XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search SystemSV40
系统研究多个 SV40 核定位信号融合对纯化 SpCas9 基因组编辑活性的影响
摘要：CRISPR-Cas9技术的出现彻底改变了基础和转化生物医学研究。为了使Cas9核酸酶发挥基因组编辑活性，通常将源自猿猴病毒40（SV40）T抗原的核定位信号（NLS）作为基因融合体安装，以引导细胞内的Cas9蛋白进入细胞核。值得注意的是，先前的研究表明，多个SV40 NLS融合可以提高Cas9衍生的基因组编辑和碱基编辑工具的靶向活性。此外，多NLS融合可以以组成性表达和直接递送Cas9-引导RNA核糖核蛋白（RNP）复合物的形式增加Cas9的细胞内活性。然而，NLS融合与细胞内Cas9活性之间的关系尚不完全清楚，包括活性对NLS融合数量或组织的依赖性。在本研究中，我们构建并纯化了一组在蛋白质的 N 端或 C 端含有 1 至 4 个 NLS 重复序列的化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 变体，并系统地分析了多 NLS 融合对 SpCas9 RNPs 活性的影响。我们发现，多 NLS 融合可以提高脂质转染或核转染 Cas9 RNPs 的细胞内活性。重要的是，多 NLS 融合可以增强 SpCas9 RNPs 在原代细胞、干细胞/祖细胞和小鼠胚胎中的基因组编辑活性。
FW：FOI 24/212 mRNA COVID 疫苗、SV40 启动子序列等中存在 DNA 污染 - MHRA 客户服务 - 展望
如果您对内部审查结果不满意，您有权直接向信息专员申请作出决定。请记住，除非您先联系我们进行内部审查，否则信息专员通常不会审查我们对您的请求的处理。您可以通过电子表格在线联系信息专员：https://ico.org.uk/make-a-complaint/foi-and-eir-complaints/foi-and-eir-complaints/
阿诺德·J·莱文出版物
纤维抗原抑制5型腺病毒的增殖。病毒学杂志1:747-757。2. Ginsberg HS, Bello LJ, Levine A, 1967. 腺病毒感染细胞中宿主大分子生物合成的控制。在《病毒分子生物学》中，（编辑）J. Colter 和 W. Paranchych，Academic Press，第 577 页。3. Levine AJ, Ginsberg HS, 1968. 腺病毒结构蛋白在停止宿主细胞生物合成功能中的作用。病毒学杂志2:430-439。4. Levine AJ, Sinsheimer RL, 1968. 噬菌体 øX174 感染的过程。XIX. 从 14ul5X174 感染细胞中分离和鉴定氯霉素抗性蛋白。 J. Mol. Biol. 32:567-578。5. Levine AJ, Sinsheimer RL, 1969. 感染噬菌体 øX174 的过程。XXV. 用噬菌体 øX174 突变体研究子代复制型 DNA 合成受阻。J. Mol. Biol. 39:619。6. Levine AJ, Sinsheimer RL, 1969. 感染噬菌体 øX174 的过程。XXVII. 在 øX174 感染的细胞中合成病毒特异性氯霉素抗性蛋白。J. Mol. Biol. 39:655。7. Levine AJ, Sinsheimer, RL, 1969. 从 lambda 感染的细胞中分离氯霉素抗性蛋白。Proc. Natl. Acad. Sci. USA 62:1226-1228。8. Levine AJ、Kang HS、Billheimer FE，1970。SV40 感染细胞中的 DNA 复制。I. 复制 SV40 DNA 的分析。J. Mol. Biol. 50:549-568。9. Levine AJ、Teresky AK，1970，SV40 感染细胞中的 DNA 复制。II. SV40 假病毒体的检测和表征。J. Virol. 5:451-457。10. Ritzi E、Levine, AJ，1970。SV40 感染细胞中的 DNA 复制。III. 三种不同猴肾细胞系中 SV40 裂解感染的比较。J. Virol. 5:686-692。 11. Kang HS、Eshback TB、White DA、Levine AJ，1971. SV40 感染的 DNA 复制
问答 DNA、胎儿细胞和疫苗
问：为什么用胎儿细胞来制造疫苗？答：科学家最初研究胎儿细胞是为了了解衰老过程。然而，科学合作和疫苗开发中的挑战导致人们开始使用胎儿细胞来开发疫苗。具体来说，科学家在脊髓灰质炎疫苗中发现了一种可能致癌的病毒，称为猿猴病毒 40 (SV40)，这种疫苗是通过在猴肾细胞中培养脊髓灰质炎病毒制成的。它之所以被称为 SV40，是因为它是第 40 种被识别的猴子病毒。最终，SV40 被证明不会在脊髓灰质炎疫苗接种者中导致癌症，但这种理解需要时间来发展。在此期间，疫苗科学家意识到，由于病毒需要细胞来生长，他们必须确保 SV40 或其他有害病毒不会出现在未来的疫苗中。偶然的是，研究衰老的最杰出的科学家之一 Leonard Hayflick 正在费城威斯塔研究所的两位著名疫苗科学家 Hilary Koprowski 和 Stanley Plotkin 的走廊对面工作。三人共同意识到，由于胎儿通常不会在子宫内接触病毒，因此他们的细胞可以确保未来的病毒疫苗不会无意中含有可能对人体有害的其他病毒。
停止使用 COVID-19 mRNA 疫苗
卫生局长概述了对已获批准的辉瑞和 Moderna COVID-19 mRNA 疫苗中核酸污染物的担忧，特别是在存在脂质纳米颗粒复合物和猿猴病毒 40 (SV40) 启动子/增强子 DNA 的情况下。脂质纳米颗粒是将 COVID-19 疫苗中的 mRNA 递送到人体细胞的有效载体，因此可能也是将污染物 DNA 递送到人体细胞的同样有效的载体。SV40 启动子/增强子 DNA 的存在也可能带来 DNA 整合到人体细胞中的独特且更高的风险。
快速的体外多瘤病毒DNA复制测定
传统上，采用多瘤病毒DNA复制分析的选择性低分子量DNA提取HIRT提取方法，一种多步骤，劳动密集型和耗时的程序。DNA复制结果在复制样品之间通常不一致。为了提高多瘤病毒DNA复制测定法的效率和可重复性，我们使用Qiagen自旋柱技术和HIRT提取技术比较了DNA质量和产量。在转染后第2、4和第6天收集了用SV40 DNA转染的CV-1细胞，并使用Qiagen自旋柱和HIRT提取方法提取DNA。使用32个P线性的全长SV40 DNA探针进行了南部杂交。病毒DNA复制进行定量，并比较了两个程序获得的结果。Southern印迹分析显示，使用Qiagen自旋柱技术恢复了一致和增强的SV40 DNA恢复，并且在6天期间的病毒DNA复制在一式三份样品中可重现。此外，Qiagen自旋柱技术减少了从24小时获得多瘤病毒复制测定的高质量DNA所需的时间。采用这种提取程序将改善多瘤病毒DNA复制活性的确定，同时减少研究者对有毒有机化合物的暴露和处置。©2004 Elsevier B.V.保留所有权利。
基因工程 - 讲座10 div>
SV40病毒基因组包括负责转录和复制的控制区域。该区域包含用于细胞和病毒蛋白的各种结合位点，促进了病毒基因表达和DNA复制的调节。1.启动子区域：tata-box和sp1结合位点与早期mRNA的转录有关。sp1是一种与SP1位点相互作用以启动转录的转录因子，对于早期基因表达至关重要。2.复制的原始（ORI）：位于SP1位点附近，这种复制的最小起源跨度为65个碱基对，是DNA复制的起点。起源对于宿主细胞中病毒基因组的复制是必需的。3. Enhancer区域：位于原点的下游，增强子包含重复的72个BP段，以提高转录水平。该区域对于提高早期和晚期转录过程的效率至关重要。4. late启动子区域：该区域控制晚期mRNA的转录，对于病毒生命周期的后期，对病毒capsid蛋白的合成至关重要。5.T抗原结合位点：这些结合位点标记为1、2和3，在复制调节中起作用。T-抗原蛋白在这里结合，启动和控制SV40基因组的复制。6.蛋白结合位点（AP1，OBP，AP2，AP3）：特定蛋白与AP1，OBP，AP2和AP3结合，影响转录和复制过程。这些位点是与宿主或病毒因素相互作用以促进病毒传播的调节元素。
Cas9 核酸酶 GFP NLS 蛋白
产品描述 成簇的规则间隔短回文重复序列 (CRISPR)/Cas9 系统是基因组编辑中最新的 RNA 引导核酸内切酶工具，可实现非常具体的基因组破坏和替换。Cas9 核酸酶 NLS 与 GFP 的融合可实现转染的视觉确认以及随后的 Cas9 从细胞中清除的验证。Cas9 核酸酶-GFP 也可用于 FACS 应用和筛选。Cas9 核酸酶-GFP NLS 在蛋白质的 C 端包含 SV40 T 抗原核定位序列 (NLS)。
最终FL SG响应12142023
2023年12月14日，约瑟夫·A·拉达波（Joseph A.在您的信中，您引起了人们的担忧，即这些疫苗中存在SV40启动子/增强剂DNA，这引起了安全问题。1我们要明确表明，基于对整个制造过程的彻底评估，FDA对Covid-19-19疫苗的质量，安全性和有效性充满信心。该机构的福利风险评估和持续的安全监视表明，其使用的福利大于其风险。此外，服用了超过十亿剂的mRNA疫苗，尚未确定与残留DNA有关的安全问题。对您的三个特定问题的回答如下：
Mukherjee_ASGCT USH2A 海报_最终版
图 1：EDIT-102 的作用机制。*USH2A 基因中的 Ex13 代表导致 IRD 的任何外显子 13 突变，包括 c.2299delG。EDIT-102 编码人类 U6 启动子、向导 RNA（gRNA；RSQ9145 和 RSQ9265）、hGRK1 启动子、SV40（猿猴病毒 40）SD/SA（剪接供体/剪接受体）序列元素、NLS（核定位序列）、Sa（金黄色葡萄球菌）Cas9（CRISPR 相关蛋白 9）和 pA（多聚腺苷酸化信号）。EDIT-102 在 USH2A 外显子 13 的两侧进行编辑，导致外显子 13 从基因组和 mRNA 中去除，从而产生缺乏氨基酸 723-936 的功能性 Usherin 蛋白。