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利用多种 V 型 CRISPR 进行无 PAM 诊断
V 型 CRISPR-Cas 效应子通过促进核酸生物标志物的检测，彻底改变了分子诊断。然而，它们依赖于目标双链 DNA (dsDNA) 上原间隔区相邻基序 (PAM) 位点的存在，这极大地限制了它们作为诊断工具的灵活性。在这里，我们提出了一种名为 PICNIC 的新方法，该方法只需对当代 CRISPR 检测方案进行约 10 分钟的简单修改，即可解决基于 CRISPR 的诊断的 PAM 问题。我们的方法包括通过高温和高 pH 处理将 dsDNA 分离成单个单链 DNA (ssDNA) 链。然后，我们以无 PAM 的方式使用多种 Cas12 酶检测释放的 ssDNA 链。我们通过成功将 PICNIC 用于 Cas12 家族的三种不同亚型（Cas12a、Cas12b 和 Cas12i）的无 PAM 检测，展示了 PICNIC 的实用性。值得注意的是，通过将 PICNIC 与含有 crRNA 的截短 15 核苷酸间隔区相结合，我们证明了使用 CRISPR 进行临床上重要的单核苷酸多态性的 PAM 独立检测。我们采用这种方法检测 HIV-1 的耐药变体（特别是 K103N 突变体）的存在，该变体在突变附近缺乏 PAM 位点。此外，我们成功地将我们的方法应用于临床样本，通过在 HCV 基因组中无 PAM 位点以 100% 特异性检测和基因分型 HCV-1a 和 HCV-1b 变体。总之，PICNIC 是一种简单但具有突破性的方法，它通过消除 PAM 序列的限制提高了基于 CRISPR-Cas12 的诊断的灵活性和精确度。
北方邦新再生能源发展署
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diyasaru newslwtter no-06
Diyasaru公园于2023年4月7日下午3点至下午6点举办了一次“春季野餐”活动，提供了一系列引人入胜且娱乐性的活动，旨在学习大自然。大约有25（25）个孩子参加了此活动。自然步道通往蝴蝶花园，贝里采摘，寻宝游戏，艺术和手工艺会议以及托儿所押韵，是为了了解和娱乐孩子的主要活动。该活动还以野餐和零食为特色，使孩子们可以在新颖的环境中享用小吃并彼此互动。这些活动旨在教育儿童关于自然栖息地保护我们周围其他生物的重要性。作为记住Diyasaru春季野餐的一种方式，提供了印刷的小组照片和自然主题的礼物。
莱热-莫尔济讷滑雪场的滑雪道地图
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无标题 - swf-wc.usace.army.mil
2022 年 7 月 3 日 — 美国陆军工程兵团东部。船坡道。礼宾码头。露营地。公园道路。主要道路。次要道路。休息室。停车场。野餐亭。惠特尼湖。
娱乐指南
道格拉斯公园社区协会的年度股东大会于11月21日举行，当时当选董事，并任命了2023/24会计年度的审计师。您可以在我们的网站douglasparkcc.org上找到我们的年度报告。董事会目前正在关注2022年需求评估中社区成员的基于DPCA战略计划的意见，并致力于对需求评估的关键发现，其中包括：•对Douglas Park现有的Wading Pool转换的大声而明确的支持； •需要更多的面对面互动。可以通过道格拉斯公园（Douglas Park）的咖啡馆促进这种互动，更多的长凳，野餐桌和野餐庇护所； •渴望更好的健身机会，其中可能包括增强的健身工作室中心和健身工作室（例如瑜伽和自旋）。
火之谷和 Rob Jaggers 露营地的商业计划
罗斯威尔实地办公室 (RFO) 负责管理斯坦顿堡 - 雪河洞穴国家保护区 (NCA) 的火谷休闲区 (VOF) 和罗布·贾格斯营地 (RJ)，这两个营地都位于新墨西哥州林肯县，属于第一国会选区。VOF 的建立是为了向公众提供进入美国大陆最年轻的熔岩流之一的通道和保护。该场地已开发为白天和夜间使用，设施包括游客中心、卫生间设施、两条解说小径、露营和野餐地点、房车连接、场地主人等。RJ 是 NCA 的一个营地，提供白天和夜间使用，设施包括卫生间设施、两条解说小径、露营和野餐地点、房车连接、场地主人等。文档正文中包含了可用设施的更详细描述。