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核定向核糖核酸酶变体靶向癌症干细胞并抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭
简单总结：在过去的几十年中，癌症治疗的成就显著提高了患者的生存率。然而，癌症仍然是导致死亡的主要原因之一。有人认为，治疗失败是由一种名为癌症干细胞的肿瘤细胞亚群介导的，这些细胞可以在治疗后存活并促进癌症复发。针对这些细胞对于改善癌症治疗非常重要。我们的研究目的是确定人类核糖核酸酶变体对 3D 生长的乳腺癌细胞和癌症干细胞的影响。此外，我们研究了它对乳腺癌细胞迁移和产生转移能力的影响，约 90% 的癌症死亡是由这种转移引起的。我们表明，这种核糖核酸酶可以抑制 3D 生长的肿瘤细胞，而不会影响正常的乳腺细胞，这显著抑制了癌症干细胞的发展。此外，它还降低了肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。
对核糖核苷酸还原酶在肾上腺皮质癌治疗中的分子调控的新见解
1 苏黎世大学 (UZH) 苏黎世大学医院 (USZ) 内分泌学、糖尿病学和临床营养学系，瑞士苏黎世 CH-8091；Christina.Bothou@usz.ch (CB)；converse.ashish@gmail.com (AS)；Igor.Shapiro@usz.ch (IS) 2 苏黎世大学 (UZH) 个性化医疗、分子和转化生物医学博士项目能力中心，瑞士苏黎世 CH-8006 3 埃默里大学医学院儿科系，美国佐治亚州亚特兰大 30322；adrian.oo@emory.edu (AO)； baek.kim@emory.edu (BK) 4 亚特兰大儿童保健中心药物研发中心，美国佐治亚州亚特兰大 30322 5 塞梅维斯大学医学院内分泌学系、内科和肿瘤学系，匈牙利布达佩斯 H-1083；paul.perge@gmail.com (PP)；igaz.peter@med.semmelweis-univ.hu (PI) 6 MTA-SE 分子医学研究组，匈牙利布达佩斯 H-1083 7 维尔茨堡大学医院医学一系内分泌和糖尿病科，德国维尔茨堡 97080； CLRonchi@bham.ac.uk 8 伯明翰大学代谢与系统研究所，伯明翰 B15 2TT，英国 9 伯明翰健康合作伙伴内分泌、糖尿病和代谢中心，伯明翰 B15 2TT，英国 10 德累斯顿大学医院卡尔古斯塔夫卡鲁斯三号医疗诊所和综合诊所，01307 德累斯顿，德国 * 通信地址：Constanze.Hantel@usz.ch；电话：+41-43-253-3008 † 共同贡献第一作者。
通过预复合的 CRISPR-Cas9/sgRNA 核糖核蛋白避开细胞抑制 RNA，实现高效的 ssODN 介导靶向
结合 CRISPR-Cas9 技术和单链寡脱氧核苷酸 (ssODN)，可以在诱导性多能干细胞 (iPSC) 中的目标基因组位点引入特定的单核苷酸改变；然而，与缺失诱导相比，ssODN 敲入频率较低。尽管已报道了几种 Cas9 转导方法，但是 CRISPR-Cas9 核酸酶在哺乳动物细胞中的生化行为仍有待探索。在这里，我们研究了影响 Cas9 体外裂解活性的内在细胞因素。我们发现细胞内 RNA（而不是 DNA 或蛋白质部分）会抑制 Cas9 与单向导 RNA (sgRNA) 结合并降低酶活性。为了防止这种情况，与 Cas9 过表达方法相比，在递送到细胞之前预复合 Cas9 和 sgRNA 可产生更高的基因组编辑活性。通过优化预复合核糖核蛋白和ssODN的电穿孔参数，我们实现了高达70%的单核苷酸校正效率和高达40%的loxP插入效率。最后，我们可以用C2等位基因替换HLA-C1等位基因，以生成组织相容性白细胞抗原定制编辑的iPSC。
ReMOT 控制递送 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白复合物以诱导疾病媒介蚊子淡色库蚊的种系诱变
淡色库蚊复合体分布广泛，导致蚊媒疾病在人类中的传播难以预防。使用 CRISPR/Cas9 基因编辑是一种有效的技术，有可能解决日益严重的蚊媒疾病问题。本研究利用 ReMOT 控制技术在淡色库蚊中生产转基因蚊子。通过注射 60 只成年雌蚊建立了显微注射系统——需 14 µ l 注射混合物，使用≤1 µ l 的内体释放试剂（氯喹或皂苷）不会发生沉淀。在采血后 24 小时（卵黄发生高峰期）注射 P2C 增强型绿色荧光蛋白-Cas9（P2C-EGFP-Cas9）核糖核蛋白复合物进入卵巢的效率为 100%。利用此方法进行KMO敲除，我们发现当通过ReMOT Control将P2C-Cas9 RNP复合物注射到淡色库蚊成年血淋巴中时，卵巢中也能发生基因编辑。在氯喹组，筛选出的2,251只G 0 子代中，9只个体表现出白眼和马赛克眼表型。在皂苷组，筛选出的2,462只G 0 子代中，观察到8只突变个体。测序结果显示13 bp的缺失，进一步证实了发生基因编辑的事实。总之，ReMOT Control在淡色库蚊中的成功应用，不仅为该方法提供了基本参数（注射参数和注射时间），而且有利于蚊虫生物学和防治的研究。
核糖开关作为抗生素的药物
摘要：核糖开关驻留在RNA的未翻译区域，并通过小分子的结合来调节与必需代谢物的生物合成有关的基因。自从本世纪初的发现以来，核糖开关被视为潜在的抗菌靶标。使用X射线晶体学指导的片段筛选，高通量筛选和有理配体设计，已经确定了针对各种核糖开关的铅化合物。在这里，我们回顾硫胺素焦磷酸盐（TPP），氟单核苷酸（FMN），GLMS，Guanine和其他核糖开关的当前状态和适用性，作为抗菌靶标，并在生物学环境中进行讨论。此外，我们重点介绍了核糖开关药物发现中的挑战，并强调开发核糖开关的特定高通量筛选方法的必要性。
前列腺癌中的聚（ADP-核糖）聚合酶抑制剂
摘要 基因组不稳定性是癌症的标志之一。在癌症进展过程中，同源重组修复基因的遗传变异发生率增加，20% 的前列腺癌 (PCas) 存在 DNA 修复基因缺陷。几种体细胞和种系基因变异驱动前列腺癌肿瘤发生，其中最重要的是 BRCA2、BRCA1、ATM 和 CHEK2。有一组 BRCAness 肿瘤与经典 BRCA 突变肿瘤具有相同的表型和基因型特性。聚（ADP-核糖）聚合酶抑制剂 (PARPis) 在同源重组基因受损的癌细胞中表现出合成致死性，具有这些变异的患者是 PARPi 治疗的候选人。雄激素剥夺疗法是 PCa 治疗的主要手段。PARPis 通过与雄激素核复合物的分子机制相互作用来降低雄激素信号传导。 PROFOUND III 期试验比较了奥拉帕尼和恩杂鲁胺/阿比特龙疗法，结果显示，在携带 BRCA1、BRCA2 或 ATM 突变的转移性去势抵抗性前列腺癌 (mCRPC) 患者中，放射学无进展生存期 (rPFS) 和总生存期 (OS) 均有所增加。PARPis 的临床疗效已在卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌以及最近在前列腺癌亚组中得到证实。越来越多的证据表明，分子肿瘤委员会是前列腺癌肿瘤治疗方法的未来。在这篇综述中，我们总结了有关 PARPis 在前列腺癌中的分子机制以及临床前和临床数据。
通过将核糖核蛋白电穿孔到Zona-Intact牛胚胎
体细胞核转移或细胞质显微注射已用于产生基因组编辑的农场动物。但是，这些方法具有降低其效率的几个缺点。这项研究旨在开发电穿孔条件，使CRISPR/CAS9系统的传递到牛为有效的基因敲除。我们优化了电穿孔条件，以传递CAS9：SGRNA核糖核蛋白到牛合子，而不会损害胚胎发育。较高的电穿孔脉冲电压导致膜渗透性增加。但是，高于15 v/mm的电压降低了胚胎发育潜力。牛胚胎的Zona卵石不是有效的RNP电穿孔的障碍。使用针对最大膜通透性进行优化的参数，同时我们在靶向牛OCT4时达到了高基因编辑的速率，这导致100％评估的胚胎和预期在莫拉拉阶段对胚胎发育的预期停滞的100％蛋白质。总而言之，CAS9：SGRNA核糖核蛋白可以通过电穿孔到Zona-Intact牛合子的能力递送，从而导致有效的基因敲除。
Ribosafe RNase抑制剂
核糖核酸酶（RNase）无处不在，可以在许多方面引入实验：例如，在RNA隔离期间的共纯化，裸手和移液器尖端的持久性。这种RNase污染通常不会引起人们的注意。核糖防护RNase抑制剂非常适合对RNA敏感的应用，例如RT-QPCR，因为即使少量RNase也可能不利于最终的实验结果。核糖防护酶抑制剂是一种高效的抑制剂（图1）一系列真核RNass，没有抑制聚合酶或逆转录酶活性（图2），因此可以用于cDNA合成或一步RT-QPCR反应中。
文章 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白介导的基因编辑后，人类视网膜色素上皮细胞和人类 Muller 细胞中 VEGF-A 的表达降低
以及世界各地。开发缓释制剂和装置以及更长效的药物是解决这些问题的一些方法。然而，还没有任何迹象表明这些方法中的任何一种可以带来永久性的治疗。基因疗法有可能永久降低 VEGF-A 水平并消除频繁玻璃体内注射的需要。基因增强和基因沉默方法都已用于降低 VEGF-A 水平。4 – 6 基因沉默尚未进入人体临床试验，但使用 microRNA 和 shRNA 的体外和体内研究已证明在降低 VEGF 方面取得了一些成功。7 – 9 近年来，成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR) 相关蛋白 9 (Cas9) 已用于破坏视网膜色素上皮 (RPE) 细胞和小鼠视网膜中的 VEGF-A 基因。 10 – 12 在视网膜中，VEGF 在 Muller 细胞、RPE 细胞、神经节细胞以及视网膜和脉络膜血管中持续表达；在病理性血管生成状态下，这种表达显著增加。13、14 我们研究的目的是评估 VEGF-A 基因破坏对 Muller 细胞和 RPE 细胞的影响，这两者都是眼睛中主要的 VEGF 产生者。我们使用了通过脂质体 CRISPRMAX (LCM) 递送的 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白 (RNP)。
迟发型瑞博西尼相关严重皮肤病副作用：多形红斑/史蒂文·约翰逊综合征 (SJS) 样反应
我们报告的是一名 46 岁女性的病例，她于 2016 年 11 月被诊断出患有局部晚期激素受体阳性 HER2 阴性炎性乳腺癌，伴有胸膜肿块和突出的腹膜后淋巴结。她开始服用他莫昔芬，但小脑出现了单独的脑损伤。她接受了立体定向放射治疗，并开始服用瑞博西尼和阿那曲唑。在第 8 周期瑞博西尼治疗的第二周，她的乳房和前臂出现皮疹。皮疹蔓延到她的前额、面部、手臂、胸部、背部和下肢。没有明确的粘膜受累，嘴唇上有轻微结痂，但没有溃疡。她的全身状况也很好，在复查时没有任何活动性粘膜病变。根据皮肤科检查，这被认为与多形红斑/SJS 样反应一致。由于时间关联，确定它与 Ribociclib 有关。在停用 Ribociclib 八周后，在没有全身类固醇治疗的情况下，她的皮肤变化有所缓解，但残留色素沉着。