生物学资格结果通过准备NGS库来评估hamilton ngs Star V上的Qiagen QiaSeq FX DNA方法的性能,并使用QIASEQ FX FX DNA库套件具有重复性,以下是不同的样品Buffer EB。进行了三种生物运行;两个使用大肠杆菌gDNA(DH10B)和QIASEQ珠或Agencourt Ampure XP珠(包括1个阴性对照)和一个使用Microbial社区组成ATCC MSA-1003(20个菌株),ATTC MSA-1001(10菌株)和E. Coli Gdna(dhsec)和QH10B(DH10B)(包括12个菌株)(包括12个菌株)和QASE(dhsseq)(QIACE)(QIACE),使用了八个样品,其中有八个样品和QIASEQ珠子或QIASEQ珠子或Agencourt Ampure XP珠(包括1个阴性对照)。在运行期间施加了10分钟的碎片时间和七个PCR周期。用于文库制备的生物学资格,用定量1x DSDNA HS分析套件确定最终文库浓度。随后,八样本运行的所有库的库大小分布,
生物学资格结果,以评估NGS星MOA上QIASEQ靶向DNA Pro面板方法的生物学性能,使用带有4110引物的自定义面板执行了96个人类基因组DNA样品的库制备。作为输入DNA,使用了五个不同的基因型,每个基因型都使用了两个不同的输入量(10 ng和40 ng)(请参阅应用注释末尾的方法要求)。使用8个PCR循环进行了运行,以实现靶富集,并为25个PCR循环进行通用PCR。DNA浓度和总产率,该运行具有Quant-IT 1X DSDNA HS HS分析套件。使用具有高敏感性D5000试剂的高敏性D5000屏幕截图,用Agilent Tapestation 4150对图书馆DNA的尺寸分布进行了MEA(表1)。
此外,DHS-8800Z QIAseq Targeted DNA panel 涵盖了可用于推断微卫星不稳定性状态的有用基因位点。该状态测量几个微卫星基因位点长度分布的统计变化,并将测试样本的统计变化与正常样本基线(包含在 QIAGEN 参考数据集中,可在 Workbench 中下载)进行比较。如果不稳定性微卫星基因位点的比例高于预定义阈值,则认为样本不稳定。许多 MSI-High 肿瘤患者对免疫疗法产生了积极的反应。此外,美国食品药品监督管理局 (FDA) 已加速批准 pembrolizumab 用于治疗微卫星不稳定性 (MSI)-High 的儿童和成人患者,这使其成为首个获批用于治疗具有这种生物标志物的实体瘤的药物,无论肿瘤来源如何 [ Chang et al., 2018 ]。
此概况说明了我们的Go Greener计划中的产品包含。该程序标识了Qiagen投资组合中的产品,这些产品与我们的传统产品相比更加环保。与标准面板相比,QIASEQ靶向DNA Pro面板通过切割移液步骤减少塑料废物,从而减少了需要减少68%的移液器尖端。所需的试剂数量也较低,尤其是对于索引板,它已经从两个单独的板转变为一个具有独特双索引(UDIS)的单个板。面板的稳定性有所改善,从7个月的保质期提高到12个月。
套件内容................................................................................................................ 4
†索引引物板(QUDI-96AA,QUDI-96BA,QUDI-96CA,QUDI-96DA QUDI-96EA,QUDI-96FA,QUDI-96FA,QUDI-96GA,QUDI-96HA);每个板包含96对样品指数引物加上通用引物,每个板均与一对UDI样品指数相对应。每个索引都是一次使用。
图5。QIASEQ归一化器从具有不同输入DNA浓度的样品批次产生可重复的,归一化的DNA文库。为了证明这一点,我们创建了一批24个样本的e.coli DNA,范围为10至100 ng输入(CV = 64.67%)。我们使用QIASEQ FX PLUS QIASEQ归一化器(Workflow B)处理了样品,在库准备后,我们在归一化之前和之后删除了等分试样。归一化器产生的文库具有适当的测序浓度(平均1.8 ng/μl)和库浓度降低(CV从33.85%降低至13.53%)。
图3。水溶液中珠与DNA比对碎片恢复的影响。 为了确定不同的珠与DNA比对DNA片段尺寸选择的影响,将DNA尺寸梯子稀释至总体积为50 µL,并与各种体积的QIASEQ珠子从25 µL(0.5倍)到75 µL(1.5x)孵育。 在室温下DNA结合5分钟后,将管子放在磁性台上,再将溶液清除为止。 接下来,将上清液丢弃,并用200 µl 80%乙醇洗涤两次珠子。 在最终的乙醇洗涤后,除去上清液并将磁珠完全干燥。 将沉淀在6 µL缓冲液EB中洗脱。 在Agilent生物分析仪高灵敏度芯片上分析了等分试样(1 µL)以及未覆盖的尺寸梯子(参考阶梯)。 (a)片段定量。 (b)片段分布的百分比与参考相比。水溶液中珠与DNA比对碎片恢复的影响。为了确定不同的珠与DNA比对DNA片段尺寸选择的影响,将DNA尺寸梯子稀释至总体积为50 µL,并与各种体积的QIASEQ珠子从25 µL(0.5倍)到75 µL(1.5x)孵育。在室温下DNA结合5分钟后,将管子放在磁性台上,再将溶液清除为止。接下来,将上清液丢弃,并用200 µl 80%乙醇洗涤两次珠子。在最终的乙醇洗涤后,除去上清液并将磁珠完全干燥。将沉淀在6 µL缓冲液EB中洗脱。在Agilent生物分析仪高灵敏度芯片上分析了等分试样(1 µL)以及未覆盖的尺寸梯子(参考阶梯)。(a)片段定量。(b)片段分布的百分比与参考相比。
简介 文库制备是新一代测序 (NGS) 应用的关键要求,也是测序工作流程中最昂贵的部分之一。这不仅是一个耗时的步骤,而且还可能由于操作错误导致样本丢失或输出文库 DNA 质量下降。为了减少这些问题,简化的 QIAseq FX DNA 文库协议经过优化,可在酶促碎裂后直接进行接头连接,而无需中间清理步骤。此外,简单的协议(仅包含三个步骤)可确保在 Hamilton NGS STARlet 上顺利完成高优先级样本和低通量样本数量的文库制备自动化(图 1)。