预印本(未经同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此版本的版权所有者于 2020 年 9 月 24 日发布。;https://doi.org/10.1101/2020.09.23.310839 doi:bioRxiv 预印本
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尽管CRISPR-Cas9技术在大豆遗传改良中得到了迅速应用,但是由于经典的PAM(protospacer vicinity motif)的限制,很难实现大豆复杂基因组中特定位点的靶向编辑。本研究开发了一种由SpRY介导的无PAM大豆基因组编辑系统。通过对大豆代表性农艺性状目标进行靶向编辑并评估结果,证明SpRY蛋白可以在大豆的宽松PAM位点实现高效的靶向诱变。此外,基于SpRY的胞嘧啶碱基编辑器SpRY-hA3A和腺嘌呤碱基编辑器SpRY-ABE8e均能分别精准地诱导大豆C到T和A到G的转换。因此,我们的数据表明SpRY工具箱可以以无PAM的方式编辑大豆基因组序列,突破了大豆基因组编辑技术系统中限制性的PAM障碍。更重要的是,我们的研究丰富了大豆基因组编辑工具,对大豆育种中的精准编辑和分子设计具有重要的实际应用价值。
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图 1. 开发腺嘌呤碱基编辑来纠正 SMN2 外显子 7 C6T。a、未受影响个体和脊髓性肌萎缩症 (SMA) 患者的 SMN1 和 SMN2 示意图。SMN1 中的突变会导致 SMA,因为 SMN 蛋白会消耗,而这可以通过编辑 SMN2 来恢复。b、与 SMN1 相比,SMN2 外显子 7 C 到 T (C6T) 多态性的示意图,其中有碱基编辑器 gRNA 靶位及其估计的编辑窗口。cd、当使用由腺嘌呤脱氨酶结构域 ABEmax 33,38、ABE8.20m 35 和 ABE8e 36 与野生型 SpCas9(面板 c)或 SpRY 37(面板 d)融合的 ABE 时,对 SMN2 C6T 靶向腺嘌呤和其他旁观者碱基进行 A-to-G 编辑,通过靶向测序进行评估。 e,使用 SpRY 或其他宽松 SpCas9 PAM 变体 43 对 SMN2 外显子 7 中的腺嘌呤进行 A 到 G 编辑,通过靶向测序进行评估。图 ce 中的数据来自 HEK 293T 细胞中的实验;n = 3 个独立生物学重复的平均值、sem 和单个数据点。
phlebopus ententosus(berk。和broome)Boedijn是一种有吸引力的食用蘑菇,被认为是实现人工栽培的唯一bolete。基因表达分析已广泛用于可食用真菌的研究中,对于阐明与复杂生物学过程有关的基因的功能很重要。选择适当的参考基因对于确保可靠的RT – QPCR基因表达分析至关重要。在我们的研究中,从25个传统家政基因中选择了12个候选对照基因,这些基因基于其表达稳定性在3个发育阶段的9个转录组中。在不同条件和发育阶段,使用Genorm,Normfinder和Reffinder进一步评估了这些基因。结果表明,含MSF1结构域的蛋白(MSF1),突触动蛋白(SYB),有丝分裂原激活的促蛋白激酶基因(MAPK),TATA结合蛋白1(TBP1)(TBP1)和Spry ronain Protin(SPRY)是所有样品的参考基因,而El ef ef ef ef ef efta和ef的最稳定。泛素结合酶(UBCE)是最不稳定的。基于转录组结果选择了基因SYB,并被鉴定为p中的新参考基因。pententosus。这是关于这种真菌中参考基因的鉴定的首次详细研究,可以为选择基因和量化基因表达提供新的见解。
1。摘要2。简介3。经典基因编辑工具4。精确编辑技术的开发4.1单基础编辑器4.2 Prime Editor 4.3双基本编辑技术5。转座子类编辑工具5.1集成5.2铸造6。开发新基因编辑工具6.1 SGN(结构引导的内切酶)6.2 MAD7 6.3 CRISPR-CASφ6.4 SPG和SPRY 7。的挑战和未来观点7.1不同的基因编辑工具存在很高的脱离目标问题,例如提高编辑效率7.2如何实现转座基因编辑工具的应用,例如在动物和工厂中进行整合和铸造7.3如何扩大编辑工具的编辑工具7.4如何启动编辑效率7.5启动eDing of new of ewnely eDITER 7. 5 eN.7 eNEDEN 7.是否能够启动eDing ofer ewnely eDITER,是否可以启动eDing eDITER的copecyme,以启动编辑工具,是否可以启动编辑工具,以启动编辑工具,是否可以启动编辑工具,是否可以启动编辑工具,是否可以启动编辑工具。各个国家逐渐在完全科学监督的前提下逐渐发布基因编辑的应用,以提高国民生活的质量8。作者贡献9。道德批准并同意参加10。确认11。资金12。利益冲突13。参考
基于 CRISPR/Cas9 的碱基编辑工具可实现精确的基因组安装,并为基因治疗带来巨大希望,而 Cas9 核酸酶的大尺寸、其对特定原间隔区相邻基序 (PAM) 序列的可靠性以及靶位偏好限制了碱基编辑工具的广泛应用。在这里,我们通过将胞嘧啶脱氨酶与来自 Streptococcus_gordonii_str._Challis_substr._CH1 (ancSgo-BE4) 和 Streptococcus_thermophilus_LMG_18311 (ancSth1a-BE4) 的两个紧凑的密码子优化的 Cas9 直系同源物融合来生成两个胞嘧啶碱基编辑器 (CBE),它们比化脓性链球菌 (SpCas9) 小得多,分别识别 NNAAAG 和 NHGYRAA PAM 序列。这两种 CBE 在胞嘧啶碱基编辑中都表现出高活性、高保真度、不同的编辑窗口和低副产物,并且在哺乳动物细胞中 DNA 和 RNA 脱靶活性极小。此外,在我们测试的靶位点上,这两种编辑器都表现出与两种基于 SpCas9 工程变体(SpCas9-NG 和 SpRY)的 CBE 相当或更高的编辑效率,它们与 ancSgo-BE4 或 ancSth1a-BE4 的 PAM 序列完美匹配。此外,我们通过 ancSgo-BE4 和 ancSth1a-BE4 成功生成了两种在 Ar 基因处带有临床相关突变的小鼠模型,它们在创始小鼠中表现出雄激素不敏感综合征和/或发育致死性。因此,这两种新型 CBE 拓宽了碱基编辑工具包,分别扩大了靶向范围和窗口,以实现有效的基因修饰和应用。
摘要:由于其独特的结构和功能功能,纳米材料被广泛投资于广泛的工业领域的潜在应用。在这种情况下,鉴于蛋白质的丰度,无毒和稳定性,基于蛋白质的纳米颗粒为封装和保护提供了一种有希望的可持续方法,并且可以用于工程的纳米载体中,这些纳米载体能够按需释放活跃的化合物。Zein是一种从玉米中提取的植物蛋白,它具有生物相容性,可生物降解和两亲性。目前有几种方法和技术参与基于Zein的纳米颗粒制备,例如反应降水,喷雾干燥,超临界过程,共凝聚和乳液程序。由于其特殊的特征,基于Zein的纳米颗粒被广泛用作靶向应用领域的活性化合物的纳米载体,例如药物输送,生物成像或软组织工程,如其他人所报道。这篇综述的主要目的是调查基于Zein的纳米载体在不同的高级应用中的使用,包括食品/食品包装,化妆品和农业,这吸引了研究人员的努力,并利用Zein NP在文化遗产领域的未来潜在发展,这仍然是相对未探索的。此外,提出的概述着重于几种制备方法(即反溶剂过程,Spry Drying),将不同的分析方法与NPS的结构和功能特性相关联,及其能够作为生物活性化合物的载体,以保存其活性并在特定的工作条件下释放。
LEADERSHIP TEAM SPECIALIST TEACHERS Principal Christine Comas Art Helen Williams Deputy Principal Susanne Harding Auslan Mary Mellon APRIM Rose Valenti Music Jasmine Lim Physical Education Michael Woods TEACHING STAFF Reception Unit EDUCATION SUPPORT OFFICERS RDM Vanessa Dibbens Business Manager Luke Healey Sophie Melingakos Receptionist Nadia Udina RP Stephanie Patching Enrolment Registrar Mandy Goodfellow RT Coreen泰勒薪资官纳塔莉·汤普金斯(Natalie Tompkins)RV纳塔莎·沃克利斯(Natasha 1S Rachel Spry Peter Pudney Reine Bolding Jasmine Jenkins Year 2 Unit Felicia Tsialafos 2D Giselle De Klerk Jenushair Fernando 2I Maria Iannotti Rina Willmore 2M Marnie Moss Alice Harding 2SW Sue Schmick Lauren Howse Helen Williams Stella Ross Network Technician Andrew Nielsen Year 3 Unit Alex Klajn 3B Tessa Bahr Groundsman Jason Bielak 3G Dylan George WHS Michele Dick 3J Jasmina Jukic Canteen Nives Grgic 3RM Gina Robb Sustainability Officer Peter Kuerschner Wayne Martin Chaplain Lisa Foti OSHC Director Stephen Clark Year 4 Unit School Nurse Emma Kondrat 4G Linda Gentilcore Counsellor Ruby Lai 4Ma Melanie Maguire 4Mi Daniel Milford