™ DNA Multi-Sample Ultra 2.0 Kit 专为从各种样本基质中快速、可扩展地纯化高质量 DNA 而开发。使用此试剂盒纯化的 DNA 可用于广泛的分子生物学下游应用,例如测序、基因分型和 qPCR。该方案提供了使用 KingFisher 自动从全血中分离 DNA 的分步指导
•独立的第三方控制,可与任何分子测试平台一起使用。•纯化的核酸,完整的微生物基因组。•任何目标都可以扩增。•通过QPCR验证的副本/μL的精确浓度。•提供灭活证书的非感染材料。•冻干的表现可确保稳定性并降低运输成本。•www.vircell.com上可用的应变和NCBI序列。
™DNA多样本Ultra 2.0套件是开发出可从多种样品矩阵的高质量DNA快速纯化的。DNA可以在下游应用的广泛分子生物学中使用,例如测序,基因分型和qPCR。该协议通过使用翠鸟
姓名:________________________________ 首席研究员:____________________________ 电话:________________________________ 部门:_____________________________________ 电子邮箱:_________________________________ 校园帐号:_______________________________ 日期:________________________________ 校园地址:_________________________________ 模板 [浓度] PCR 产物的 DNA 类型 引物 [浓度] 纸 ng/µl 大小 (kb) 凝胶 纯化程度?pmole/µl 打印输出? 1. __________ _____ __________ __________ _________ __________ ______ ________ 2. __________ _____ ___________ __________ _________ __________ ______ ________ 3. __________ _____ ___________ __________ _________ __________ ______ ________ 4. __________ _____ ___________ __________ _________ __________ __ ________ 5. __________ _____ ___________ __________ _________ __________ ______ ________ 6. __________ _____ ___________ __________ _________ _________ __________ ______ ______ ______ 7. __________ _____ ___________ __________ _________ __________ ______ ______ 8. __________ _____ ___________ __________ _________ __________ ______ ______ 9. __________ _____ ___________ __________ _________ __________ ______ ______ 10. __________ _____ ___________ __________ _________ __________ ______ ________ ________ 注意事项:
单个粒子冷冻EM可以通过将嵌入在纳米厚的玻璃体冰中的几百万个纯化的蛋白质颗粒可视化到几百万纯化的蛋白质颗粒,从而重建蛋白质的接近原子或什至原子分辨率3D蛋白质。这对应于纯化蛋白质的皮克图,这些蛋白质可以从几千个细胞中分离出来。因此,Cryo-Em具有最敏感的分析方法之一,该方法提供了高分辨率蛋白质结构作为读数。实际上,准备低温EM网格需要超过一百万倍的起始生物材料。为了缩小差距,我们开发了一种微分离(MISO)方法,该方法将基于微流体的蛋白质纯化与冷冻EM网格制剂相结合。我们验证了可溶性细菌和真核膜蛋白的方法。我们表明,Miso可以从一个微克的靶蛋白微克开始,并在几个小时内从细胞到冷冻EM网格。这将纯化缩短了几百到几千倍,并为迄今无法访问的蛋白质的结构表征打开了可能性。
Q8 Hunt 46是一种可持续的液压液,用于广泛的液压应用。通过使用这种液体,将节省自然资源,并且与常见的液压油相比,碳足迹将显着下降。Q8 Hunt 46符合工业液压标准DIN 51524-2 HLP,这要归功于其纯化的基础油和精心选择的添加剂的结合。
NORGEN的纯化技术纯化基于使用Norgen专有树脂作为分离矩阵的自旋色谱柱色谱法。该过程为头发样品提供了简单简便的线粒体DNA隔离方案。首先,将DTT,蛋白酶K和裂解添加剂A添加到发轴上,并在55°C下孵育30分钟。完全溶解了头发轴一旦通过离心去除任何未消化的头发。然后收集清洁上清液,并添加异丙醇和裂解缓冲液B。然后将裂解物加载到自旋柱上。Norgen的自旋柱以取决于离子浓度的方式结合核酸,因此只有DNA才能与柱结合,而蛋白质和其他污染物则在流通中除去或保留在树脂顶部。然后使用提供的洗涤溶液A洗涤结合的DNA,并使用洗脱缓冲液B洗脱纯化的DNA。纯化的mtDNA(以及基因组DNA如果使用毛根)不含所有抑制剂,可用于包括PCR和测序在内的敏感下游应用中。
线粒体在细胞能量生产和代谢中起着核心作用。执行这些功能所需的大多数蛋白质是在细胞质中合成的,并进口到线粒体中。线粒体功能障碍引起的越来越多的代谢性疾病可以追溯到线粒体蛋白导入的错误。通常使用进口到纯化的线粒体中的放射性标记的前体蛋白来研究前体蛋白的进口机制。在这里,我们建立了基于荧光的进口测定法,以分析蛋白质进口到线粒体中。我们表明,荧光标记的前体可以使进口分析具有与使用射线活性前体的敏感性相似的敏感性,但它们提供了用picomole分辨率量化导入的优势。我们将导入测定法调整为96台板格式,以允许以筛选兼容格式进行快速分析。此外,我们表明荧光标记的前体可用于监测纯化的线粒体中F 1 F 0 ATP合酶的组装。因此,我们提供了一种基于敏感的荧光进口测定法,可以实现定量和快速的进口分析。
碎裂后,将DNA末端修饰以进行下游目标富集,包括最终修复,A尾和适配器连接。修改步骤后,使用Ampure XP珠纯化扩增的DNA样品。用4200贴抽系统和D1000筛选分析确定纯化DNA的尺寸和浓度(图5)。根据30μl的可用体积计算总DNA量。根据Agilent低输入SURESELECT XT人类所有外显子V5方案¹,库应具有225至275 bp的峰值大小。只有两个样品略低于建议的225 bp。以下部分中的杂交协议需要每个扩增的DNA库的750 ng。两个DNA样品略低于建议的总DNA量(图5)。三个样本没有根据大小或定量来满足QC标准,而是通过工作流程处理的,因为自动库的准备不允许排除单个样本。
线粒体在细胞能量生产和代谢中起着核心作用。执行这些功能所需的大多数蛋白质是在细胞质中合成的,并进口到线粒体中。线粒体功能障碍引起的越来越多的代谢性疾病可以追溯到线粒体蛋白导入的错误。通常使用进口到纯化的线粒体中的放射性标记的前体蛋白来研究前体蛋白的进口机制。在这里,我们建立了基于荧光的进口测定法,以分析蛋白质进口到线粒体中。我们表明,荧光标记的前体可以使进口分析具有与使用射线活性前体的敏感性相似的敏感性,但它们提供了用picomole分辨率量化导入的优势。我们将导入测定法调整为96台板格式,以允许以筛选兼容格式进行快速分析。此外,我们表明荧光标记的前体可用于监测纯化的线粒体中F 1 F 0 ATP合酶的组装。因此,我们提供了一种基于敏感的荧光进口测定法,可以实现定量和快速的进口分析。
