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引文：Capdeville, N.、Schindele, P. 和 Puchta, H. (2020)。CRISPR/Cas 介导的碱基编辑在植物定向蛋白质进化中的应用
因此，已经开发出许多通过位点特异性DNA多样化实现基因及其产物定向进化的方法。其中许多方法，例如易错PCR、位点饱和诱变或嵌合体生成，都是基于序列文库的生成，然后在体外或体内筛选改良的蛋白质变体。然而，低转化率是这些方法的主要限制因素（Engqvist和Rabe，2019年）。使用可编程核酸酶的基因编辑方法的应用可以实现位点特异性的体内诱变，因此具有用于定向进化的潜力。目前，只有通过表征CRISPR（成簇的规律间隔的短回文重复序列）/Cas9（CRISPR相关）系统，才能实现大规模的定向诱变，因为与以前的系统相比，该系统具有简单性、多功能性和高精度。