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SOP 准备细菌草坪培养物（2023 年 1 月）
• 个人防护装备：护目镜、实验服；防滑、无孔的封闭式鞋子。 • 70% v/v 乙醇 • 新鲜配制的 0.5-1% 漂白剂溶液。每组学生 1 个烧杯。 • 在营养肉汤（略微浑浊）中纯培养风险组 1 微生物，无菌制备或市售。这可以在带盖的试管或小螺旋盖瓶中。建议使用大肠杆菌 K-12 菌株或藤黄微球菌。 • 1 个无菌营养琼脂平板 • 1 根购买的无菌棉签棒或棉签，在带铝箔盖的烧杯中消毒。 • 本生灯 • 胶带或实验室密封膜（例如 Parafilm ® M） • 远离阳光且温度在室温（22-25°C）和最高 30°C 之间的培养箱或合适的培养区域。 • 纸巾
nuitiv™透明无针连接器微生物入口
将清晰的隔膜重复接种，并以适当的接种物进行接种，以产生每个测试生物的1-5 x 10 3 Cfus，并在环境条件下允许干燥1分钟。然后用圆形运动以不少于3秒的速度将SEPTA用70％的异丙醇（IPA）预备垫剧烈擦拭，并允许干燥。使用带有10 mL无菌盐水溶液的注射器激活该设备。流体，用100 mL无菌0.9％盐水溶液冲洗，然后转移到一盘TSA中。TSA板在30–35°C下孵育2-3天。重复该过程840次（每天120次激活，每次挑战生物有6种重复的激活，持续7天）。
使用核转染技术利用 RNP 对人类 iPS 细胞进行 CRISPR 编辑
• 建议戴上手套并使用无核酸酶试管和试剂以避免 RNase 污染。 • 始终保持无菌技术，并使用无菌过滤移液器吸头。 • 所有 EditCo 试剂应根据制造商的建议储存。 • 合成 sgRNA 应溶解在 TE 缓冲液中，并使用无核酸酶水稀释至工作浓度。请参阅 EditCo.com/resources 以查找与溶解和储存合成 sgRNA 相关的最佳实践。 • RNP 可直接在 Nucleofector™ 溶液中形成。 • RNP 复合物在室温下可稳定保存长达 1 小时（可在 4°C 下保存长达一周，或在 -20°C 下保存长达 1 个月）。请注意，在 4°C 下储存的 RNP 可能会在长时间后受到微生物生长的污染。
评论“ Chagas疾病药物开发中的转化挑战”
本综述中提出的一个重要点是，大多数药物发现组的目的是在将化合物发展到诊所之前在动物模型中实现无菌治疗。这是一个很高的障碍，大多数传染病都不需要。然而，在CD的不确定期和随之而来的发病机理中，少量寄生虫的长期持久性表明，这种化合物的临床成功可能性最高。化合物实现无菌治疗的内在能力取决于其行动方式。在我们的经验中，即使经过高复合浓度的长期处理，很少有行动模式能够在体外杀死所有寄生虫。我们将幸存者称为毅力，而基本的生物学研究正在进行，以更好地理解它们的本质。为了预测化合物（因此是行动方式）实现体内无菌治疗的能力，我们介绍了所有对体外冲洗生长生长测定的兴趣，其中长期处理细胞内寄生虫（长达16天），然后是两个月的生长期。如果在这两个月中未检测到寄生虫，我们认为这种体外无菌治疗。基于苯甲酸唑和postaconazole获得的数据，在该模型中实现“细胞固化”的能力是在慢性CD小鼠模型中具有完全疗效的先决条件（即，在三轮免疫抑制后，没有复发，没有复发）。除了正确的行动方式外，化合物还需要表现出适当的药代动力学。在这一领域仍有许多知识要获得许多知识。综述中指出的是，动物的锥虫感染动力学很复杂，涉及许多不同组织的（临时）感染。药物发现的挑战是开发到达到所有寄生虫储层的化合物，并维持足够长的高浓度，足以杀死所有寄生虫。要了解所需的分布特性，需要进一步研究实现无菌治疗的化合物的组织分布。重要的是，目标不是为小鼠开发药物，而是为人类开发药物。了解寄生虫动态和分布如何转化为人类患者状况是关键，但不容易实现。未来的最务实的选择是根据体外数据和动物研究将最佳化合物用于人类的临床试验。背面翻译的临床结果也有价值，这在某种程度上被苯甲酸唑和Nifurtimox的反应性本质所困扰，因此在药代动力学和药效动力学之间的潜在脱节，但尽管如此，它仍然使关键的见解引起了CYP51 Inbinibers Inbinibers Inbinibers Inbinibers Indybirors的关键见解。这些见解从根本上改变了CD药物发现的药物发现途径。
by-Step开发途径
与我们所有的菌株一样，遗传修饰的无菌雄性蚊子受到小笼子（30厘米x 30厘米）的评估，然后在英国和意大利的大型环境笼中（最高9.2m 3），在实验室中进行进一步的安全研究和风险评估，然后由该机构进行了bur de LaSuress de lafas echerche exo sco的进口，并在此之前进行了评估。由布基纳法索国家生物安全管理局（Agence deBiosécurité）（ANB）授予。该团队在包含的实验室中与转基因的无菌男性菌株合作了一年多，然后在2019年进行了小规模的受控现场释放，并在额外的许可下并接受了当地社区。马里疟疾研究培训中心（MRTC）的团队也已获得马里国家国家的使用许可
使用核转染技术利用 RNP 对人类 iPS 细胞进行 CRISPR 编辑
使用 RNA 和 RNP • 建议戴上手套并使用无核酸酶的试管和试剂，以避免 RNase 污染。 • 始终保持无菌技术，并使用无菌过滤移液器吸头。 • 所有 Synthego 和 Nucleofector™ 试剂均应根据制造商的建议储存。 • 合成的 sgRNA 应溶解在 TE 缓冲液中，并使用无核酸酶的水稀释至工作浓度。请参阅 Synthego 快速入门指南，了解溶解和储存合成 sgRNA 的最佳实践。 • RNP 可直接在 Nucleofector™ 溶液中形成。 • RNP 复合物在室温下可稳定保存长达 1 小时（可在 4°C 下保存长达一周，或在 -20°C 下保存长达 1 个月）。请注意，在 4°C 下储存的 RNP 长时间后可能会受到微生物生长的污染。
* 病毒鉴定和临床样本采集 & ...
心包积液、滑液 9. 表面标本-（皮肤、指甲、头发） 10. 伤口-（溃疡拭子） 11. 手术标本-（组织活检、脓肿） 鼻咽分泌物 1. 用无菌棉签通过鼻咽喉科的鼻腔收集标本。