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干细胞移植
使用说明：公司Medicare医疗政策是管理计划福利的指导，并且不构成医疗建议或保证保证。每年审查公司Medicare医疗政策，以指导服务或程序的覆盖范围或非覆盖决策过程，以根据会员福利合同（否则称为覆盖范围或EOC的证据）以及Medicare和Medicaid Services（CMS）政策，手册以及其他CMS规则和法规的中心。在没有CMS覆盖范围或针对请求的服务，项目或程序，公司政策标准或适用利用管理供应商标准的特定法规的情况下。这些是基于已发表的，经过同行评审的科学证据和基于证据的临床实践指南，这些准则可在上次政策更新开始。覆盖范围的决定是基于个性化医疗必要性的个性化确定以及在个体情况下治疗的实验或研究特征。在没有通过特定治疗方式的政策确定医疗必要性的情况下，以前未考虑有关提出方式的疗效的证据应考虑确定该政策是否代表当前的护理标准。公司保留确定医疗保险医疗政策的应用并随时对这些政策进行修订的权利。EOC与公司医疗政策之间的任何冲突或差异将得到解决，以支持EOC。范围：Providence Health计划，Providence Health保证和普罗维登斯计划合作伙伴（单独称为“公司”，共同称为“公司”）。
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当Citron对Tesla的看法从短期到2年前，当时该股票的价格为52美元（调整为拆分）时，我们认识到这不仅是一家汽车公司，而是Tesla将带领新能源以新的能源领导世界。，但与电动汽车最大的问题是充电和范围的电动汽车不同，对电池的更大依赖的转换将取决于电力的存储和分配。Citron认为，通过Biden Administration下的新绿色计划，ESG故事和2万亿美元的绿色革命正在全力以赴，投资者必须寻找具有领先地位的真正破坏性公司，特斯拉（Tesla）是2年前。引入STEM，Inc。（STPK）随着世界从碳转移到风能和太阳能时，清洁能源的智能存储比以往任何时候都更为重要。全球储能市场代表了1.2万亿美元的机会，预计到2030年将增加25倍。没有智能存储，不可能从可再生生成中构建。自2019年以来，90％的网格互连请求用于可再生能源和存储。加利福尼亚州已经要求在2035年之前所有新车均无碳，其全部电网在2045年之前免费碳。哪家公司将从这种蓬勃发展的世俗趋势中受益最大？STEM，Inc。（STPK）我们解释了为什么STPK应该将其付出超过100美元的方式。 背景STEM，Inc。（STPK）我们解释了为什么STPK应该将其付出超过100美元的方式。背景
干细胞研究
SPG11 中的双等位基因致病变异编码了 spatacsin，可导致罕见的运动神经元疾病，如遗传性痉挛性截瘫 11 型 (SPG11-HSP)、夏科-马里-图斯病和青少年型肌萎缩侧索硬化症-5 (ALS5)。SPG11-HSP 是最常见的复杂常染色体隐性 HSP。除了下肢痉挛和截瘫外，SPG11-HSP 患者还存在其他症状，如认知能力下降、上肢无力和周围神经病变（Pozner et al., 2020）。SPG11 编码一种 ~280 kDa 的蛋白质，称为 spatacsin，其参与自噬溶酶体机制的功能和囊泡运输。然而，由于缺乏特异性抗体，spatacsin 的确切功能尚不清楚。为了克服这一障碍，我们生成了一种内源标记的 SPG11 人诱导多能干细胞 (hiPSC) 系 (SPG11-HA)。标记是通过使用 CRISPR/Cas9 技术将具有同源定向修复的 HA 标签插入市售人类游离型 iPSC 系 (A18945；Thermo Fisher Scientific) 中进行的。用编码 SpCas9、GFP 和单个向导 RNA (gRNA；addgene) 的载体以及单链寡核苷酸 (ssODN) 供体 DNA 进行核转染。ssODN 包含一个 HA 编码区，两侧是 ~66 – 67 个核苷酸同源臂（图 1 AB）。经过单细胞分选程序和克隆扩增后，通过 PCR 扩增和桑格测序鉴定出阳性候选者（图 1 A）。通过 Sanger 和 Amplicon/NGS 测序确认了基因型 (图 1 A、C)。在预测的脱靶位点未检测到致病变异 (图 S1 A)。与未经过 CRISPR 过程的 iPSC 对照细胞 (ctrl) 相比，染色体微阵列分析未发现核转染报告系中存在任何从头拷贝数变异 (CNV) (图 1 D)。然而，在这两种细胞系中均发现了 20q11.21 处的增益。这种 CNV 在 hiPSC 和癌症中反复出现，表明它具有增殖或生存优势 (Nguyen et al., 2014)。ctrl 和 SPG11-HA iPSC 均表现出典型的多能性细胞样形态，并经支原体检测呈阴性 (图 S1 BC)。两种细胞系均表达多能性标记，并在三系分化范式测试中分化为所有三个胚层的衍生物（图 1 EF；图 S1 D；表 1）。为了验证报告细胞系的功能，通过蛋白质印迹研究了标记的 spatacsin 的表达。正如预期的那样，HA 标记的 spatacsin 在 280 kDa 的大小下可检测到（图 1 G）。由于 spatacsin 功能丧失后表现出一系列神经系统症状，因此评估了神经分化能力。近 90% 的分化对照和 SPG11-HA 神经祖细胞 (NPC) 表达
干细胞研究
根据全基因组关联研究 (GWAS)，许多基因位点与 2 型糖尿病患病率相关。其中，位于人类染色体 9P21.3 区域的 INK4 基因位点编码一个细胞周期依赖性激酶抑制剂家族（称为 p16 INK4a、p15 INK4b 和 p14 ARF），可抑制细胞周期依赖性激酶 CDK4 和 6。此外，一个名为 ANRIL 的非编码 RNA 位于该基因位点内，与其他三个基因相比，其转录方向相反（图 1 A）（Cunnington 等人，2010 年；Popov 和 Gil，2010 年）。重要的是，INK4 基因座含有六个与 T2D 相关的单核苷酸多态性 (SNP)，称为 rs2383208、rs10965250、rs10811661、rs10757283、rs1333051 和 rs7018475，位于 ANRIL 基因下游 8 kb 基因组区块 (INK4 T2D 风险区域) 中 (图 1 A) (Pasmant 等人，2010)。然而，这些 SNP 是否与 T2D 有因果关系以及它们如何调节 INK4 基因座尚不清楚。为了提供一种能够对 INK4 基因座的 T2D 关联 SNP 进行功能分析的工具，我们旨在生成缺少此 INK4 -T2D 风险区域的两个等位基因（纯合或双等位基因缺失）的 hiPSC 系。为此，我们使用我们最近建立的 hiPSC 系 (HMGUi001-A-1) (Wang et al., 2018) 通过 CRISPR/Cas9 基因组编辑系统进行基因靶向。由于靶向的是低保守性非编码 DNA，因此首先对 INK4 -T2D 风险区域上游（A 区域）和下游（B 区域）的 CRISPR 靶位点进行测序。然后，设计两组正向和反向引物（FA、RA；FB、RB）用于扩增 sgRNA 位点的边界区域（两个双链断裂）。接下来，设计具有高特异性得分的单向导RNA（sgRNA1和sgRNA2），并将其克隆到CRISPR表达载体中。通过Gibson组装克隆，我们生成了双sgRNA CRISPR/Cas9-GFP载体，
干细胞研究
转基因株系采用第二代 CRISPRa 系统，该系统携带与异源三聚体 VPR 反式激活因子融合的核酸酶缺陷型 dCas9，该异源三聚体 VPR 反式激活因子由 VP64、p65 和 RTA 结构域组成。该系统可用于解释任何所需细胞类型的内源性调控机制。使用基于 CRISPR/Cas9 的基因组编辑方法，我们以 AAVS1 人类基因组位点为目标，分别引入先前描述的 dCas9VPR-tdTomato（Schoger 等人，2020 年）和嘌呤霉素盒，这些盒受 CAG 和 EF1a 启动子的控制（图 1 A）。采用优化的核转染方案转染 LhiPSC-GR1.1 细胞。转染后，选择具有 tdTomato 表达的细胞并通过 PCR 进行基因分型（图 1B，引物结合如图 1A 所示，黑色引物仅扩增野生型 (WT) 片段；绿色引物扩增插入的构建体）。随后，扩增、分析和冷冻保存两个阳性克隆（#2 和 #3）。DNA 测序数据证实了 AAVS1 基因座中的正确和纯合敲入转基因整合（图 1C，显示为克隆#2）。PCR 结果显示，在筛选的 15 个克隆中，11 个克隆含有纯合插入（命名为 CRISPRa 细胞），1 个克隆是杂合的，3 个克隆不含有插入而是含有 WT 完整基因座（用作对照细胞）（数据未显示）。通过分析 PCR 和测序预测的前五个脱靶位点进行脱靶分析；在这些位点中均未发现任何编辑事件。对照电穿孔和非电穿孔 (参考) 系用于比较 (补充图 1A)。所有系的支原体检测均为阴性。通过基于 SNP 的核型分析和标准 G 带证明了 CRISPRa 克隆 #2 和 #3 以及对照细胞的基因组完整性。未检测到数值或结构异常的证据 (图 1D)。与核转染 (图 1Ei) 和非核转染对照相比，细胞生长和形态正常。与对照 hiPSC 相比，CRISPRa 中的 dCas9 和 tdTomato 表达证实了转基因表达，如 Western blot (补充图 1B，显示克隆 #2 和 #3) 和共聚焦显微镜 (图 1Eii，显示克隆 #2，n = 3 个不同传代) 所示。通过免疫荧光分析干性标记 OCT4 的表达（图 1 Eiii）和流式细胞术分析（显示 94.2% OCT4 和 99.9% TRA1-60 阳性细胞（图 1 Eiv）（显示克隆 #2））来评估多能性。通过在 CRISPRa 和对照系中形成胚状体 (EB) 和定向分化来测试向所有三个胚层的自发分化能力。免疫荧光分析证实了 AFP、β-III-Tu bulin 和 α-平滑肌肌动蛋白 (ACTA2) 的表达，进一步支持内胚层、外胚层和中胚层的命运（图 1 F，显示克隆 #2 和 #3）。转录水平分析表明配对盒 3 ( PAX3 ) 和微管相关蛋白 2 ( MAP2 ) 的表达表明外胚层分化；T-box 转录因子 T ( TBXT ) 表明中胚层命运，而 α-Feto-Protein ( AFP ) 表明内胚层分化（补充图 1 C，显示克隆 #2 和 #3）。我们研究了 CRISPRa 系用于研究通过定向 2D 分化产生的心肌细胞的适用性，这种分化产生了自发跳动的细胞（视频作为补充材料提供），具有强大的 α-辅肌动蛋白 2 (ACTN2) 和心脏肌钙蛋白 T (TNNT2) 心脏标志物表达（（补充图 1D，显示为克隆#2）。最后，我们通过确定与心脏肥大和代谢稳态有关的 KLF15 表达的诱导来测试 CRISPRa 系的功能。我们发现，与转染了非靶向 gRNA 的各自亲本系相比，设计用于结合 KLF15 转录起始位点 (TSS) 的 44 bp 5'-上游序列的单个指导 RNA 能够显着增强 CRISPRa 系（克隆#2 和#3）中 KLF15 的转录。对照细胞没有显示独立于转染的 gRNA 的活化（图 1G）。总之，使用完全表征的 hiPSC 系，我们生成了具有纯合靶向插入、正常核型和多能性的人类 CRISPRa 系，并显示出其激活
地球科学与 STEM
地球科学 STEM 替代交付模式第一季度 - 模块 8：能源资源第一版，2021 年第 8293 号共和国法案，第 176 条规定：菲律宾政府的任何作品均不享有版权。但是，必须事先获得创作作品的政府机构或办公室的批准，才能利用此类作品牟利。此类机构或办公室除其他事项外，可以作为条件要求支付版税。本模块中包含的借用材料（即歌曲、故事、诗歌、图片、照片、品牌名称、商标等）归其各自的版权持有者所有。我们已尽一切努力找到并寻求其各自版权所有者使用这些材料的许可。出版商和作者不代表也不声称拥有它们。教育部出版 部长：Leonor Magtolis Briones 副部长：Diosdado M. San Antonio
