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天然膜的冷冻EM揭示了分枝杆菌中克雷布斯周期与呼吸之间的紧密联系
其天然膜中内源性蛋白质复合物的抽象成像可以揭示在洗涤剂溶解后损失的蛋白质 - 蛋白质相互作用。为了研究分枝杆菌氧化磷酸化机制中的相互作用，我们准备了来自smegmatis分枝杆菌的倒膜囊泡，并富含通过亲和力色谱含有兴趣复合物的囊泡。电子冷冻显微镜（冷冻-EM）表明，来自克雷布斯循环的酶（MQO）（MQO）与电子传输链复合物III 2 IV 2 IV 2（CIII 2 CIX 2）superComplex物理相关。对MQO：CIII 2 CIV 2相互作用的分析表明，CIII 2 CIV 2对于苹果酸驱动的，但不是NADH驱动的电子传输链活动和氧气消耗所必需的。此外，MQO与CIII 2 CIV 2的关联使电子从苹果酸到CIII 2 CIV 2与毫秒动力学转移。一起，这些发现表明了Krebs循环与呼吸之间的联系，该呼吸将电子沿着分枝杆菌电子传输链的单个分支引导。引言生物能是通过包括糖酵解，三羧酸或克雷布斯循环以及脂肪酸氧化的代谢途径从营养物质中提取的。在大多数生物体中，克雷布斯循环提供减少的烟酰胺腺苷二核苷酸（NADH），并琥珀酸酯添加到膜结合的电子传输链（ETC）配合物，以驱动跨膜质子质子运动力（PMF）的产生。PMF反过来为二磷酸腺苷（ADP）和无机磷酸盐（P I）合成三磷酸腺苷（ATP）提供了能量。nadh被ETC的复合物I氧化，将泛氨基酮降低为泛醇。在克雷布斯循环中，琥珀酸酯氧化为富马酸盐是必不可少的反应，但通过ETC的复合物II发生，这也将泛氨基酮降低到泛醇。然后将来自泛醇的电子依次转移至复合物III，细胞色素C（Cyt。c），复合物IV，然后氧气将其减少到水中。复合物I，III和IV对夫妇电子在整个膜上转移至质子易位，维持了为ATP合成的PMF。分枝杆菌等与典型的哺乳动物线粒体等不同的方式（在（Liang and Rubinstein，2023）中进行了多种方式）。首先，分枝杆菌等依赖于甲酸苯丙胺（MQ），而不是泛氨基酮。此外，与规范的etc，分枝杆菌等不同。在大多数分枝杆菌中，例如病原体分枝杆菌结核病和快速生长的腐生肉芽菌分枝杆菌Smegmatis，NADH：MQ氧化还原酶活性均由复合物I和一种或多种非腐蚀性泵送II型NADH脱氢酶（NDH-2S）催化。两种不同的酶SDH1和SDH2催化琥珀酸酯：MQ氧化还原酶活性。此外，结核分枝杆菌和Smegmatis均具有苹果酸：奎因酮氧化还原酶（MQO），将氧化剂氧化为Oxalo乙酸盐，这是KREBS循环的关键步骤，而将MQ降低到MQH 2（Harold等，202222）。在结核分枝杆菌中，除了苹果酸脱氢酶（MDH）之外，还发现了该MQO，它将电子从苹果酸转移到NAD +，而在Smegmatis M. smegmatis MQO中是唯一的苹果酸氧化酶（Harold等，2022）。c。也许最引人注目的是，分枝杆菌中MQH 2的氧化是由复合物III和IV（CIII 2 CIV 2）的超复合物催化的，并具有结合的细胞色素CC亚基，代替了可溶性细胞。MQH 2的氧化和将氧气还原为水还可以通过细胞色素BD复合物（在规范等中未发现）来实现，每种电子转移的质子比CIII 2 Civ 2易解的质子较少（Safiarian等，2021年）。
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通过电子邮件和www.regulations提交。华盛顿特区20460 Re：要求EPA提出的有关n-（1,3-二甲基丁基）的提议规则制定（ANPRM）的评论期延长60天 - N'-'-N'-苯基-P-苯基二胺（6ppd）及其转化产物，6ppdquinone;根据《有毒物质控制法》（TSCA）进行的监管研究； 89美联储。reg。91,299（2024年11月19日）；案卷ID号 EPA-HQ-OPPT-2024-0403 Dear Ms. Zenni: The undersigned trade associations respectfully request a 60-day extension of the comment deadline for the U.S. Environmental Protection Agency's (EPA) advanced notice of proposed rulemaking (ANPRM) Regarding N-(1,3-Dimethylbutyl)-N′-phenyl-p- phenylenediamine (6PPD) and its Transformation Product, 6ppdquinone;根据《有毒物质控制法》（TSCA）进行的监管研究。 89美联储。 reg。 91,299（2024年11月19日）。 我们的协会代表了美国制造，采矿，建筑，运输，基础设施和化学部门的大型横截面。 我们的成员对于建立蓬勃发展的国民经济至关重要，对于实现国家关键基础设施，制造业，供应链，运输和能源目标至关重要。 我们的许多成员定期在可能包含6ppd的操作中使用轮胎和其他产品。 EPA已经确定了广泛的行业，可能会受到影响和/或具有相关数据。91,299（2024年11月19日）；案卷ID号EPA-HQ-OPPT-2024-0403 Dear Ms. Zenni: The undersigned trade associations respectfully request a 60-day extension of the comment deadline for the U.S. Environmental Protection Agency's (EPA) advanced notice of proposed rulemaking (ANPRM) Regarding N-(1,3-Dimethylbutyl)-N′-phenyl-p- phenylenediamine (6PPD) and its Transformation Product, 6ppdquinone;根据《有毒物质控制法》（TSCA）进行的监管研究。89美联储。 reg。 91,299（2024年11月19日）。 我们的协会代表了美国制造，采矿，建筑，运输，基础设施和化学部门的大型横截面。 我们的成员对于建立蓬勃发展的国民经济至关重要，对于实现国家关键基础设施，制造业，供应链，运输和能源目标至关重要。 我们的许多成员定期在可能包含6ppd的操作中使用轮胎和其他产品。 EPA已经确定了广泛的行业，可能会受到影响和/或具有相关数据。89美联储。reg。91,299（2024年11月19日）。 我们的协会代表了美国制造，采矿，建筑，运输，基础设施和化学部门的大型横截面。 我们的成员对于建立蓬勃发展的国民经济至关重要，对于实现国家关键基础设施，制造业，供应链，运输和能源目标至关重要。 我们的许多成员定期在可能包含6ppd的操作中使用轮胎和其他产品。 EPA已经确定了广泛的行业，可能会受到影响和/或具有相关数据。91,299（2024年11月19日）。我们的协会代表了美国制造，采矿，建筑，运输，基础设施和化学部门的大型横截面。我们的成员对于建立蓬勃发展的国民经济至关重要，对于实现国家关键基础设施，制造业，供应链，运输和能源目标至关重要。我们的许多成员定期在可能包含6ppd的操作中使用轮胎和其他产品。EPA已经确定了广泛的行业，可能会受到影响和/或具有相关数据。这些包括产生颜料，染料，有机化学品等的领域。EPA还要求有关有关复杂问题的研究的评论和信息，这些问题需要在不同级别的供应链中进行咨询，以确定信息和对供应链的潜在影响。因此，我们对这些化合物的数据收集，研究和未来的EPA作用具有重大兴趣。当前的评论截止日期，2025年1月21日，我们的成员没有机会全面审查案卷并进行其他研究和经济分析，这可能是提供有意义的评论所必需的。例如，EPA的ANPRM征求意见评论“本ANPRM中包含并引用的所有信息”和“与6ppd和/或6ppd- Quinone相关的任何其他信息”。 1基于我们对案卷的审查，其中包括90个单独的文档