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孕酮对 oxLDL‐ 的免疫调节作用......
图 1 oxLDL 诱导的训练免疫力改变细胞内和细胞外类固醇激素的丰度。用 oxLDL（10 μ g/ml）或 RPMI 训练粘附的单核细胞 24 小时，用 PBS 清洗并在正常培养基中静置 5 天。（A）对细胞内代谢物进行非靶向代谢组学分析。表示的是未注释的基因集富集 (GSEA) 通路分析的结果，该分析已识别的原始 m / z 分数及其各自的 p 值（表格显示总通路命中数、上传代谢物数据的命中数、原始 p 值、伽马调整的 p 值和归一化富集分数 (NES)；n = 3）。（B）在正常培养基中静置 5 天后，用 LPS（10 ng/ml）或 RPMI 刺激训练的单核细胞 24 小时。通过 ELISA 测定孕烯醇酮和孕酮的水平。 （Wilcoxon 匹配对符号秩检验，n = 6）
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Pen/Strep：青霉素/链霉素 RPMI 1640：Roswell Park Memorial Institute 培养基（Thermo Fisher，目录号 21875-034） DMEM/F-12：杜氏改良 Eagle 培养基/营养混合物 F-12（Thermo Fisher，目录号 31330-038） IMDM：Iscove 改良杜氏培养基（Thermo Fisher，目录号 21980-032） DMEM，高葡萄糖：杜氏改良 Eagle 培养基，高葡萄糖（Thermo Fisher，目录号 41965-039） DMEM，高葡萄糖，GlutaMAX TM：杜氏改良 Eagle 培养基，高葡萄糖（Thermo Fisher，目录号 61965-026）
远程和定量的细胞培养监测：Vero细胞
步骤：将Vero细胞接种在适当的培养基中（RPMI 1640，10％FBS）。将两个细胞培养容器分别放在一个Provi™CM20孵化监视器头上，该孵育型显示器头部安装在CellXpert C170I CO 2从Eppendorf的CellXpert C170i CO 2孵育器中，温度为21.2°C。细胞在37°C和5％CO 2下孵育。播种后约60小时监测细胞生长。CO 2浓度和温度同质性同时记录。根据DIN 12880：2007-05标准，通过外部探针在27个测量点处测量CO 2孵化器中的温度均匀性。
小鼠脾脏组织与Bambanker™，A ...
1。收集了三只小鼠的脾脏。2。将一个脾脏切成四个相等的碎片，浸入三种冷冻保存介质（Bambanker™，Cellbanker2和Stem -Cellbanker GMP级）中的每一个中的1 mL中，并存储在-80°C下10天。3。在37°C的水浴中解冻后，将脾样品浸入RPMI 1640中，含有约10 ml 10％的FBS和1％青霉素 - 链霉菌素。4。将样品离心，并丢弃上清液。5。脾脏，然后分离出细胞。6。rbcs在ACK裂解缓冲液中进行了血液，并重悬于PBS中。7。使用TC20细胞计数器（Bio-Rad）确定细胞计数和生存力。使用TC20细胞计数器（Bio-Rad）确定细胞计数和生存力。
癌细胞系中代谢途径依赖性的景观
图1。基因表达和CRISPR基因依赖性的整合以鉴定代谢途径依赖性。a）示意图概述了遗传途径依赖性富集分析（遗传PDEA）的方法。CCLE的癌细胞系首先通过培养类型（粘附，悬浮液）和培养基（RPMI，DMEM）进行分层，然后使用单样本GSEA（SSGSEA）推断其代谢途径活性。将所得的途径活性与基因依赖性整合在一起，以评估与代谢途径活性的关联。b-c）模拟数据（请参阅方法）用于评估遗传PDEA方法的灵敏度。热图代表每个添加每个梯度时的显着结果百分比。添加到表达梯度中的值与添加到依赖梯度的值相比，相关系数和遗传性PDEA结果稍强。
CD20/TNFR1双靶向抗体增强B细胞淋巴瘤中溶酶体破裂介导的细胞死亡
外周血单核细胞 (PBMC) 是从自愿参与本研究的健康捐赠者身上纯化的，这些捐赠者已获得研究内容的知情同意。所有这些过程均按照延世大学机构审查委员会批准的 IRP 程序 (#4-2016-0600) 进行。将血液与 PBS 以 1:1 的比例混合，并堆积在预先放入 ficoll (HISTOPAQUE-1077, Sigma, 10771) 的试管中。在 25°C 下以 400×g 离心 30 分钟，分离白细胞和红细胞，收集并转移到新试管中。用 PBS 冲洗细胞两次，并在室温下以 300×g 离心 10 分钟。重复此过程两次以完全去除血小板。然后，将 PBMC 重新悬浮在 RPMI 中
RNF43 和 PWWP2B 可抑制癌细胞增殖，是晚期胃癌患者 FDA 批准药物的预测或预后生物标志物
FDA 批准的 1,448 种药物化合物库购自 Selleck Chemicals。INC280 由 Novartis（瑞士巴塞尔）提供。将 HAP1、HAP1 RNF43 KO 和 HAP1 PWWP2B KO 细胞以 2,000 或 3,000 个细胞/孔的密度接种在 384 孔透明底培养板中，加入 20 µL 含有 10% FBS 的 IMDM 或 RPMI 1640 培养基，培养 24 小时。然后，将 10 µM FDA 批准的药物加入孔中，并将细胞再孵育 48 小时。对照细胞未暴露于药物。在增殖测定当天，除去培养基，向384孔板的每个孔中加入20μL新鲜培养基，然后加入5μL MTS溶液（Cell Titer 96 Aqueous One Solution细胞增殖测定试剂盒；美国威斯康星州麦迪逊市Promega公司），将板在37°C下孵育1小时。
m6A RNA 甲基化对 STIM2 的修饰抑制了...
东方肝胆外科医院 (EHBH) 使用了 10 名接受根治性手术切除的 CCA 患者的 CCA 组织和邻近正常组织。本研究中涉及人类参与者的所有程序均符合《赫尔辛基宣言》（2013 年修订）。该研究经东方肝胆外科医院伦理审查委员会批准，所有患者均提供了书面知情同意书。人类 CCA 细胞系 HuCCAT1（ATCC，马纳萨斯，美国）在罗斯威尔帕克纪念研究所 (RPMI)-1640 培养基中培养，培养基中含有 100 g/mL 链霉素、100 U/mL 青霉素和 10% 胎牛血清（GE Healthcare，Life Sciences，美国）。第三方生物学服务使用短串联重复序列 (STR) 分析来表征所有细胞系（中国成都飞欧尔生物有限公司）。
ZAP-70在IGHV未蒸发的慢性淋巴细胞性白血病中增强补品B细胞受体和CCR7信号传导
在获得患者的知情同意书并根据赫尔辛基宣言后，从CLL患者那里获得了外周血。研究得到剑桥郡研究伦理委员会的批准（07/MRE05/44）。通过在高纤维高压层（Pan-Biotech）上离心，将单核细胞从肝素化的血液中分离出来。Cells were harvested and cultured in RPMI 1640 (Gibco), supplemented with 10% fetal bovine serum, penicillin/streptomycin 50 U/mL, sodium pyruvate 1 mM, L-glutamine 2 mM, L-asparagine 20 mg/mL, 50 μ M 2-mercaptoethanol, 10 mM HEPES ( N -2-羟基乙基丙嗪-N'-2-乙磺酸）和最小必需的培养基非必需氨基酸（Gibco）。ZAP-70状态通过使用抗-ZAP-70抗体（Becton Dickinson Biosciences）使用细胞内染色来评估流量细胞仪。与同型对照相比，阳性细胞> 20％的样品被认为是ZAP-70阳性。阳性细胞> 20％的样品被认为是ZAP-70阳性。
数据表 - EZH2-EED 结合检测试剂盒
循环！） 50280 EED，FLAG 标签 10 µg -80°C 52170-A 4x HMT 分析缓冲液 2A 4 ml -20°C 要求但未提供的材料或仪器： Anti-FLAG AlphaLISA ® 受体珠，5 mg/ml（PerkinElmer #AL112C） AlphaScreen ® 谷胱甘肽供体珠，5 mg/ml（PerkinElmer #6765300） Optiplate-384（PerkinElmer #6007290） AlphaScreen ® 微孔板读数仪可调节微量移液器和无菌吸头 应用： 用于研究 EZH2 结合试验、筛选抑制剂和选择性分析。禁忌症： DMSO 浓度高于 0.5%。吸收 AlphaScreen ® 信号发射范围 (520-620 nm) 内的光的绿色和蓝色染料，例如台盼蓝。避免使用强效单线态氧猝灭剂，例如叠氮化钠 (NaN 3 ) 或金属离子 (Fe 2+ 、Fe 3+ 、Cu 2+ 、Zn 2+ 和 Ni 2+ )。>1% RPMI 1640 培养基中存在过量生物素和铁会导致信号减弱。缺乏这些成分的 MEM 不会影响 AlphaScreen ® 检测。稳定性：按说明储存，自收到之日起至少可保存一年。参考文献：Kong, X., et al., J. Med. Chem. 2014; 57 :9512。