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用于生成trichoderma koningiopsis的原生质体和质粒DNA
转换方案可以在一天之内进行PEG介导的转换和ATMT，而对于电穿孔和LiPofection，这两者都可以在半天内完成。但是，材料和设备设置部分中列出的缓冲区和材料的早期准备是必不可少的。要准备培养物，必须根据所选技术在3到5天之间生长真菌。菌丝体可以在3天后在液体培养中产生，但是对于孢子，必须在固体培养基上生长4-5天。转化后，必须将真菌种植2周，在此期间需要3个亚文化才能获得均应转化剂。全部，转换的时间表在3到4周之间。使用质粒PDHT/SK-CEP进行所有实验，为此，骨架是从Zhihua Zhou（addgene质粒＃92126）获得的。7
DNA 20 kb质粒和线性套件应用指南
C Reagents, Plate Layouts, and Methods................................................................................74 Reagent Set............................................................................................................................ 74 Plate Layouts.......................................................................................................................... 75方法................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 77 30厘米毛细管的条件方法................................................................................................................................................................................... Capillaries.....................................................80 Shutdown Method for 30 cm Capillaries............................................................................ 81 Capillary Rinse Method for 30 cm Capillaries.................................................................... 82 Conditioning Method for 50 cm Capillaries........................................................................ 83 Linear dsDNA Separation Method for 50 cm Capillaries....................................................84 Shutdown Method for 50 cm Capillaries............................................................................ 86
构建，管理和分析质粒库的最终指南
例如，要研究基因在疾病模型中的作用，您可以构建由基因的各种功能域或具有缺失域和靶向突变的变体组成的质粒文库。以这种方式，您可以破译该基因的生物学作用，基因的功能结构域以及与该基因功能相关的关键氨基酸残基。此外，您可以根据正在从事的不同项目以及用于制备质粒DNA的过程（研究与临床等级材料或简单的DNA Prep与哺乳动物细胞的无内毒素质粒准备）创建质粒文库。
fcεriαCRISPR/CAS9 KO质粒（H）：SC-416948
定期间隔间隔的短篇小学重复序列（CRISPR）和CRISPR相关蛋白（CAS9）系统是ARCHEA和细菌用于降解异物（4,6）的适应性免疫反应防御机制（4,6）。该机制可以用于其他功能，包括用于哺乳动物系统的基因组工程，例如基因敲除（KO）（KO）（1,2,3,5）。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除（Gecko）V2库中得出的指导RNA（GRNA）序列来鉴定和裂解特定基因，该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除（Gecko）V2库（3,5）。
1. 质粒构建体设计 2. DNA 合成 3. ...
慢病毒 (LV) 具有广泛的应用，常用于临床基因治疗以及 CAR-T 细胞工程。该过程可能繁琐而复杂，但慢病毒载体与传统逆转录病毒基因递送系统相比具有一系列独特优势。这五个步骤对于生产慢病毒以增强您的下游研究至关重要。
碳纳米管介导的质粒 DNA 在水稻叶片和种子中的传递
摘要：CRISPR-Cas 基因编辑技术提供了精确修改作物的潜力；然而，由于组织培养过程冗长且基因型特异性，体外植物转化和再生技术存在瓶颈。理想情况下，植物体内转化可以绕过组织培养，直接产生转化植物，但有效的植物体内传递和转化仍然是一个挑战。本研究探讨了有可能直接改变生殖系细胞的转化方法，从而消除了体外植物再生的挑战。最近的研究表明，装载质粒 DNA 的碳纳米管 (CNT) 可以扩散穿过植物细胞壁，促进外来遗传元件在植物组织中的瞬时表达。为了测试这种方法是否是植物体内转化的可行技术，利用带有报告基因的叶片和离体胚浸润，将 CNT 介导的质粒 DNA 传递到水稻组织中。定量和定性数据表明，CNT 有助于质粒 DNA 在水稻叶片和胚胎组织中的传递，从而导致 GFP、YFP 和 GUS 的瞬时表达。还利用靶向八氢番茄红素去饱和酶 (PDS) 基因的 CRISPR-Cas 载体开展实验，将 CNT 传递到成熟胚胎中，以创建可遗传的基因编辑。总体而言，结果表明，基于 CNT 的质粒 DNA 传递似乎有望用于植物体内转化，进一步优化可以实现高通量基因编辑，从而加速功能基因组学和作物改良活动。
如何实现质粒制造中的成本和质量目标
该行业已经对缺乏监管指导/严格性做出了反应，并提供了许多不同的“ GMP” pDNA产品（图2）。另外，Thermo Fisher很高兴引入GMP-NOW™PDNA，该pDNA通过全面应用CGMP实践并提供了标准文档。与“ GMP样” pDNA相比，这提供了降低的污染风险，并可以轻松申请CMC，从而实现了质粒制造中的成本和质量目标。
将质粒 DNA 和杆状病毒 DNA 共转染（同源重组）到 SF9 细胞中
1. 每瓶接种 5x10 6 个 SF9 细胞，另留一个瓶作为阴性对照。2. 按照 A 部分中概述的方法，使用以下体积和量：10uL 杆状病毒 DNA（0.1ug/uL）2ug 质粒 DNA 1mL 转染缓冲液 B 5mL 未添加的 Grace 培养基洗涤液 1mL 转染缓冲液 A 5mL 未添加的 Grace 培养基洗涤液 7mL TMN/FH
ApE，质粒编辑器：免费提供的 DNA 操作和可视化程序
DNA 可视化软件必须 1) 注释特征并以图形方式描述 DNA 特征，2) 模拟分子克隆技术，3) 生成具有视觉吸引力的图形输出。优秀的 DNA 可视化软件将意义赋予 DNA 碱基串。从根本上讲，这需要灵活的注释 - 将名称应用于区域，以及功能区域的可视化 - 应用图片来显示序列区域之间的空间关系。每一段 DNA 都应标注其生物学相关属性。此外，生物学家必须能够识别对特定重组技术有用的子序列，例如限制性酶识别序列、重组酶识别序列和重叠末端序列。优秀的 DNA 软件还提供对常见 DNA 操作（例如限制性消化或 Gibson 克隆）的强大计算机模拟。通过计算机操作 DNA，生物学家可以确保重组构建体包括功能完整的片段，这些片段具有顺序和框架内的 DNA。换句话说，优秀的软件允许研究人员综合工作计划。这可能是从所需产品开始在计算机上反向工作以确定所需的输入。相反，它允许研究人员从给定的一组可用质粒开始，并在虚拟实验室中工作以生成可能的产品。最后，可视化软件对于确定分析结果（DNA 序列、诊断 PCR 或限制性消化）是否产生了预期的产品非常有用。科学家可以使用该软件来比对序列或模拟每个步骤的凝胶以确认他们的工作。最后，好的 DNA 软件可以生成具有灵活细节级别的视觉上令人愉悦的输出。这种表示应该可以轻松地以开放且广泛使用的文本或图形格式导出。例如，文本输出可用于生成课堂报告、学生论文或供出版的手稿。同样，图形输出可用于生成会议海报或课堂报告或会议演示的幻灯片。
在常用合成生物学质粒中防止质粒多聚体形成
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