9/03/24 Alberts 的第 6 章 – 第 1 部分:DNA 到 RNA • RNA 转录 • RNA 加工 • 一些相关的 CMB 技术 9/05/24 第 7 章 - 基因表达的控制 • 转录因子 • 激活因子和抑制因子 • RNAi + 文章讨论
感染反应和其他免疫相关基因(ILG)首先在秀丽隐杆线虫中命名 - 基于病原体挑战的表达,但是当脂质代谢受到干扰时,许多人也会上调。为什么病原体攻击和代谢变化两个增加ILGS尚不清楚。我们发现,当秀丽隐杆线虫中分泌细胞器的膜膜的磷脂酰胆碱(PC)水平变化时,ILG被激活。RNAi靶向ADP-核糖基化因子ARF-1(破坏高尔基体和分泌功能)也激活了ILGS。低PC限制ARF-1功能,这表明通过脂质代谢进行ILG激活的机制,这是作用于ER外的膜应激反应的一部分。RNAi在两个GFP替代者的分泌中发现了缺陷,并积累了病原体响应的补体C1R/C1S,UEGF,BMP1(CUB)域融合蛋白。我们的数据认为,某些ILG的上调是对贩运变化的协调反应,并且可能采取行动来抵消对分泌功能的压力。
原始引用:Zhang,X.,Kang,L.,Zhang,Q.,Meng,Q.,Pan,Y.,Yu,Yu,Z.,Shi,N.,Jackson,S.,Zhang,X.,Wang,H.,H.功能和综合基因组学。ISSN印刷:1438-793X在线:1438-7948(在印刷中)
isobel ronai isobel.ronai@sydney.edu.au Charles Perkins中心,悉尼大学,新南威尔士州悉尼,新南威尔士州悉尼。生活与环境科学学院,悉尼,悉尼,新南威尔士州的悉尼大学。摘要分子生物学中非常成功的技术的惊人特征是它们源自自然发生的系统。RNA干扰(RNAi),使用一种在真核生物中进化的机制破坏外国核酸。其他例子包括限制酶,聚合酶链反应,荧光蛋白和CRISPR-CAS9。i提出,生物学家的效应子(蛋白质或核酸)活性和生物学特异性(蛋白质或核酸可能会引起精确反应),从而利用了自然分子机制。i还表明,分子生物学(例如RNAi)中新技术的发育轨迹是四个特征阶段。第一阶段是发现生物学现象。第二个是对机理触发的识别,效应子和生物学特异性。第三个是技术的应用。最后阶段是分子生物学技术的成熟和完善。自然界的新分子生物学技术的发展对于生物学和生物医学研究都至关重要。关键字:机制;实验;特异性;科学实践; pcr; GFP。
知识在动物生产和健康中应用的细胞遗传学知识。研究动物基因组和基因组的新编辑技术 - 在功能基因组中使用RNAi。微生物宏基因组,动物生产中的新挑战。练习基本分子遗传学方案的练习准备基因组基础和数据解释的咨询。
秀丽隐杆线虫的内胚层特征化通过一个网络进行,在该网络中,母系提供的 SKN-1/Nrf 和来自 POP-1/TCF 的额外输入激活了 GATA 因子级联 MED- 1,2 → END-1,3 → ELT-2,7。MED、END 和 ELT-7 因子的直系同源物只存在于与秀丽隐杆线虫密切相关的线虫中,这引出了一个问题:在该属中较远的物种中,在没有这些因子的情况下,肠道是如何特征化的。我们发现 GATA 因子基因 elt-3 的 C. angaria、C. portoensis 和 C. monodelphis 直系同源物在早期 E 谱系中表达,刚好早于它们的 elt-2 直系同源物。在 C. angaria 中,Can-pop-1(RNAi)、Can-elt-3(RNAi) 和 Can-elt-3 无效突变导致渗透性“无肠”表型。Can-pop-1 是 Can-elt-3 激活所必需的,表明它作用于上游。在 C. elegans 中强制早期 E 谱系表达 Can-elt-3 可以指导 Can-elt-2 转基因的表达并拯救 elt-7 end-1 end-3; elt-2 四重突变菌株的生存能力。我们的研究结果表明,隐杆线虫肠道特化和分化的祖先机制涉及更简单的 POP-1 → ELT-3 → ELT-2 基因网络。
背景:CHO 细胞是生产生物制药的首选,而基因组编辑技术为提高重组蛋白产量提供了机会。靶向凋亡相关基因,如 Caspases 8 相关蛋白 2 (CASP8AP2),可提高 CHO 细胞的活力和生产力。将强大的策略与 CRISPR-Cas9 系统相结合使其能够应用于 CHO 细胞工程。目标:本研究旨在开发一种经济有效的方案,使用 CRISPR-Cas9 系统结合 HITI 策略同时在 CHO 细胞中缺失/插入 CASP8AP2 基因,并评估其对细胞活力和蛋白质表达的影响。材料和方法:我们通过将 CRISPR/Cas9 与 HITI 策略相结合,开发了一种有效的 CHO 细胞工程方案。使用 CHOPCHOP 软件设计了两个不同的 sgRNA 序列以靶向 CASP8AP2 基因的 3' UTR 区域。使用经济高效的 PEI 试剂将 gRNA 克隆到 PX459 和 PX460-1 载体中,并转染到 CHO 细胞中。采用手动选择系统简化单细胞克隆过程。MTT 测定评估 24、48 和 72 小时的基因沉默和细胞活力。流式细胞术评估 CASP8AP2 沉默的 CHO 细胞中的蛋白质表达。结果:研究证实了将 CRISPR-Cas9 与 HITI 策略相结合的稳健性,在产生敲除克隆方面实现了 60% 的高效率。PEI 转染成功地将构建体传递给近 65% 的克隆,其中大多数是纯合的。该方案被证明适用于资源有限的实验室,只需要倒置荧光显微镜。 CASP8AP2 敲除 (CHO-KO) 细胞经 NaBu 处理后,与 CHO-K1 细胞相比,其细胞存活率显著延长,48 小时时的 IC50 值分别为 7.28 mM 和 14.25 mM(P 值:24 小时 ≤ 0.0001,48 小时 ≤ 0.0001,P 值:72 小时 = 0.0007)。与天然细胞相比,CHO CASP8AP2 沉默细胞的 JRed 表达增加了 1.3 倍。结论:使用 CRISPR-Cas9 和 HITI 策略有效改造 CHO 细胞,同时进行 CASP8AP2 基因缺失/插入,从而提高细胞存活率和蛋白质表达。
理论总讲座:60学分:4目标:本课程的目的是介绍和启发学生微生物的作用及其在工业生物技术,生物转化,生物转化,产品恢复,生物烯基产生,生物烯基产生以及各种环境过程中的生物技术应用中的作用及其在各种生物技术应用中的作用。纸质设置和考官的说明:问卷将有四个部分。审查员将共同设置九个问题,其中包括每个单元中的两个问题,以及一个涵盖整个教学大纲的简短答案类型的强制性问题。学生将尝试每个单位和强制性问题。除非指定,否则所有问题都可能带有相等的分数。生物修复中的微生物:异种生物的降解,矿物质恢复,从水性播放的第4单元(RNAi)(15小时)RNAi(15小时)RNAi及其在沉默基因中的应用,耐药性,治疗性,治疗性,治疗学和主机相互作用的病原体智力财产patents,copymarks单元1(微生物生物技术及其应用)(15小时)微生物生物技术学:范围及其在人类治疗学中的应用,农业(生物肥料,PGPR,霉菌,菌根),环境和食品技术的应用和真核微生物的应用:生物核心的应用程序:药物产业中的酵母治疗和工业生物技术重组微生物生产过程 - 链蛋白酶酶,重组疫苗(乙型肝炎B疫苗)微生物多糖和多糖和多植物,微生物的微生物生产,生物塑料 - 基于生物塑料的基于微生物生物体的生物型(15小时)(15小时)(15小时)(15小时)(15小时(15次)(15级化)类固醇和固醇生物催化过程及其工业应用:高果糖糖浆的生产以及可可脂的生产微生物替代品及其恢复微生物产品纯化:过滤,离子交换和亲和力色谱技术固定方法及其应用:全细胞的3(整个细胞)和环境3(Microbilization Bio-Envirencation and Bio-Envoriction and Bio-eth)Bio-eth bio-eth bio-Energy((生物柴油生产:木质纤维素废物和藻类生物量的商业生产,沼气生产:使用微生物培养的甲烷和氢生产。
摘要J.R. Simplot Company(Simpleot)已就BG25马铃薯衍生的食品进行了咨询(FDA)的咨询。BG25马铃薯经过基因设计,以表达对植物疫霉菌(RPI)蛋白质蛋白AMR3,BLB2和VNT1的抗性,以抗击马铃薯晚期疫病疾病,以及对乙酰蛋白质的抗性,这使乙酰蛋白耐受性耐乙酸盐合成酶(Als) - 抑制了 - 抑制的雄性固醇。stmals用作可选标记。BG25马铃薯还经过基因设计,以抑制马铃薯病毒Y外套蛋白(PVY-CP)的表达,并使用RNA干扰(RNAI)诱导PVY抗性。最后,BG25马铃薯被设计为抑制液泡转化酶(VINV)和多酚氧化酶(PPO)的表达,以分别使用RNAi,分别称为“黑点”,从而降低了还原糖的较低水平,并降低了酶褐变。本文档总结了FDA食品安全与应用营养中心(CFSAN,WE)评估与BG25马铃薯的人类食品用途有关的结论和支持数据和信息。FDA的兽医中心总结了其与动物食品用途有关的评估。
昆虫显示出各种各样的眼睛和身体颜色。编码涉及生物合成和颜料沉积的基因是理想的遗传标记物,例如促进果蝇遗传学的力量。oncopeltus fasciatus是一个新兴昆虫的新兴模型,昆虫是刺穿的喂食顺序的成员,其中包括害虫和疾病媒介。为了鉴定O. fasciatus的候选可见标记,我们使用了父母和若虫RNAi来识别改变眼睛或身体颜色的基因,而在没有有害的生存力上没有有害的e ects。我们选择了Vermilion进行CRISPR/CAS9基因组编辑,产生了三个独立的功能突变线。这些研究映射到X染色体,将基因的第一个分配给该物种的染色体。纯种合物具有鲜红色,而不是黑色的眼睛,并且完全可行且肥沃。我们使用这些突变体来验证果蝇玫瑰色的直系同源物的作用,在使用RNAi促进红色色素沉着中。而不是野生型红色的身体,而缺乏朱红色和XDH1的虫子具有明亮的黄色身体,这表明豆粒和翼龙有助于O. fasciatus的身体颜色。我们的研究生成了O. fasciatus的第一个基因可见标记,并扩展了该模型系统的遗传工具包。