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CRISPR稳定的敲入细胞生产（CAT。C.C408）案例研究：使用CRISPR将红色荧光蛋白（RFP）基因敲入人类胚胎
图2 PCAS-GUIDE-AAVS1和PAAVS1-RFP-DNR的矢量图。pCAS指向AAVS1是哺乳动物细胞中SGRNA和Cas9共表达的多合一载体。SGRNA的表达是由强大的组成型Pol III启动子U6启动子驱动的。而CMV启动子则驱动CAS9酶的表达。paAVS1-RFP-DNR在CMV启动子下的PGK启动子和RFP基因下表达紫霉素的抗性标记。5'和3'AAVS1同源臂（“ aavs-right”和“ aavs-left”）为单元提供了一个用于同源性修复的模板。
可构想的介电启用结构化mems和2.5D / 3D键合系统< / div>
Materials • Substrate: 200mm Silicon • Adhesion Promoter: AP9000C • Dielectric: CYCLOTENE TM 6505 Dielectric (positive tone) Bonding Evaluation 1) Priming with AP9000C: 200mm Wafer Track • 2000rpm spin coat, 150˚C/60sec 2) Spin Coat: 200 mm Wafer Track • 1250 rpm/45 sec targeting 5.5 um after development • 90˚C/90秒3）曝光工具：掩模对准器•ABCD面膜平方柱（1-300 UM功能）•20 UM接近差距4）曝光后延迟延迟：〜15分钟5）开发：200mm Wafer Track
石油天然气审计技术指南
C.1. 发起人实体 ................................................................................ 109 D. ................................................................ 识别 LOGDP 的基础知识 .............................................................................. 109 E. .............................................................................. LOGDP 审计步骤 ...................................................................................... 110 F. .............................................................................. 合伙企业审计步骤 ...................................................................................... 111 G. ................................................................................ 工程师问题和责任 ...................................................................................... 115 H. ................................................................................ 纳税人审计步骤 ...................................................................................... 116 I. ................................................................................ 发起人审计步骤 ...................................................................................... 116 J. ................................................................................ 罚款考虑事项 ............................................................................................. 118 K. ................................................................................ 编制人/发起人考虑事项 ............................................................................................. 119
RNA 转录和修饰
启动子因它“促进”基因表达而得名。该碱基序列控制转录起始的准确位置。大部分启动子位于基因转录实际开始位点的正前方或上游。按照惯例，启动子序列中的碱基是相对于转录起始位点进行编号的。此位点是用作转录模板的第一个碱基，记为 +1。此位点之前的碱基按负方向编号。没有碱基被编号为零。因此，大部分启动子都用负数标记，以描述转录开始前的碱基数。启动子序列内有两个重要序列，位于大约 −35 和 −10 位点。−35 位点顶部 DNA 链中的序列为 5′–TTGACA–3′，−10 位点的序列为 5′–TATAAT–3′。 TATAAT 序列以 1975 年首次发现该序列的 David Pribnow 的名字命名为 Pribnow 盒。
农杆菌和单个 Cas9-sgRNA 转录系统介导的多年生黑麦草高效基因编辑
基因组编辑技术为多年生黑麦草（一种全球重要的牧草和草坪草种）的遗传改良提供了强有力的工具。关于多年生黑麦草基因编辑的唯一出版物使用基因枪进行植物转化，并使用基于双启动子的 CRISPR/Cas9 系统进行编辑。然而，它们的编辑效率很低（5.9% 或只产生了一株基因编辑植物）。为了测试玉米泛素 1 (ZmUbi1) 启动子在多年生黑麦草基因编辑中的适用性，我们制作了 ZmUbi1 启动子：RUBY 转基因植物。我们观察到 ZmUbi1 启动子在芽再生之前的愈伤组织中活跃，这表明该启动子适用于多年生黑麦草中的 Cas9 和 sgRNA 表达，以高效生产双等位基因突变植物。然后，我们使用 ZmUbi1 启动子来控制多年生黑麦草中的 Cas9 和 sgRNA 表达。Cas9 和 sgRNA 序列之间的核酶切割靶位点允许在转录后产生功能性 Cas9 mRNA 和 sgRNA。使用农杆菌进行遗传转化，我们观察到在多年生黑麦草中编辑 PHYTOENE DESATURASE 基因的效率为 29%。DNA 测序分析表明，大多数 pds 植物含有双等位基因突变。这些结果表明，由 ZmUbi1 启动子控制的单个 Cas9 和 sgRNA 转录单元的表达为产生多年生黑麦草的双等位基因突变体提供了一种高效的系统，并且也适用于其他相关草种。
UNIMECH 航空航天制造有限公司
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20K21318研究结果报告
研究成果の概要（英文）：这项研究试图阐明35S启动子序列特异性DNA甲基化的机制，目的是开发一种抗DNA甲基化抗性启动子，从而稳定非模型植物中的外国基因表达。具有各种改良35S启动子序列的单个副本的转基因绅士和烟草植物线，并分析了DNA甲基化。结果证实了35S增强子区域内214个基座的重要性。此外，在烟草中证实了通过转录活性丧失诱导DNA甲基化的诱导，在烟草中，未修饰的35S启动子没有诱导DNA甲基化。这些发现提出了两种物种之间DNA甲基化诱导的常见机制，并为开发DNA甲基化抗药性启动子提供了重要的垫脚石。
启动子是监管领域的新参与者，具有潜在的多效性作用
图 5 与疾病相关的 E 启动子变异示例。（A）变异 rs11672691 与前列腺癌相关，位于内部 PCAT19 启动子内。替代变异切换相对启动子和增强子活性，导致最上游 PCAT19 启动子和远端基因 CEACAM21 上调。（B）变异 rs1046496 与甲状腺功能减退症相关，位于 BAZ2B 启动子内。替代变异降低 MARCHF7 基因的转录。（C）变异 rs922483 与系统性红斑狼疮相关，位于 BLK 启动子内。替代变异降低 BLK 基因的转录，同时增加 FAM167A 基因的表达。（D）包含主要变异 rs10900585 的五个变异的单倍型与严重疟疾相关，位于 ATP2B4 的内部启动子内。替代变体切换了相对启动子和增强子活性，导致最上游的 ATP2B4 启动子的上调。
高效无转基因植物基因组编辑...
影响CRISPR/Cas9介导的基因组编辑效率的因素[25]。目前，在单子叶植物和双子叶植物中广泛使用的真核U3和U6启动子分别从水稻和拟南芥中分离得到[26]。tRNA的应用是提高植物基因组工程效率的有效策略[12]。在本研究中，我们成功地利用OsU3-tRNA启动子组合调控双子叶烟草中PDS sgRNA和LHT1 sgRNA的表达，达到了比AtU6和AtU6-tRNA更高的突变率（图1），这是出乎意料的。可能的原因是，能够募集Pol-III复合物的tRNA内部启动子元件补偿了水稻OsU3启动子在双子叶植物中的部分功能[10，12]。结果表明，使用OsU3-tRNA启动子组合可以提高基因组编辑效率，并可应用于单子叶植物和双子叶植物