异构体特异性 RNAi 或异构体特异性 cDNA 过表达可用于扰乱异构体水平 7、8,但可能无法保持靶基因的整体表达水平。虽然剪接转换反义寡核苷酸 (ASO) 可有效扰乱剪接,甚至已进入临床试验 9,但它们的成本对于大规模研究而言过高,并且需要筛选许多设计以确定有效的靶序列。此外,由于 ASO 本质上是瞬时的,因此它们不适用于需要稳定或可诱导表达的用例。RNA 调节蛋白与异源 RNA 结合结构域的融合,例如 Pumilio/PUF、MS2 外壳蛋白 (MCP)、PP7 外壳蛋白 (PCP) 和 λ N,已经允许人工调节 RNA 过程 10 – 15。例如,通过工程化的 PUF 结构域将富含丝氨酸或富含甘氨酸的结构域束缚到外显子上,分别诱导它们的包含或排除12。然而,这些人工 RNA 效应分子需要蛋白质工程或在靶 RNA 中插入人工标签,并且依赖于短识别序列,这限制了靶向灵活性和特异性。遗传学和表观遗传学领域极大地受益于基于 RNA 引导的 DNA 靶向 CRISPR-Cas 系统的技术的爆炸式增长 16。我们,以及其他一些人,已经成功地实施了分子工具来修改目标 DNA 位点的遗传序列或表观遗传状态 17-25。CRISPR 介导的 DNA 水平基因编辑方法已被用于扰乱剪接(在剪接位点进行碱基编辑/插入缺失或切除整个外显子)19-21。然而,由于共享同一 DNA 片段的 DNA 顺式调控元件(例如转录因子结合位点)可能受到干扰,因此这些方法可能会产生混淆效应。此外,使用 CRISPR 介导的 DNA 缺失或突变方法很难促进外显子的插入。首次证明了使用 CRISPR 靶向 RNA 的激动人心的前景,即将最常用的 DNA 靶向 SpCas9 转化为 RNA 核酸酶“ RCas9 ”,并添加了 PAMmer - 一种寡核苷酸,当与靶 RNA 结合时,会模拟 SpCas9 结合所需的原型间隔区相邻基序 (PAM) 19 。虽然将 RCas9 靶向重复序列不需要 PAMmer 26 ,但重复序列仅占所有 RNA 顺式调控元件的一小部分。继 RCas9 首次报道之后,其他 CRISPR/Cas9 系统也被发现可在体外与单链 RNA 结合 27 、 28 ,但缺乏它们在哺乳动物细胞中体内 RNA 结合的证据。最近发现了来自细菌 CRISPR 系统的 RNA 引导的 RNA 核酸酶 29 – 31 。它们对哺乳动物细胞的适应不仅允许可编程的 RNA 降解 29、31、32,而且还可用于设计新功能,例如 RNA 序列编辑 30、活细胞 RNA 成像 32 和诊断 33。特别是,CasRx 是从 Ruminococcus flavefaciens 中分离出来的最近鉴定出的 IV-D 型 CRISPR-Cas 核糖核酸酶
