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耦合CRISPR/Cas9和Lambda Red重组工程系统对鸡沙门氏菌进行基因组编辑及ssaU敲除突变体对细菌毒力的影响
摘要：发展中国家的养禽业仍然面临着鸡伤寒的巨大威胁，这种疾病由鸡沙门氏菌引起，在经济较发达国家已得到较好的控制。除了大型毒力质粒 (85 kb) 表现出的毒力外，鸡沙门氏菌致病岛 2 还通过其 III 型分泌系统 (TTSS) 在介导疾病方面发挥关键作用。TTSS 分泌效应蛋白穿过含有沙门氏菌的液泡，并通过调节囊泡通道介导细菌的内化。在本研究中，使用 CRISPR/Cas9 和 lambda 重组系统通过同源定向修复，成功从本土分离的鸡沙门氏菌基因组中删除编码 III 型分泌系统的候选毒性 ssaU 基因 (~1 kb)。基于 CRISPR/Cas9 的家禽鸡沙门氏菌基因组编辑此前尚未见报道，这可能与其遗传工具效率低下有关。这是首次展示从该细菌基因组中完全进行基于 CRISPR/Cas9 的基因删除的研究。更重要的是，采用家禽实验模型评估了该突变菌株 (∆ ssaU_ S G18) 的毒力潜力，与野生型菌株相比，该突变菌株无法在实验攻毒的鸟类中产生任何死亡率。在我们的攻毒模型中，没有观察到对体重增加的影响，而细菌无法在肠道和肝脏中定植。突变菌株体内毒力的丧失使该系统具有出色的功能，可用于开发针对这种耐药性和致病性细菌的活疫苗。
CRISPR介导的Brugia Malayi的转染
由于这些生物的困难生物学，反向遗传学在人类丝状寄生虫中的应用滞后。最近，我们开发了一种共同培养系统，该系统允许转染Brugia Malayi的感染性幼体阶段并有效地发展为Fecund成年人。这是开发基于Piggybac Transposon的工具包的，该工具包可用于生产具有稳定整合到寄生虫基因组中的转基因序列的寄生虫。然而，PiggyBac系统通常已被基于群的常规间隔短篇小学重复序列（CRISPR）技术取代，这允许精确编辑基因组。在这里，我们报告了适应b。马来语用于CRISPR介导的敲入插入寄生虫基因组。在b的基因间区域中鉴定出合适的CRISPR插入位点。马来语基因组。修改了双重记者Piggybac载体，用插入位点的序列替换了Piggybac倒的末端重复区域。b。用合成引导RNA，修饰的质粒和cas9核酸酶转染马来语或其。将转染的寄生虫植入沙鼠中，并允许发展为成年人。后代微丝菌进行了筛选，并筛选了质粒中编码的分泌的荧光素酶报告器的表达。发现大约3％的微丝虫分泌荧光素酶；所有这些都包含插入寄生虫基因组中预期位置的转基因序列。这些数据表明CRISPR可用于修改B的基因组。使用适配器介导的PCR测定法，检查了转基因微丝菌是否存在关闭目标插入；没有发现脱靶插入。马来语，开辟了精确编辑这种重要人类丝状寄生虫的基因组的道路。
对帕金森氏病新诊断的患者的心理，认知参数和睡眠质量的评估
背景：帕金森氏病是一种神经退行性疾病，由于神经元的损害而导致神经递质的损害，称为多巴胺，并且病例在全球范围内正在增长。在帕金森氏病患者中观察到非运动症状的研究在印度背景下很少。印度帕金森氏病的估计患病率为700万。目的和目标：本研究是为了评估新诊断的帕金森氏病患者的心理和认知参数和睡眠质量。材料和方法：在35-70岁的年龄组中，共有30名新诊断的患者，帕金森氏病在获得知情同意后是研究的一部分。三十岁和性别匹配的健康参与者也是研究的一部分。认知参数。使用广义焦虑症收集了心理参数七个问卷，这是一份自我管理的问卷。使用失眠严重性调查表评估睡眠质量，该问卷是七项调查表。结果：与对照组相比，帕金森氏病患者的焦虑评分显着高。与对照组相比，帕金森患者的睡眠质量明显较差。帕金森患者的空间和言语记忆评分明显低于对照组。结论：本研究结果支持帕金森氏病患者非运动症状也很突出。在帕金森氏病患者中观察到更高的焦虑评分，较低的空间和言语记忆评分以及睡眠质量差。该研究建议在该领域进行进一步的详细研究，以考虑这些参数在管理帕金森氏病方面。
抗病毒研究
对丙型肝炎病毒（HBV）的免疫耐受性对于发展慢性肝炎B至关重要，而大量产生和分泌的HBV表面抗原（HBSAG）被认为是关键的贡献者。HBSAG以HBV感染的肝细胞和携带HBV积分的肝细胞表示。HBSAG分泌或肝脏中表达的高抗原量是否决定其免疫调节特性，但是电源不清楚。因此，我们开发了一种新型的HBV动物模型，使我们能够研究分泌的HBSAG的作用。我们引入了先前描述的HBS突变，C65s，将HBSAG分泌废除为复制 - 胜任的1.3过高长度HBV基因组，并使用了与腺相关的病毒载体将其传递到小鼠肝脏中。AAV-HBV分别建立了Wildtype和C65S突变体HBV的载体状态。我们研究了治疗性疫苗接种后HBV载体小鼠中的抗病毒B和T细胞免疫。此外，我们将缺乏HBSAG分泌的效果与抗病毒siRNA的作用进行了比较。虽然缺少HBSAG分泌允许治疗疫苗接种后更高水平的可检测到的抗HBS抗体，但不论起始水平如何，它既不影响抗病毒T细胞反应也不影响肝内HBV基因的表达。用HBV siRNA限制了肝细胞中病毒抗原表达的治疗，无论HBV能力分泌HBSAG，都提高了治疗性疫苗接种的抗病毒功效。我们的数据表明，从血液中清除HBSAG不会显着影响HBV持久性或T细胞免疫。这表明需要肝病毒抗原表达的重复效果以破坏HBV免疫耐受性。
免疫原性化学疗法使RAS突变的结直肠癌敏感到免疫检查点抑制剂
免疫原性细胞死亡（ICD）是由具有免疫活性适当联系的药物触发的胞解的特定方式。在简短的诱导ICD诱导疗法中，触发肿瘤细胞中的前体应力，从而促进了特定危险相关的分子模式（DAMP）的发射。部分性内质网（ER）应激，其特征是真核开始因子2亚基1（EIF2α）的磷酸化，诱导内胞质网状（ER）的易位（ER）伴侣（ER）伴侣的伴侣（CalRreticulin（calR），包括钙蛋白（CALR），以便于等离子体膜，从而表现为ligands os91 aS91 for cds 91一个“吃我”信号，可刺激直流介导的吞噬作用。此外，ICD下癌细胞中自噬的发作促进了ATP的溶酶体释放，而ATP的溶酶体解放反过来又可以将嘌呤能受体P2X 7（P2RX7）结合起来，从而将其作为化学提取剂将DC引导到肿瘤床上。通过癌细胞释放膜联蛋白A1的最终归巢，该癌细胞与位于DC表面上的甲基肽受体1（FPR1）相互作用，从而促进了它们与肿瘤碎屑的相互作用。还分泌I型干扰素（IFN），该干扰素（IFN）发挥了自分泌作用，促进了CXCL10的合成以及旁分泌效应，从而增强了DC的CHE Motaxis。此外，肿瘤细胞屈服于ICD释放高动力组框1（HMGB1），该组作用于Toll样受体4（TLR4）和触发DCS成熟。成熟的DC具有加工和暴露于T淋巴细胞的能力。1最终，活化的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）会诱导IFN-γ介导的残留恶性细胞杀死，并建立免疫记忆，以防止癌症复发。
循环经济和循环商业模型
进步背景计划：需要宽B细胞抗原受体（BCR）曲目才能建立对任何类型的入侵病原体的体液免疫力，例如病毒以及疫苗接种。最近的一个例子是COVID大流行，其中免疫力基于B细胞在其表面表达BCR的B细胞，以识别病毒。遇到病毒/疫苗接种后，共vid特异性B细胞将分化为分泌大量可溶性BCR的浆细胞，实际上，可以结合并消除病毒的抗体。几十年前，在小鼠中与BCR和BCR组装有关的一种称为VPREB3的多肽。但是，由于尚未发表其他研究，因此VPREB3的作用尚不清楚。我们假设组装相应受体需要VPREB3，这最终会影响BCR曲目。目的：该计划的目的是通过探索VPREB3在受体大会中的作用及其对BCR曲目的影响，为成功的候选人提供机会促进其职业生涯。方法：基于计算机的BCR/BCR的建模，具有/不带VPREB3，蛋白质印迹，免疫沉淀，共聚焦显微镜，对VPREB3 KO小鼠中BCR库的分析。时间计划：第一年，我们将努力开发所需的所有方法和知识，第二年我们将完成实验。结果：对BCR和BCR组装的了解增加，以及VPREB3在这些过程中的潜在作用。在缺乏VPREB3的条件下，确定对BCR曲目的潜在后果。此外，如果成功的话，候选人应该为他/她在学术界的未来职业发展做好准备。（请注意，奖学金是由于工作或研究以外的其他原因而建立的）
在7G中启用量子安全性技术：调查
摘要 - 我们最近的论文详细介绍了有关量化后（Q-）和Q-Cryptography（Cry）算法（A LG'S）的工作，重点介绍了它们在7G网络（N等人）中的适用性。在候选人A LG中提供了全面的见解，以取代RSA和ECC计划。本文认为，Q方案很可能会占主导地位的6G N等，并且由于实施复杂性，Q-Solutions将在7G中充分利用。由于本文的重点是加密A LG作为后续行动，因此在本文中，我们介绍了Q-N等人设计的最重要片段，以支持这些算法。对于7G网络中的应用程序，在第二节中进行了调查至关重要。作为下一步，在第三节中审查了动态Q-N等的拓扑设计的结果，并在IV节中进行了优化，包括对Q- N等人进行了调查的IBN稳定性的工作。特殊空间（第VI节）致力于调查基于这些网络的卫星星座，因为这些网络是这些网络的全球系统。作为本文第VII部分的特殊贡献，为Q-卫星网络，具有成本效益的Q-Network拓扑设计和最佳资源（能力和分泌关键利率）分配的新优化框架提供了新的优化框架。该论文被设计为在该领域建立研究小组的种子材料，成为该小组初始研究论文的基础，也是该领域NSF招标的第一个项目建议。
牙本质唾液磷酸蛋白信号...
牙本质生成始于成牙本质细胞，成牙本质细胞合成并分泌非胶原蛋白 (NCP) 和胶原蛋白。当牙本质受伤时，牙髓祖细胞/间充质干细胞 (MSC) 可以迁移到受伤区域，分化为成牙本质细胞并促进反应性牙本质的形成。牙髓祖细胞/MSC 分化在给定的生态位中受到控制。在牙齿 NCP 中，牙本质唾液酸磷蛋白 (DSPP) 是小整合素结合配体 N 连接糖蛋白 (SIBLING) 家族的成员，该家族的成员具有共同的生化特征，例如 Arg-Gly-Asp (RGD) 基序。DSPP 表达具有细胞和组织特异性，在成牙本质细胞和牙本质中高度常见。DSPP 突变会导致遗传性牙本质疾病。 DSPP 在蛋白水解作用下被催化成牙本质糖蛋白 (DGP)/唾液酸蛋白 (DSP) 和磷蛋白 (DPP)。DSP 进一步加工成活性分子。DPP 包含 RGD 基序和丰富的 Ser-Asp/Asp-Ser 重复区。DPP-RGD 基序与整合素 αVβ3 结合，并通过丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 和粘着斑激酶 (FAK)-ERK 通路激活细胞内信号传导。与其他 SIBLING 蛋白不同，DPP 在某些物种中缺乏 RGD 基序。然而，DPP Ser-Asp/Asp-Ser 重复区与磷酸钙沉积物结合，并通过钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II (CaMKII) 级联促进羟基磷灰石晶体生长和矿化。DSP 缺乏 RGD 位点，但含有信号肽。信号域的三肽与内质网内的货物受体相互作用，促进 DSPP 从内质网运输到细胞外基质。此外，DSP 的中间和 COOH 末端区域与细胞膜受体、整合素 β6 和闭合蛋白结合，诱导细胞分化。本综述可能揭示 DSPP 在牙发生过程中的作用。
第 59 届内耳生物学.pdf
细胞衰老是一种永久性细胞周期停滞状态，对胚胎发育（包括内耳形成）至关重要。在此过程中，衰老细胞通过调节组织重塑和确保适当的细胞分化来帮助形态发生。衰老细胞具有独特的形态和生理变化，包括细胞增大、β-半乳糖苷酶活性增加、基因表达改变以及各种炎症细胞因子、趋化因子和蛋白酶的分泌，统称为衰老相关分泌表型 (SASP)。衰老细胞分泌的因子会影响听觉结构（如耳蜗和前庭器官）的发育。胚胎衰老缺陷会导致内耳畸形和功能障碍。这凸显了调节衰老对于正常内耳发育的重要性。前庭神经鞘瘤是来自前庭神经施万细胞的与年龄相关的良性肿瘤，它进一步说明了衰老在耳部健康中的作用。这些肿瘤可导致听力丧失、耳鸣和平衡问题。在肿瘤中，衰老既可以抑制生长，也可以促进生长。虽然衰老会阻止不受控制的细胞增殖，但衰老相关分泌表型 (SASP) 可以创造促肿瘤环境，增强肿瘤存活和进展。了解衰老在胚胎发育和肿瘤发生中的双重作用对于靶向治疗至关重要。在胚胎环境中，促进适当的衰老可以预防异常。在前庭神经鞘瘤中，调节衰老和 SASP 因子可能会改善结果，这表明针对衰老的干预措施有可能用于治疗内耳发育和肿瘤疾病。
重组纤维素酶和蛋白酶在土著蜡状芽孢杆菌菌株中的同时表达
背景：基因操作在微生物中有着广泛的应用。通过基因操作和基因编辑，可以构建多功能菌株，同时生产包括酶在内的多种工业生物材料。目的：根据纤维素酶在包括食品工业在内的各个行业中的重要性，本研究旨在通过基因操作在土著蜡状芽孢杆菌EG296菌株中生产纤维素酶。材料与方法：采用SOEing PCR扩增位于蜡状芽孢杆菌蛋白酶基因（aprE）调控上游和下游区域之间的枯草芽孢杆菌168纤维素酶基因，并通过自然转化转化为蜡状芽孢杆菌EG296。在筛选出具有纤维素酶活性的菌株后，通过同源重组从转化子的基因组中删除scoC基因（aprE基因的负转录调控因子），以同时提高纤维素酶和蛋白酶活性。结果：蜡状芽孢杆菌基因组中引入纤维素酶基因，纤维素酶活力约为0.61 u.mL -1 。通过scoC基因缺失，蛋白酶活力由230 u.mL -1 提高到363.14 u.mL -1 ，同时，在蛋白酶启动子调控下的纤维素酶活力也由0.61 u.mL -1 提高到0.78 u.mL -1 。蜡状芽孢杆菌表达的纤维素酶和蛋白酶的不稳定性指数分别为26.16和20.18，远低于40的阈值，因此两种酶均比较稳定。结论：获得了1株能够生产和分泌两种重要工业胞外酶（纤维素酶和蛋白酶）的基因工程菌株，且后续纯化工艺简单。