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质粒
工程细菌基因组或克隆为细菌人造染色体（BAC）的外源DNA取决于辅助质粒的使用，这些质粒的用法将所需的工具暂时输送到细菌中以进行修饰。完成了一项挑剔的作用后，需要固化辅助质粒。为了使这种有效的质粒通过条件扩增子维持或携带反选择标记。在这里，我们描述了可以通过化学诱导或抑制来维持或治愈的新条件质粒。我们的方法基于携带Ori6Kγ起源的质粒的依赖性，其复制起源于蛋白质的存在。基于ORI6Kγ的质粒是严格调控的条件构建体，但通常需要特殊的大肠杆菌菌株才能进行操作。为了避免这种情况，我们将π蛋白表达放在共表达的条件阻遏物的控制下。通过给药或去除化学物质来调节质粒的维护与迄今为止应用的任何其他条件扩增子完全兼容。在这里，我们描述了诱导位点特定重新组合的方法为例。但是，可以使用相同的策略来为基因组编辑方法（例如λred重组酶或CRISPR/CAS成分）的任何其他瞬时成分构建合适的辅助质粒。
文章电喷雾海藻酸盐纳米粒子作为 CRISPR 质粒 DNA 递送载体：制备、优化和表征
摘要：随着成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白 (Cas) 系统的出现，治疗性基因编辑变得越来越可行。然而，成功实施基于 CRISPR/Cas9 的疗法需要安全有效地在体内递送 CRISPR 成分，这仍然具有挑战性。本研究介绍了使用电喷雾技术成功制备、优化和表征装载两个 CRISPR 质粒的海藻酸盐纳米粒子 (ALG NPs)。该递送系统的目的是编辑另一个质粒（绿色荧光蛋白 (GFP)）中的靶基因。评估了配方和工艺变量的影响。CRISPR ALG NPs 的平均尺寸和电位分别为 228 nm 和 − 4.42 mV。在保持有效载荷完整性的同时实现了超过 99.0% 的包封率。通过衰减全反射傅立叶变换红外光谱法确认了 ALG NPs 中 CRISPR 质粒的存在。测试表明，纳米粒子具有细胞相容性，并成功地将 Cas9 转基因引入 HepG2 细胞中。纳米粒子转染的 HepG2 能够通过在 GFP 基因中引入双链断裂 (DSB) 来编辑其目标质粒，这表明包裹在海藻酸盐纳米粒子中的 CRISPR 质粒具有生物活性。这表明该方法适用于体外或离体生物医学应用。对这些纳米粒子的未来研究可能会产生适合体内递送 CRISPR / Cas9 系统的纳米载体。
lysmd3 crispr/cas9 ko质粒（M）：SC-429789
定期间隔间隔的短篇小学重复序列（CRISPR）和CRISPR相关蛋白（CAS9）系统是ARCHEA和细菌用于降解异物（4,6）的适应性免疫反应防御机制（4,6）。该机制可以用于其他功能，包括用于哺乳动物系统的基因组工程，例如基因敲除（KO）（KO）（1,2,3,5）。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除（Gecko）V2库中得出的指导RNA（GRNA）序列来鉴定和裂解特定基因，该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除（Gecko）V2库（3,5）。
CA150 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m): sc-424994
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas9) 系统是一种适应性免疫反应防御机制，古细菌和细菌利用该机制降解外来遗传物质 (4,6)。该机制可重新用于其他功能，包括哺乳动物系统的基因组工程，例如基因敲除 (KO) (1,2,3,5)。CRISPR/Cas9 KO 质粒产品利用来自 Broad 研究所张实验室开发的全基因组 CRISPR 敲除 (GeCKO) v2 库的向导 RNA (gRNA) 序列，能够识别和切割特定基因 (3,5)。
ßA1-晶体蛋白 HDR 质粒 (m): sc-419822-HDR
含有由 CRISPR/Cas9 系统产生的双链断裂 (DSB) 的 DNA 可以通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 途径进行修复 (1,2,3)。NHEJ 修复途径在切割位点引入非特异性插入或缺失，而 HDR 途径允许在 DSB 位点进行精确的基因编辑 (1,2,3)。靶向特异性 HDR 质粒为 DSB 提供 DNA 修复模板，当与 CRISPR/Cas9 KO 质粒共转染时，能够在发生 Cas9 诱导的 DNA 切割的位置插入特定的选择标记 (1,2)。HDR 质粒可以整合红色荧光蛋白 (RFP) 基因以直观地确认转染，并整合抗生素抗性基因 (嘌呤霉素) 以选择含有成功 CRISPR/Cas9 双链断裂的细胞。嘌呤霉素抗性和 RFP 编码基因两侧是两个 LoxP 位点，这些位点可被 Cre 载体识别，之后可利用该位点从基因组 DNA 中去除这些选择标记 (4,5)。
WAP CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m): sc-423691
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas9) 系统是一种适应性免疫反应防御机制，古细菌和细菌利用该机制降解外来遗传物质 (4,6)。该机制可重新用于其他功能，包括哺乳动物系统的基因组工程，例如基因敲除 (KO) (1,2,3,5)。CRISPR/Cas9 KO 质粒产品利用来自 Broad 研究所张实验室开发的全基因组 CRISPR 敲除 (GeCKO) v2 库的向导 RNA (gRNA) 序列，能够识别和切割特定基因 (3,5)。
BCMA CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m): sc-423440
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas9) 系统是一种适应性免疫反应防御机制，古细菌和细菌利用该机制降解外来遗传物质 (4,6)。该机制可重新用于其他功能，包括哺乳动物系统的基因组工程，例如基因敲除 (KO) (1,2,3,5)。CRISPR/Cas9 KO 质粒产品利用来自 Broad 研究所张实验室开发的全基因组 CRISPR 敲除 (GeCKO) v2 库的向导 RNA (gRNA) 序列，能够识别和切割特定基因 (3,5)。
EIF2A CRISPR/CAS9 KO质粒（M）：SC-432849
定期间隔间隔的短篇小学重复序列（CRISPR）和CRISPR相关蛋白（CAS9）系统是ARCHEA和细菌用于降解异物（4,6）的适应性免疫反应防御机制（4,6）。该机制可以用于其他功能，包括用于哺乳动物系统的基因组工程，例如基因敲除（KO）（KO）（1,2,3,5）。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除（Gecko）V2库中得出的指导RNA（GRNA）序列来鉴定和裂解特定基因，该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除（Gecko）V2库（3,5）。
SLC35D2 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m): sc-427725
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas9) 系统是一种适应性免疫反应防御机制，古细菌和细菌利用该机制降解外来遗传物质 (4,6)。该机制可重新用于其他功能，包括哺乳动物系统的基因组工程，例如基因敲除 (KO) (1,2,3,5)。CRISPR/Cas9 KO 质粒产品利用来自 Broad 研究所张实验室开发的全基因组 CRISPR 敲除 (GeCKO) v2 库的向导 RNA (gRNA) 序列，能够识别和切割特定基因 (3,5)。
transit-x2-crispr-cas9-质量递送。 ...
B.准备Trans IT-X2®：DNA复合物（转染前立即）1。使用前在使用前轻轻地将Trans-IT-X2®温暖到室温和涡旋。2。将____μL的Optimem®I降低无菌管中的媒介物。3。加入___μL的总DNA（编码Cas9和/或引导RNA的组合质粒DNA）。通过移液轻轻混合。5。将___μL反式IT-X2®添加到稀释的DNA混合物中。通过移液轻轻混合。6。在室温下孵育15-30分钟。