特应性皮炎(AD)是一种皮肤炎症性疾病,其中机会性病原体金黄色葡萄球菌既普遍又丰富。S.金黄色葡萄球菌具有几种分泌的毒力因子,这些因子在感染模型中具有良好的功能,但尚不清楚这些细胞外微生物因子是否在AD的背景下是否相关。为了解决这个问题,我们设计了一种与文化无关的方法来检测和量化在皮肤部位表达的金黄色葡萄球菌毒力因子。我们利用rnase-h - 依赖性多重PCR进行了从胶带中提取的反转录的RNA的前透明化,这些RNA从具有不同严重程度的皮肤部位采样的患者的胶带条中提取,并评估了使用qPCR使用QPCR的S. aureus毒力因子的表达。我们观察到疾病严重程度增加的位点可行的金黄色葡萄球菌丰度增加,并且在AD皮肤部位表达了许多毒力因子。令人惊讶的是,与非静电对照相比,我们没有观察到病变部位的毒力因子的任何显着性。总体而言,我们利用了一个可靠的测定法直接检测和量化AD皮肤病变部位的可行金黄色葡萄球菌及其相关的毒力因子。该方法可以扩展以研究各种皮肤病学部位的皮肤微生物基因的表达。
(未经同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者此版本于 2021 年 1 月 11 日发布。;https://doi.org/10.1101/2021.01.11.426237 doi:bioRxiv preprint
金黄色葡萄球菌中的染色体突变和靶基因缺失和失活通常使用等位基因交换方法产生。然而,近年来,已经开发出更快速的方法,通常使用基于 CRISPR - Cas9 的系统。在这里,我们描述了最近开发的用于金黄色葡萄球菌的基于 CRISPR - Cas9 的质粒系统,并讨论了它们在靶基因突变和失活中的用途。首先,我们描述如何将 CRISPR - Cas9 反选择策略与重组工程策略相结合以在金黄色葡萄球菌中产生基因缺失。然后我们引入死 Cas9 (dCas9) 和 Cas9 切口酶 (nCas9) 酶,并讨论如何使用与不同核苷脱氨酶融合的 nCas9 酶在靶基因中引入特定的碱基变化。然后,我们讨论如何通过引入提前终止密码子或突变起始密码子,使用 nCas9-脱氨酶融合酶来实现靶向基因失活。这些工具共同凸显了基于 CRISPR - Cas9 的方法在金黄色葡萄球菌基因组编辑中的强大功能和潜力。
金黄色葡萄球菌CAS 9(SACAS 9)是RNA引导的内核ASE,其靶向与原始探针相邻的互补DNA相邻的邻接基序(PAM)进行裂解。其小尺寸促进了体内递送的各种生物体基因组编辑。在此,使用单分子和集合方法,我们系统地研究了SACAS 9与DNA相互作用的基础机理。我们发现SACAS 9的DNA结合和裂解需要分别与指导RNA的PAM -Proximal DNA的6-和18 -bp。这些活性是由三元复合物之间的两个稳定的相互作用介导的,其中一种稳定的相互作用位于PAM的大约6 bp,而不是DNA上Sacas 9的明显足迹。值得注意的是,原始间隔物内部的另一个相互作用显着强,因此构成了DNA结合的SACAS 9持续块对DNA跟踪电动机。有趣的是,在裂解后,萨卡斯9自主释放了pAM-DESTAL DNA,同时保持与PAM的结合。这种部分DNA释放立即废除了其与原始探针DNA的强烈相互作用,因此促进了其随后与PAM的解离。总体而言,这些数据提供了对SACAS 9的动态理解,并指导其有效的应用。
•肺炎链球菌在全球范围内的鼻咽度占5-70%,是下气道感染的重要前体。•S。肺炎是5岁以下儿童的主要感染原因,是社区获得性细菌性肺炎的最常见原因。•当前的肺炎球菌疫苗靶向多达23种肺炎链球菌的血清型,但是,循环中有100多种血清型,并且在覆盖的血清型中只有60-70%的有效性,这仅提供部分保护。•金黄色葡萄球菌渐近地定居于20-30%的人口的前鼻孔,并与远处感染的风险增加,包括皮肤和软组织感染,心内膜炎,菌血症和肺炎。•目前没有用于金黄色葡萄球菌的疫苗,预防策略仅限于卫生和接触预防。•corynebacterium是气道中的共生细菌,与减少的金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌定殖以及促进更稳定的气道微生物组相关。•在这里,我们调查了Corynebacterium菌落化作为针对病原体感染的预防策略的潜力。
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可,根据 提供(未经同行评审认证)是作者/资助者,他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2023 年 7 月 15 日发布。;https://doi.org/10.1101/2022.10.31.514627 doi:bioRxiv 预印本
葡萄球菌物种是革兰氏阳性,非运动,非孢子球,大小不同,成对和不规则的簇中发生。殖民地不透明,可能是白色或奶油,偶尔是黄色或橙色。最佳生长温度为30°C-37°C。它们具有发酵的代谢,是兼性厌氧菌,除糖链球葡萄干和苏氏链球菌subsp.anaerobius外,它们最初在厌氧上生长,但可能会在亚培养物2上变得更加耐氧化。葡萄球菌种类通常是过氧化氢酶阳性的,氧化酶也为阴性,除S. sciuri组(S. sciuri,S。lentus和S. vitulinus)外,Fleuretti S. fleuretti和Macrococcus组已分配了3,4。这也是链球菌属的区别因子,链球菌是过氧化氢酶阴性的,并且与葡萄球菌具有不同的细胞壁组成。某些物种易于溶解蛋白裂解,但不能溶菌酶溶解,并且能够在6.5%的氯化钠中生长。一些物种产生细胞外毒素。葡萄球菌可能是
1莱布尼兹光子技术研究所(IPHT),莱布尼兹感染研究中心(LPI),07745德国耶拿,德国2号耶拿2感染遗传学研究校园,07743德国耶拿,德国耶拿,3 Hygiene, 1220 Vienna, Austria 5 Institute of Microbiology and Epizootics, Centre for Infection, Medicine School of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, 14163 Berlin, Germany 6 Veterinary Centre for Resistance Research (TZR), School of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, 14163 Berlin, Germany 7 Institute of Microbiology, University of Veterinary Medicine, 1210奥地利维也纳; igor.loncaric@vetmeduni.ac.at 8 Poultry Clinics and Laboratory Pöppel, 33129 Delbrück, Germany 9 Department of Pathology and Wildlife Disease, National Veterinary Institute (SVA), 75189 Uppsala, Sweden 10 Department of Biomedical Sciences and Veterinary Public Health, Swedish University of Agricultural Sciences (SLU), 75007 Uppsala,瑞典11细菌感染和人畜共患病研究所,弗里德里希·洛夫勒·伊斯蒂特(Friedrich-Loeffler-Institut)(联邦动物健康研究所),07743德国耶拿,德国12个物理化学研究所,弗里德里希·史基勒大学,弗里德里希·史基勒大学,德国jena,07743 jena,jena,jena,jena jena,jena jena jena * sosecence:soneceence:Steence:Steence:Steecectect CortezdeJäckel和Helmut Hotzel已退休。
1 弗朗斯维尔跨学科医学研究中心 (CIRMF),弗朗斯维尔 BP 769,加蓬 2 法国国家科学研究院,生物统计和进化生物学实验室 UMR5558,里昂第一大学,69622 维勒班,法国 3 LabEx ECOFECT,传染病生态进化动力学,里昂第一大学,69622 维勒班,法国 4 MIVEGEC 实验室,UMR-CNRS 5290-IRD 224,IRD 蒙彼利埃,34394 蒙彼利埃,法国 5 国家葡萄球菌参考中心,传染病研究所,Croix Rousse 医院,里昂民事临终关怀院,69004 里昂,法国 6 细菌学实验室,罗纳-阿尔卑斯分枝杆菌观测站,传染性病原体,临终关怀院,69004 里昂,法国 7 国际传染病学研究中心,INSERM U1111,CNRS UMR5308,里昂第一大学,里昂高等院校,里昂临终关怀院,69004 里昂,法国 * 通讯地址:genistha@hotmail.com (BN); dominique.pontier@univ-lyon1.fr (DP) † 这些作者对这项工作做出了同等贡献。
本研究旨在探索纯水蛭唾液及其与优色林的组合对感染金黄色葡萄球菌的伤口的影响。实验包括在动物胸部背部区域诱导伤口。为了感染伤口,将 100 µl 密度为 0.5 McFarland 的金黄色葡萄球菌细菌引入伤口部位。使用 75 只雄性 Wistar 大鼠,分成 5 组,每组 15 只,每组进一步细分为 3 个亚组:用呋喃西林(阳性对照)、水蛭唾液、水蛭唾液软膏、优色林软膏和阴性对照(未治疗)治疗。随后,在第 7、14 和 21 天从伤口部位采集样本,以量化细菌存在并评估伤口组织恢复情况。宏观观察显示,在 14 天内,水蛭唾液软膏和纯水蛭唾液均具有良好的伤口愈合能力。微生物分析证实了水蛭唾液及其软膏配方的抗菌功效。根据研究结果,可以合理地推断,水蛭唾液软膏和纯水蛭唾液在促进伤口愈合和促进皮肤上皮组织再生方面均表现出令人称赞的功效。