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部分地下水调查 - 尤福拉湖 - 第 7 节 t7 n、r 15 e
2022 年 7 月 24 日 — 特此证明上述地图真实、正确地代表了测量情况。第 7 区，T7K15 E，俄克拉荷马州匹兹堡县。
使用基于 T7 RNAP 的随机 DNA 碱基编辑器进行除草剂抗性的合成进化
通过局部序列多样化和同时施加选择压力的合成定向进化是一种很有前途的方法，可用于产生影响不同物种感兴趣性状的新的有益等位基因；然而，这种技术很少应用于植物。在这里，我们设计、构建并测试了 T7 RNA 聚合酶 (RNAP) 和脱氨酶的嵌合融合物，以实现感兴趣的目标序列的局部序列多样化。我们在本氏烟瞬时测定中测试了我们的 T7 RNAP - DNA 碱基编辑器，以靶向在 T7 启动子控制下表达 GFP 的转基因，并观察到 C 到 T 的转换。然后，我们靶向已稳定整合到水稻基因组中的 T7 启动子驱动的乙酰乳酸合酶序列并产生 C 到 T 和 G 到 A 的转换。我们利用除草剂处理作为乙酰乳酸合酶序列进化的选择压力，导致除草剂反应残基的富集。然后我们在转基因水稻植物中验证了这些除草剂反应区域。因此，我们的系统可用于基因功能的持续合成进化，以产生具有改进的除草剂抗性的变体。
稳定表达 Cas9 和 T7 RNA 聚合酶的利什曼原虫 (Viannia) braziliensis 的有效基因组编辑
直到 2015 年，阐明利什曼原虫蛋白质功能的功能丧失研究都依赖于通过同源重组进行基因破坏。随后，CRISPR/Cas9 革命影响到了这些原生动物寄生虫，只需一轮转染即可实现有效的基因组编辑。此外，LeishGEdit 的开发（一种基于 PCR 的工具包，用于使用 CRISPR/Cas9 生成敲除和标记系）使基因组编辑更加直接有效。在此系统中，质粒 pTB007 被递送至利什曼原虫，在 b-微管蛋白基因座中进行游离表达或整合，并稳定表达 T7 RNA 聚合酶和 Cas9。在南美洲，尤其是在巴西，利什曼原虫 (Viannia) braziliensis 是皮肤利什曼病最常见的病原体。与利什曼原虫相比，L. braziliensis b-微管蛋白基因座表现出显著的序列差异，这阻碍了 pTB007 的有效整合和 Cas9 的稳定表达。为了克服这一限制，pTB007 中存在的 L. major b-微管蛋白序列被利什曼原虫 (Viannia) b-微管蛋白保守序列取代，从而产生了 pTB007_Viannia 质粒。这一修改使 pTB007_Viannia 盒式磁带成功整合到 L. braziliensis M2903 基因组中，并且计算机预测表明这也可以在其他 Viannia 物种中实现。通过敲除鞭毛蛋白 PF16 来评估 Cas9 的活性，这导致这些转染子中出现不动表型。内源性PF16也成功被mNeonGreen标记，并采用基因座互补策略将PF16基因的C端标记拷贝返回到原始基因座，从而恢复游泳能力。
方法，一种简单有效的方法，可在T7 RNA聚合酶转录的RNA的3 9个末端减少非伪装的核苷酸添加
在体外通过T7 RNA聚合酶在体外进行转录是最广泛使用的方法，用于生产用于多种应用的RNA，包括结构和生化研究以及潜在的治疗学（Mil- Liligan等，1987; Turek＆gold，1990; Symensma等，1996; Siegel et al +，1996; ity of the T7 polymerase products and necessitate the careful purification of the desired RNAs + These reac- tions include the synthesis of oligonucleotides aborted during the initiation of transcription (Martin et al +, 1988 ; Moroney & Piccirilli , 1991) , polymerase slippage (Mac- Donald et al +, 1993) , the use of alternative template initiation sites (Pleiss et al +, 1998; Krupp，1988） +以前，Moran等人（1996）证明了DNA模板
crispr/cas9介导的T7 RNA聚合酶基因敲除...
摘要欧洲传统的武器控制建筑正在崩溃。本文认为，经典的武器控制理论无法解释这一持续的过程。我建议，基于互惠和预防战争的技术措施，其潜在的稳定范式已经阻止了对实际的武器控制实践的全面了解，尤其是在欧洲。在这种情况下，我说明了有规律的武器控制已在三个历史阶段发展。在每种情况下，国家参与者都根据具体的地理战略状况来追求不同的理想类型目的：追求政治军事优势，正式创造危机稳定性以及国际关系的转变。在过去十年中，总体政治重点再次转移到了第一个因素。在新的战略竞争中，各州越来越不愿同意控制法规和透明度措施，因为这些措施可能会给对手带来优势。
新英格兰Biolabs分析证书
NEB为许多蛋白质表达应用提供了多种胜任的细胞菌株。这些菌株解决了蛋白质表达控制，有毒蛋白表达，细胞质二硫键形成，困难靶标和晶体学的需求。NEB T7 Express和Shuffle™菌株具有不同的控制水平。i Q菌株具有LACI Q对IPTG诱导的非T7质粒表达的附加控制。只有NEB提供了从乳糖基因中对表达的特殊控制，从而在不抑制IPTG诱导的表达的情况下降低了T7菌株的基础表达。我们的LEMO21（DE3）菌株具有可调T7表达的困难靶标，例如膜蛋白和容易发生表达的蛋白质（有关更多详细信息，请参见相反的特征）。为每个应变提供了一个详细协议，以进行最佳表达。
CRISPR 与基于标记的方法的比较......
摘要：随着近年来人们对使用溶菌噬菌体作为治疗剂的兴趣日益浓厚，迫切需要了解它们的基本生物学，以便对其基因组进行工程改造。目前的噬菌体工程方法依赖于同源重组，然后通过选择系统来识别重组噬菌体。对于 T7 噬菌体，宿主基因 cmk 或 trxA 已被用作选择机制，以及 I 型和 II 型 CRISPR 系统，以对抗野生型噬菌体并富集所需的突变体。在这里，我们系统地比较了这三个系统；我们表明使用基于标记的选择是最有效的方法，我们使用这种方法来生成多个 T7 尾纤维突变体。此外，我们发现在噬菌体 T7 的工程改造中，II 型 CRISPR-Cas 系统比 I 型系统更易于使用，并且通常更有效。这些结果为未来更有效地改造噬菌体 T7 奠定了基础。
用于癫痫治疗的双靶向纳米粒子
然而，目前用于递送抗癫痫药物的纳米载体报道很少，且大多数是单靶向纳米载体，仍会产生副作用。近年来，微流控技术在许多生物医学领域发挥着重要作用。20 – 22 特别是微流控芯片可以很容易地合成尺寸均匀且小的纳米颗粒，23 – 26 为制备纳米药物提供了平台。在此，我们提出了一种双靶向纳米载体系统将拉莫三嗪 (LTG) 递送至患病神经元以治疗癫痫。LTG 是临床上的一线抗癫痫药物。4,27 然而，它在水中的溶解度低，容易在肝脏中代谢。因此，需要高剂量或重复给药才能达到治疗浓度，28,29 但可能会引起恶心、头痛、视力模糊、头晕和共济失调等副作用。为了优化 LTG 的药理作用并尽量减少其副作用，双靶向纳米载体系统具有两个组分：（i）D 型 T7 (D-T7) 肽，T7 肽的逆向序列，与转铁蛋白 (Tf) 受体（BBB 的主要成分）显示出高结合力，可有效引导药物输送到中枢神经系统 (CNS)，30 – 35 被设计用于靶向 BBB。（ii）Tet1 肽，它可以特异性地与神经元表面高表达的鞘磷脂和神经节苷脂 (G T1b 受体) 结合。 36 – 39 尽管已有报道称 T7 肽、D-T7 肽和 Tet1 肽能够靶向各自的靶点，以及 T7 肽和 Tet1 肽的组合能够治疗阿尔茨海默病，但尚未尝试将 D-T7 肽和 Tet1 肽组合靶向中枢神经系统 (CNS)。D-T7 肽对 Tf 受体的结合力比 T7 肽更高，因此需要探索 D-T7 肽和 Tet1 肽组合靶向中枢神经系统的效果。32,33,38,39 我们在两步微流体芯片上合成了一种双靶向递送系统，该系统已被
使用卷积子连续的多重噬菌体基因组编辑
170 171图1。临时性靶标基因组靶标基因组进行连续编辑a。 ICOMBIBRON示意图：A 172修饰的反龙生成ssDNA，该ssDNA包含供体序列，其与173个噬菌体基因组具有同源性的编辑序列，该基因组在SSB和SSAP复制过程中整合到噬菌体基因组中。RERON 174盒子是从包含逆转录酶（RT）和NCRNA的操纵子表达的。NCRNA的反向175个抄录区域以紫色显示为浅蓝色的供体序列，176编辑位点以橙色显示。第二个操纵子表示Csprect和mutl E32K。b。左：跨lambda噬菌体编辑的噬菌体177基因组（作为所有基因组的百分比）。用正向RT-DNA进行编辑以蓝色显示，紫色为178。在每个点的空心圆中显示三个单独的重复。右：使用179的编辑位点14,126（±SD）的重稳定物明显大于DRT对照的编辑（t检验，180 P = 0.0018）。c。左：在噬菌体T7上编辑的噬菌体基因组在每个位置进行了三个重复，在b中显示181。右：用现场22,872（±SD）的重稳定子进行编辑明显大于使用182 DRT对照的编辑（t检验，p = 0.0094）。d。左：在噬菌体T5上编辑的噬菌体基因组在每个183个位置上进行了三个重复，如b所示。右：用现场27,182（±SD）的重稳定子进行编辑显着高于使用DRT对照的编辑（t检验，p <0.0001）。e。位点30,840（f）（±SD）的Lambda的编辑与185张（±SD）与大肠杆菌SSB或T7 SSB的补充表达进行了比较。SSB 186表达（单向方差分析，p <0.0001，n = 3），大肠杆菌（p = 0.005）和T7（p = <0.0001）187均显着不同，与NO NO SSB条件显着不同（Dunnett's，校正）。f。与大肠杆菌SSB或T7 SSB的补充表达相比，位点11,160（R）188（±SD）的T7编辑。SSB表达（单向方差分析，p <0.0001，n = 3）具有显着的效应，大肠杆菌（P = 0.0002）和T7 190（p = 0.0127）均显着不同，与NO SSB条件显着不同（Dunnett's，更正）。g。示意图说明191编辑噬菌体的积累，并进行了多轮编辑。h。编辑的Lambda Phage的比例192