快速循环繁殖使用转基因早期流动植物,作为杂种父母,促进了多年生作物的繁殖繁殖计划的缩短。使用表达银桦树的BPMADS4基因的转基因基因型T1190建立了苹果的快速周期育种。在这项研究中,T1190及其非转基因的野生型引脚(F1-Offspring'pinova'和'iDared'的F1-OffSpring通过Illumina短阅读测序在两个单独的实验中进行了测序,导致T1190和167×PIS的平均测序深度为182×。测序显示8,450次读取,其中包含≥20bp的序列与植物转化载体相同。这些读数被组装成125个重叠群,检查了它们是否包含转基因插入或不使用五步程序。一个重叠群的序列表示T1190染色体4上已知的T-DNA插入。其余重叠群的序列在T1190和销钉中同样存在,它们具有与载体序列身份的部分同样存在于Apple参考基因组中,或者它们似乎是由内生污染而不是其他转基因插入的。因此,我们得出的结论是,转基因苹果植物T1190仅包含一个位于4号染色体上的转基因插入,并且没有进一步的部分插入转换载体。
限制性片段。为了制备微克量的 Hin 375、Hin 550 和 Hae 790(见图 1),将含有示踪量 lambda [32p]_ DNA(2 X 106 cpm)的 5 mg 纯化 lambda DNA 用 Hin(7)或 Hae(6)消化,乙醇沉淀,重悬于 500 ul DNA 缓冲液(5 mM NaCi、10 mM Tris-HCl,pH 7.4、1 mM EDTA)中,在含有 TBE(1)缓冲液的 3.5% 聚丙烯酰胺凝胶(6 mm X 20 cm X 40 cm)上以 320 V 电泳 23 小时。通过放射自显影定位含有适当限制性片段的凝胶部分,切除,并通过苯酚提取去除 DNA(10)。如前所述,从含有 32P 的 DNA 中分离出高比活度标记的限制性片段(2)。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳确定每个片段的链长(1、2)。
方法,将来自摩洛哥栽培树的单叶用于本研究。DNA提取。根据制造商的说明,使用Illumina Truseq套件构建了配对的测序库。该库是在配对端,2×150bp格式的Illumina Hi-Seq平台上进行排序的。用三件v0.33(Bolger,Lohse和Usadel 2014)修剪了所得FASTQ文件的适配器/引物序列和低质量区域。修剪序列由黑桃v2.5组装(Bankevich等人2012)随后使用Zanfona V1.0(Kieras 2021)进行完成步骤,以基于相关物种中保守的区域加入附加的重叠群。
1969 年,人们发现一种以前未知功能的牛红细胞蛋白具有催化超氧化物自由基歧化活性 (1-3)。这种酶,即超氧化物歧化酶,是一种金属蛋白,每分子含有 2 (1.8-2.0) 个铜原子和 2 (1.7-1.9) 个锌原子,分子量为 33,000,由两个大小相同的亚基组成 (4, 5)。从其他真核生物中纯化的铜锌歧化酶在分子量、亚基结构、氨基酸组成、铜锌含量以及对纯化所用的氯仿-乙醇混合物的稳定性方面与牛红细胞歧化酶相似 (2, 3)。细菌来源的酶代表一类独特的超氧化物歧化酶,其每个分子含有 1-2 个锰原子作为金属辅因子,对氯仿-乙醇处理不稳定,其氨基酸组成与铜锌歧化酶明显不同(2、3、6-8)。细菌酶的分子量约为 40,000,每个酶含有两个分子量为 20,000 的亚基。最近又分离出两种超氧化物歧化酶,其稳定性、纯化特性和氨基酸组成与细菌锰歧化酶相似。一种来自鸡肝线粒体(8)的超氧化物歧化酶每个分子含有 2.3 个锰原子,虽然它是四聚体,但其亚基分子量与细菌含锰酶相同。另一种是含有铁(每个分子约 1 个原子)而不是锰的,已从大肠杆菌中分离出来(9),是一种二聚体,其亚基大小相同(分子量 19,000)。已在各种需氧、厌氧和耐氧厌氧微生物中测量了超氧化物歧化酶活性水平(10)。从观察到的相关性来看,
序列的模式(4)。但是,共识序列并不代表序列中的所有信息,因为在许多情况下,其他碱基也出现了很大的频率。例如,主要是Aug的procaryotic启动密码子也有时也有Gug和Uug。如果人们忽略了这些可能性,则已经扭曲了数据。这是共识序列是结合位点的差模型的几个原因之一(5,6)。在绑定站点中特定位置的重要性更清楚地始终如一地描述了那里的模式所需的信息(7,8)。从同样可能的可能性中选择一个符号或状态需要一个“位”信息。例如,要向某人传达硬币弹的结果需要1个信息,因为只有一个是不是一个问题:“是头吗?”。如果绑定站点中的位置始终包含一个基数(例如g),然后我们需要两个信息,因为需要回答两个是的问题:“是A还是G?”(即是嘌呤吗?)和'是A还是C?”。(如果两个问题的答案都是“否”的,则必须是T。)此外,如果职位包含两个基础(例如有时A,有时是G),只有一个问题就足够了,因为四分之二的选择等同于两个选择中的一个。因此,仅需要一个位来描述仅包含嘌呤的结合位点的位置,但是需要两个位来描述始终包含腺嘌呤的位置。在1948年,克劳德·香农(Claude Shannon)展示了如何做到这一点(7,8)。如果碱的频率不是完全概括的,则需要更复杂的计算以在某个位置找到平均信息。在香农之后,我们将不确定性度量定义为:
关于端粒区的结构,一个共同的主题正在出现。染色体末端带有多个串联重复的简单卫星状 DNA(2)。除了染色体末端的简单序列外,端粒附近的区域通常还带有长段中间重复 DNA(1、10、13、15、18、24)。在酿酒酵母中,染色体以 200 到 600 个碱基对的不规则序列 C1_3A 结束(17、23;图 1)。此外,在 DNA 末端附近发现了两个中间重复元素,称为 X 和 Y'(8、9)。Y' 是一个高度保守的元素,长度为 6.7 千碱基(kb)(8、9)。 X 是一种比 Y' 保守性更低的元件,大小范围为 0.3 至 3.75 kb,位于 Y' 的着丝粒附近(8, 9)。C1_3A 重复序列的内部序列以及 DNA 复制的推定起点(自主复制序列)与 X 和 Y' 相关(7, 21)。这些特性与端粒相关序列在复制、重组或端粒区域修复中发挥作用相一致。已经开发出凝胶系统,可以分离完整的酵母染色体 DNA 分子(4, 16)。已记录了菌株 YNN281、A364a、DCO4 和 AB972(5)中每条染色体在一个系统(正交场交替凝胶电泳 [OFAGE])中的行为。通过改良的凝胶插入法 (16) (5) 从这些菌株中制备 DNA,并进行 OFAGE 处理。将 DNA 转移到硝酸纤维素上并与 X 和 Y' 特异性探针杂交 (20)(图 2)。通过琼脂糖凝胶分离 1.7 kb NcoI 片段,从 YRp12O (9) 制备 X 特异性探针。通过分离 1.7 kb BglII 片段,从 YRpl31b (9) 制备 Y' 特异性探针,该片段被亚克隆到 BamHI 消化的 M13 mpl8 中。从 pYtl03 (17) 切下 125 碱基对 HaeIII-MnlI 片段,其中包含 82 碱基对 C1_3A 重复序列。杂交探针来自据报道不含 C1_3A 重复序列的 X 和 Y' 区域。这一点已通过以下事实得到证实:源自 pYtl03 的真正的 C1_3A DNA 既不与 X 也不与 Y' 探针杂交。为探针选择的 X 区域在不同的 X 元素中是保守的 (8, 9)。表 1 中显示的数据是从 17 种不同的凝胶中汇编而来的,这些凝胶的切换间隔范围为 20 到 80 秒。每个菌株的 X 和 Y' 分布模式不同(图 2 和 3)。每个菌株中至少有三条最小染色体中有一条不与 Y' 探针杂交,在三个菌株中,五条最小染色体中的两条不与 Y' 探针杂交
在本文中,我们描述了一种新型 CPGES,称为地球电池扩展 II (EBE II),它使用大型表面储罐或气量计在接近大气压的条件下储存二氧化碳。这使得电池放电阶段最多可产生 260 MW e 的电力,而单靠 CPG 只能产生 2.5 MW e。此外,新的 CPGES 系统可以配置为生产可在接近大气压下升华的固体 CO2(干冰),提供 -78 °C 的散热器,可用于一般冷却目的,特别是用于从空气中低温捕获二氧化碳。反过来,这种二氧化碳可用于开发更多这样的 CPGES 系统。如果不需要散热器,可以通过增加(额外)级来优化涡轮机,从而增加电力输出而不会形成干冰。
下一代测序(NGS)是用于疾病诊断的高效遗传诊断测试。尽管Sanger方法被用作基因组研究中的传统方法,但随着技术的发展,NGS方法的使用一直在增加。下一代测序的基础是由Allan Maxam-Walter Gilbert和2个诺贝尔奖获得者弗雷德里克·桑格(Frederick Sanger)开发的方法。最初,第一代测序方法在几天内完成了巨大的努力,完成了DNA的某个部分,而在今天的技术中,即使是最复杂的有机体的整个DNA也在1天内测序。第二代和第三代测序方法已开发出,成本,时间和测序准确性的提高。从这些方法获得的数据用生物信息学解释,并有助于下一代测序技术的发展。这些发展提高了人们对下一代测序与DNA或RNA之间关系的研究的兴趣,具体取决于疾病。在本综述中,详细提及了下一代测序技术的过去和现在方法,并审查了这些方法的困难和便利性。