• 瞬时或稳定表达 • 在 HEK 和 CHO 细胞中表达(miCHO TM GS、CHO-K1、CHO-S、ExpiCHO 和 HDBIOP3) • 使用 Leap-In 平台进行稳定表达 • 使用 Leap-In 稳定载体实现卓越的整合效率 • 从不同的启动子表达 • 荧光报告基因、翻译偶联报告基因和定位信号融合的选择 • 慢病毒载体 • 用于基因编辑的 Cas9 载体和用于 gRNA 设计的工具 • 提供 miCHO TM GS 和 miFuc TM 细胞系 • 提供稳定表达的细胞系开发服务 • 提供瞬时和稳定表达蛋白质的蛋白质表达服务
ucd-pymt,产生显性阴性蛋白,该蛋白特异性抑制了由Charles Vinson(NCI,Bethesda,MD,MD,USA)提供的C/EBP成员的DNA结合。根据制造商的说明,使用JetPEI(Polytransfection; Qbiogene,Irvine,CA,美国)进行瞬态转染。允许转染进行16小时,并用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理细胞24小时,然后再诱导凋亡或用TCDD处理TCDD进行RNA表达分析。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。 16小时后,用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理4小时。将细胞裂解,并使用Luminometer(Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡)使用荧光素酶报告基因测定系统(Promega Corp.,Madison,WI)测量荧光素酶活性。 使用Bradford染料测定法(Bio-Rad Laboratories,Inc。,Hercules,CA)将相对光单元标准化为蛋白质浓度。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。16小时后,用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理4小时。将细胞裂解,并使用Luminometer(Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡)使用荧光素酶报告基因测定系统(Promega Corp.,Madison,WI)测量荧光素酶活性。使用Bradford染料测定法(Bio-Rad Laboratories,Inc。,Hercules,CA)将相对光单元标准化为蛋白质浓度。
在过去的几十年中,已经采用了许多技术来量化微生物生态学中环境样本或合成群落中特定微生物的种群大小或微生物群。这些包括但不限于直接荧光显微镜(EFM)(Caron,1983; Kepner&Pratt,1994),流动细胞仪(FCM)(FCM)(Deng等,2019; Frossard et al。,2012; Frossard等,2016; Frossard等,2016),dell。 2003), catalyzed reporter deposition-FISH (CARD-FISH, (Eickhorst & Tippkotter, 2008; Schippers et al., 2005), phospholipid quanti- fication (Phospholipid-derived fatty acids, PLFAs) (Frostegard et al., 1991; White et al., 1979), and real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) (Brankatschk等,2012; Han等,2020; Han等,2016; Hartmann等,2014; Smith&Osborn,2009)
背景:在过去几十年中进行的研究揭示了非编码microRNA(miRNA)在癌症发展和进展中的作用。染色体区域14q32中的几个miRNA(通常在癌症中通常删除的区域)与儿童癌症神经母细胞瘤的临床结果不良有关。与同一患者的预处理细胞相比,我们以前已经从该区域鉴定了该区域的miR-323A-3P在化学治疗治疗的神经母细胞瘤细胞中被下调。此外,在神经母细胞瘤肿瘤中,该miRNA在晚期4阶段疾病中被下调,与第1-2阶段相比在这项研究中,我们试图描述miR-323a-3p在神经母细胞瘤中的未知功能作用。方法:合成miRNA模拟物用于在神经母细胞瘤细胞系中过表达miR-323a-3p。研究了miR-323a-3p的功能作用,细胞活力测定,流量细胞术,反转录 - 定量聚合酶链反应,荧光素酶报道器分析和蛋白质印迹在神经母细胞瘤细胞系kelly,sh-sy5y和sh-sy5y和sk-sy5y和sk-n-be(2)-c(2)-c。结果:miR-323a-3p的异位表达导致凯利,sh-Sy5y和sk-n-be(2)-c的细胞活力显着降低,通过在所有细胞系中引起kelly,sh-Sy5y和sh-sy5y和凋亡中的G1细胞周期停滞。此外,在miR-323a-3p过表达时,降低了信号传感器的mRNA和蛋白质水平(STAT3)。结论:miR-323a-3p通过G1细胞周期停滞和凋亡抑制神经母细胞瘤细胞系的生长,而众所周知的癌基因STAT3是该miRNA的直接靶标。miR-323a-3p与Stat3的3'UTR的直接结合通过荧光素酶报道器测定在实验上验证,其中miR-323A-3P降低了来自全长Stat3 3'UTR荧光素酶报告剂的发光信号,但不是来自具有预测种子序列中突变的记者。
(b) 报告形式。(1) 报告可以口头形式进行,如有要求,随后应提供书面报告。每份报告应包含(如已知):儿童及其父母或其他负责照料儿童的人的姓名和地址;儿童所在位置(如不在儿童住所);儿童的性别、种族和年龄;报告人怀疑儿童可能需要照料的原因;如果怀疑有虐待、忽视或性虐待,则应说明对儿童造成伤害的性质和程度,包括任何以前受到伤害的证据;以及报告人认为可能有助于确定伤害原因和造成伤害的责任人身份的任何其他信息。
科学记者每月由美国国家科学传播与政策研究所(NISCPR),CSIR,K k S Krishnan Marg博士,新德里11012。NISCPR对作者提出的陈述和观点或科学记者发表的广告中提出的任何主张不承担任何责任。编辑查询:Ph。:91-011-25848702;电子邮件:sr@niscair.res.in;传真:91-011-25847062用于销售和订阅相关查询:Ph。:91-011-25841647,25846301 Extn。289;电子邮件:sales@niscair.res.in; rs@niscair.res.in for Advertisement相关查询:Ph。:91-011-25843359,291;电子邮件:sales@niscair.res.in;网站:http://www.niscair.res.in订阅:内陆:1年:300/ - ; 2年:RS 570/ - ; 3年:810卢比/ - 外国:1年(航空邮件):US $ 90(年)
ATO 估计,兼职者约有 100 万,其中包括一个快速增长的白领群体,他们寻求新职业、额外收入和乐趣。 Duncan Hughes [/by/duncan-hughes-j7gc6] 记者
图 S01:CRISPR/Cas9 编辑人类 iPSC。(A) 使用双 sgRNA(sg1 和 sg2)靶向外显子 2 两侧的区域来生成 HDR 介导的 NDP KO-GFP 报告系,使用带有 KO 报告模板的 PUC57 载体,由外显子 2 (5'UTR)-eGFP-P2A 盒组成,两侧是同源臂 (HA),其中包括 PAM 位点突变和用于质粒线性化的 sgRNA 切割位点 (sg1-c 和 sg2-c)。在此过程中还生成了 NHEJ 介导的 NDP KO (NDP Δ exon2) 以及 NDP WT 同源克隆。(B) 使用类似方法生成 NDP WT-GFP 报告系。外显子 3 的 CDS 两侧的双 sgRNA(sg3 和 sg4)和含有修复模板的质粒,由外显子 3(CDS)-V5-P2A- eGFP 盒组成,两侧是同源臂,包括 PAM 位点突变和用于质粒线性化的 sgRNA 切割位点(sg3-c 和 sg4-c)。sgRNA,小向导 RNA;HDR,同源定向修复;KO-GFP,敲除报告基因;KO,敲除;WT,野生型;PAM,protoscpacer 相邻基序;UTR,非翻译区;CDS,编码序列;HA,同源臂;eGFP,增强型绿色荧光蛋白;P2A,猪 teschovirus-1 2A 自切割肽;V5,V5 标签。
图2。用于这些研究的大肠杆菌生物孢子菌株的一般示意图和初始表征。A.LASR活性的大肠杆菌生物孢子蛋白生物孢子蛋白具有质粒PSC11-L,具有LASR诱导的P LASI启动子,融合到LACZ Reporter和质粒PJN105-L和阿拉伯糖诱导的LASR中。该菌株响应3OC12 -HSL和0.4%阿拉伯糖产生β-半乳糖苷酶。3OC12-HSL诱导是剂量反应,半最大浓度为65 nm。B.大肠杆菌菌株组成型表达LACZ的质粒PVT19与融合到本构APHA-3启动子的LACZ。在存在或不存在3OC12 -HSL的情况下,该菌株会产生β-半乳糖苷酶。结果是两个(a)或三(b)独立实验的平均值,误差线代表标准偏差。
SBI 优化了一种特定的肽序列,该序列可将蛋白质靶向到外泌体内膜,从而使融合蛋白能够被包装到外泌体中分泌。该“XPack”肽序列已被整合到 XPack 克隆和表达慢病毒载体中,从而允许将报告蛋白或任何感兴趣的蛋白质加载到生产细胞系内的外泌体中。然后可以分离这些工程外泌体并将其递送到目标受体细胞中。此外,已经生成了稳定的 XPack 细胞系,这些细胞系可作为装载报告蛋白货物的外泌体的恒定来源,从而能够在人类细胞和体内鼠模型中追踪外泌体的动态。来自这些稳定细胞系的纯化、即用型外泌体也可作为综合 XPack 系统的一部分使用。
