+HUHZHSUHVHQWWZRVLJQ 4QGLQJVWKDWFRQWULEXWH XQGHUVWDQGLQJRI 白色念珠菌DOLIH-WKUHDWHQLQJ KXPDQIXQJDOSDWKRJHQ)LU HVWDEOLVKWKDWWKH 白色念珠菌UHIHUHQFHVWUDLQLVGHIHF 51$LQWHUIHUHQFHDIXQGDP UHJXODWRU\SDWKZD\6HFRQ GLVFRYHUWKDWLQFRQWUD UHIHUHQFHVWUDLQWKHYD PDMRULW\RIC。白色念珠菌LVRODWH FRQWDLQDQDFWLYH51$ LQWHUIHUHQFH51$ LSDWKZ VLOHQFHVJHQHH[SUHVVLRQ &RQVLGHULQJWKDW51$ LSOD FHQWUDOUROHVLQUHYHUVL JRYHUQLQJJHQHH[SUHVVLRQ JHQRPHVWDELOLW\GUXJUH DQGFRXQWHULQJYLUDOLQIH RXU4QGLQJRHUVYDOXDEOH LQVLJKWVLQWRWKHELRORJ GDQJHURXVIXQJDOSDWKRJHQ
RNA干扰(RNAi)是一种生物技术工具,用于植物中的基因沉默,具有内源性和外源性应用。内源性方法,例如宿主诱导的基因沉默(HIG),涉及基因修饰(GM)植物,而外源方法包括喷雾诱导的基因沉默(SIGS)。RNAi机制取决于引入双链RNA(dsRNA),该RNA被处理成简短的干扰RNA(siRNA),从而降低了特定的Messenger RNA(mRNA)。然而,由于序列同源性或siRNA诱导的表观遗传变化,对非目标生物和GM植物的意外影响是一个问题。EPA和EFSA等监管机构强调需要进行全面的风险评估。检测意外效果是复杂的,通常依靠生物信息学工具和不靶向的分析(例如转录组学和代谢组学),尽管这些方法需要广泛的基因组数据。本综述旨在对植物中不同来源的简短干扰RNA引起的RNAi效应的机制进行分类,并确定可用于检测这些作用的技术。此外,总结了实际案例研究,并讨论了以前对基因修饰植物中的意外RNAi效应进行了研究。当前文献受到限制,但表明RNAi是相对特定的,在GM作物中几乎没有意外的影响。但是,需要进一步的研究来充分理解和减轻潜在风险,尤其是与转录基因沉默(TGS)机制相关的风险,这些机制比转录后基因沉默(PTGS)不那么可预测。尤其是应用不靶向方法的应用,例如小的RNA测序和转录组学,以进行彻底和全面的风险评估。
(www.pichia.com),在这种酵母中成功表达了5000多种不同的蛋白质(Schwarzhans等,2017)。在P. p. p. p. p. p. p. p. p. p. opterer工程中的典型策略包括启动子工程(Nong等,2020; Lai等,2024; Zhou等,2023),信号肽修改(Lie等,2015),拷贝数的增加(Liu等,2020年; putteas et ease; wang al。 2019年),以及伴侣因子的引入(Zheng等,2019;Raschmanová等,2021)。 但是,基因组中的直接基因敲除可以导致P. P. P. P. P. p. p. pastoris代谢途径内的特定功能的丧失,从而破坏其整体代谢网络。 相比之下,利用合成生物学工具调节基因表达可能比传统的敲除或过表达方法更有效。 基因表达调节是许多细胞过程的基础(De Nadal等,2011; Nielsen和Keasling,2016年)。 当前,微生物中基因调节的主要工具是定期间隔短的短质体重复序列(CRISPR)系统的。 但是,使用CRISPR进行基因激活或抑制通常需要在CRISPR系统中蛋白质失活,添加激活或抑制域,以及仔细选择合适的SGRNA靶位点。 因此,CRISPR系统相对复杂且耗时。 此外,CRISPR的应用还受到宿主细胞接受度,异物蛋白质表达效率和目标位点选择准确性等因素的影响,这使得优化过程更加繁琐。在P. p. p. p. p. p. p. p. p. p. opterer工程中的典型策略包括启动子工程(Nong等,2020; Lai等,2024; Zhou等,2023),信号肽修改(Lie等,2015),拷贝数的增加(Liu等,2020年; putteas et ease; wang al。 2019年),以及伴侣因子的引入(Zheng等,2019;Raschmanová等,2021)。但是,基因组中的直接基因敲除可以导致P. P. P. P. P. p. p. pastoris代谢途径内的特定功能的丧失,从而破坏其整体代谢网络。相比之下,利用合成生物学工具调节基因表达可能比传统的敲除或过表达方法更有效。基因表达调节是许多细胞过程的基础(De Nadal等,2011; Nielsen和Keasling,2016年)。当前,微生物中基因调节的主要工具是定期间隔短的短质体重复序列(CRISPR)系统的。但是,使用CRISPR进行基因激活或抑制通常需要在CRISPR系统中蛋白质失活,添加激活或抑制域,以及仔细选择合适的SGRNA靶位点。因此,CRISPR系统相对复杂且耗时。此外,CRISPR的应用还受到宿主细胞接受度,异物蛋白质表达效率和目标位点选择准确性等因素的影响,这使得优化过程更加繁琐。在基因激活中,需要引入其他转录激活剂,而在基因抑制中,抑制因子必须进行精确设计和交付,以确保特定的调节。因此,尽管具有强大的基因调控能力,但CRISPR系统的操作复杂性和时间成本很高(Casas-Mollano等,2020; Chen等,2020)。相比,RNA干扰(RNAi)直接靶向RNA,影响蛋白质翻译,并为基因调节提供了更简单的方法。RNAi是一种由双链RNA(DSRNA)激活的基因沉默途径(Drinnenberg等,2009),由核糖核酸酶III(RNAseIII)酶处理,该酶加工成小型小型干扰RNA(sirnas)。dicer是一种酶,可将双链RNA裂解成小siRNA片段。这些siRNA随后引导参与RNA裂解的Argonaute蛋白靶向和裂解转录本,有效地沉降基因表达(Wang等,2019)。RNAi系统及其基本组件(dicer,argonaute和sirnas)通过简单的质粒转化步骤提供了一种更直接和灵活的方法来沉默基因。这减少了时间和精力,从而促进了各种菌株基因抑制策略的快速发展(Crook等,2014)。本报告详细介绍了P. P. P. P. P. rnai系统的第一个建立。可以创建这样的系统的假设是基于观察结果,即引入Argonaute蛋白和siRNA到P. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. apastoris。基因修饰的P. p. p. p. p. p. press这表明在P. Pastoris基因组中编码丁香样蛋白的基因的潜在存在。这项研究成功地证明了通过引入Hairpin RNA通过RNAi系统抑制单基因(增强的绿色荧光蛋白(EGFP))和双基因(EGFP /组氨酸(His))。
预印本(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此版本的版权持有人于2025年2月17日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.11.29.626080 doi:Biorxiv Preprint
RNA 干扰 (RNAi) 是一种基本调控途径,具有广泛的功能,包括调节基因表达和维持基因组稳定性。尽管 RNAi 在真菌界广泛存在,但众所周知的物种,如模型酵母酿酒酵母,已经失去了 RNAi 途径。到目前为止,还没有证据表明白色念珠菌中存在完全功能的 RNAi 途径,白色念珠菌是一种被世界卫生组织认为至关重要的人类真菌病原体。在这里,我们证明了广泛使用的白色念珠菌参考菌株 (SC5314) 在编码中心 RNAi 成分 Argonaute 的基因中含有失活错义突变。相比之下,大多数其他白色念珠菌分离株含有典型的 Argonaute 蛋白,预计该蛋白具有功能性和 RNAi 活性。事实上,使用高通量小RNA和长RNA测序结合无缝CRISPR/Cas9基因编辑,我们证明了活性白色念珠菌RNAi机制抑制了亚端粒基因家族的表达。因此,白色念珠菌中存在完整且功能性的RNAi通路,这凸显了在研究这种危险病原体时使用多种参考菌株的重要性。
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作为男性父母,事件E1,E2和E5的相对种子集效率分别为37.89%,61.82%和83.76%(表1和补充图。9)。这些发现进一步表明,Accenh3的敲低影响了种子集。差异种子集可能是在相互交叉中观察到的转基因偏置隔离变形的原因之一。我们的观察结果
来自新陈代谢和脂质保护,纽约西奈山的西奈山脉心脏医院,伊坎医学院(R.S.R.);蒙特利尔大学(D.G.)和伦敦的Robarts Research Institute(R.A.H.)- 两者在加拿大;贝勒医学院和德克萨斯心脏研究所 - 都在休斯敦(C.M.B.);维多利亚大学莫纳什大学莫纳什维多利亚州心脏研究所(S.J.N.)和西澳大利亚大学医学院和珀斯皇家珀斯医院心脏病学系(G.F.W.)- 全部在澳大利亚;卢卡斯研究,北卡罗来纳州莫尔黑德市(K.J.L.);和加利福尼亚州帕萨迪纳(J.S.M.,R.Z.,M.M.,T.C.,J.H。)和Arrowhead Pharma-Ceuticals。可以通过Robert .Rosenson@MSSM .EDU与Rosenson博士联系,或者可以在Sinai Mount Sinai Sinai Medical of Sinai的Sinai fuster Heart Hospital,Sinai Mount Sinai,1 Gustave L. Levy Pl。
RecA/Rad51家族蛋白诱导的DNA结构的内在动态特性:DNA作为基因组材料可能比RNA更具优势”。美国国家科学院院刊98.15(2001):8425-8432。
媒介蚊子传播各种医学上重要的致病病原体(疾病控制中心2021)。矢量控制是预防人类蚊子传播疾病的主要方法。然而,由于杀虫剂抗性的全球发病率不断增加,并担心化学农药对非目标生物的潜在负面影响,当前的蚊子控制方法达到了可持续性的局限性,需要开发和引入创新的矢量控制策略(AIRS和BartholoMay 2017,疾病控制疾病,对疾病控制20221)。蚊子基因组项目(Holt等人2002,Nene等。 2007)促进了蚊子生物学新方面的研究,包括医学上重要的艾园(登革热,Zika,chikungunya和黄热病载体)的功能性遗传研究,以及肛门(疟疾载体)人类疾病媒介(疾病控制中心2021)。 这些进步加剧了以基因为中心的新型载体控制策略的发展,导致研究的研究重点是鉴定潜在的基因靶向载体控制基因靶标,以及操纵蚊子基因在实验室中以及在现场中的作用的方法。 RNAi,促进实验室中蚊子基因的功能表征,2002,Nene等。2007)促进了蚊子生物学新方面的研究,包括医学上重要的艾园(登革热,Zika,chikungunya和黄热病载体)的功能性遗传研究,以及肛门(疟疾载体)人类疾病媒介(疾病控制中心2021)。这些进步加剧了以基因为中心的新型载体控制策略的发展,导致研究的研究重点是鉴定潜在的基因靶向载体控制基因靶标,以及操纵蚊子基因在实验室中以及在现场中的作用的方法。RNAi,促进实验室中蚊子基因的功能表征,