摘要。超声微泡与 microRNA (miRNAs/miRs) 结合在癌症治疗中表现出良好的效果。目的是研究 miR-378 在肝癌细胞中的作用及其与超声辐射和 SonoVue ® 微泡法结合用于细胞转染的效率。仅使用 Lipofectamine ® 3000 或结合 SonoVue 微泡和 0.5 W/cm 2 超声辐射 30 秒将 miR-378 模拟物转染到 HuH-7、Hep3B 和 SK-Hep1 细胞中。分别通过逆转录定量 PCR 和蛋白质印迹法检测 Cyclin D1、Bcl-2、Bax、Akt、p53 和 Survivin 的 mRNA 和蛋白质水平。采用Cell Counting Kit-8、细胞双重细胞化学染色和流式细胞术分别检测细胞存活率、增殖、细胞周期和凋亡。研究发现,使用超声辐照和SonoVue微泡方法相结合可以增加miR-378转染肝细胞癌(HCC)细胞的有效性,并增加对细胞存活和增殖的抑制。此外,通过应用联合方法,miR-378在HCC细胞系中更有效地增加了细胞凋亡率,上调了Bax和p53的表达,抑制了细胞周期,下调了Cyclin D1、Bcl-2、Akt、β-catenin和Survivin的表达。因此,miR-378被证明是降低HCC细胞增殖和增加细胞凋亡的抑制因子。此外,超声辐照和SonoVue微泡方法相结合在miRNA的转染方面更有效。
方法:此校准方法已被设计为易于重现和优化,从而减少了所需的时间和成本。它是基于原始设置,其中包括使用浓度分离器来测量从时间强度曲线(AUC)下从面积(AUC)获得的谐波信号强度的变化作为各种对比剂浓度的函数。分离器提供了4种不同的浓度,同时从Sonovue™对比剂的初始浓度的12.5至100%不等(Bracco Imaging S.P.A.,米兰,意大利),在单个注射中测量4个AUC。AUC的图作为四个对比剂浓度的函数表示谐波信号的强度变化:斜率是校准参数。通过这种方法的标准化暗示,两代超声扫描仪都必须具有相同的斜率为校准。此方法已在同一制造商(Aplio500™,Aplioi900™,佳能医疗系统,日本东京)的两个超声扫描仪上进行了测试。APLIO500™使用了最初的多中心DCE-US研究定义的设置。已经调整了Aplioi900™的机械索引(MI)和颜色增益(CG),以匹配Aplio500™的颜色。根据测量可重复性评估了新设置的可靠性,一旦对两个超声扫描仪进行校准,获得的测量值之间的一致性可重复性。