ID号 5200100帽颜色红色含量2 x 1.25 ml密钥特征TAQ DNA聚合酶2X主混合物是一种现成的2X反应混合物,与AmpliQON TAQ DNA聚合酶,NH 4 +缓冲液系统,DNTPS,DNTPS和氯化镁存在。 每个反应需要25 µL 2倍主混合物。 只需将底漆,模板和水添加到50 µL的总反应量中,即可成功执行底漆延伸和其他分子生物学应用。 TAQ DNA聚合酶2X主混合物提供了几个优点。 设置时间大大减少。 消除了污染组件股票的机会。 减少试剂处理步骤可更好地可重复性。 可以信心设置标准测试,即结果每次都会保持一致。 TAQ DNA聚合酶2x主混合物(1.5 mm MGCL 2最终浓度)的组成Tris-HCl pH 8.5,(NH 4)2 S0 4,3 mm mgcl 2,0.2%tween。ID号5200100帽颜色红色含量2 x 1.25 ml密钥特征TAQ DNA聚合酶2X主混合物是一种现成的2X反应混合物,与AmpliQON TAQ DNA聚合酶,NH 4 +缓冲液系统,DNTPS,DNTPS和氯化镁存在。每个反应需要25 µL 2倍主混合物。只需将底漆,模板和水添加到50 µL的总反应量中,即可成功执行底漆延伸和其他分子生物学应用。TAQ DNA聚合酶2X主混合物提供了几个优点。设置时间大大减少。消除了污染组件股票的机会。减少试剂处理步骤可更好地可重复性。可以信心设置标准测试,即结果每次都会保持一致。TAQ DNA聚合酶2x主混合物(1.5 mm MGCL 2最终浓度)的组成Tris-HCl pH 8.5,(NH 4)2 S0 4,3 mm mgcl 2,0.2%tween。
聚合酶链反应(PCR)是一种强大而敏感的DNA扩增技术(1)。TAQ DNA聚合酶是PCR广泛使用的酶(2)。提供了以下准则,以确保使用新英格兰的成功PCR
聚合酶链式反应 (PCR) 是一种功能强大且灵敏的 DNA 扩增技术 (1)。Taq DNA 聚合酶是一种广泛用于 PCR 的酶 (2)。以下指南旨在确保使用新英格兰
TAQ DNA聚合酶是一种衍生自含水型菌群的重组DNA聚合物的DNA。其分子量为94 kDa。TAQ DNA聚合酶可以将靶DNA扩大到5KB(简单模具)。扩展速度为0.9〜1.2kb/min(70〜75 o C)。它具有5'至3'的活性,没有3'活性到5'外切酶,而没有导致含有3'-da末端的PCR产物。
注意:主混合物应在指定的“洁净室”区域制备,并且切勿将提取液/模板带入“洁净室”。主混合物制备完成后,在制备主混合物的洁净罩中,或在打开 DNA/RNA 模板(脏)罩中的 DNA 模板(提取的样本)之前,向每个 PCR 反应管中添加 20 或 45 或 90μl 主混合物。
图3。MGCL₂,KCL和TMAC对在60°C的延长温度下在靶标的90%放大的影响。使用Platinum II TAQ热启动DNA聚合酶在Proflex PCR系统上从金黄色葡萄球菌中扩增了富含的目标序列。每个20 µL反应包含10 ng的金黄色葡萄球菌和其他(a)1、1.5、2或2.5 mmmgcl₂,(b)30、50、70或90 mm kcl或(c)50、70、70、90、90、90、90或110 mm tmac。热循环条件:94°C时2分钟;在94°C,最佳退火温度下15秒的15秒循环(表4),在60°C下为30秒/kb。PCR产品以2%E-Gel 48含Sybr安全染色的琼脂糖凝胶运行。车道M:E-GEL 1 KB Plus Express DNA梯子。
1。在密歇根州立大学的研究技术支持机构(RTSF)上进行了二级扩增和NGS。将每种纯化的原代PCR产物的20μL等分试样送到MSU的RTSF基因组核心,以用于临时PCR扩增,该引物针对主要PCR产物的CS1/CS2末端,并添加了双重索引,具有双重指标的,光明的,光明的兼容型适配器与酒吧尺度。
蛋白质的来源:从大肠杆菌的菌株中纯化,该菌株过表达了噬菌体T4的基因32蛋白。分子量:33,506 Daltons质量控制分析:使用带有单链,荧光标记的寡核苷酸标记的凝胶移位测定法测量了单链DNA的DNA结合。Serial dilutions of the enzyme were made in 1X T4 GP32 reaction buffer(50mM Potassium Acetate, 20mM Tris Acetate, 10mM Magnesium Acetate, 1mM DTT pH 7.9) and added to 10 µL reactions containing a 5'-FAM labeled oligonucleotide substrate, and 1X T4 GP32 Reaction Buffer.在37°C下孵育20分钟,将其浸入冰上,并在15%的TBE-TEREA凝胶上耗尽。DNA结合能力被视为在TBE-rea凝胶上寡核苷酸的表观分子量中的带移。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。物理纯度,然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。
分子诊断(MDX)应用的许多进步是建立在新型酶的工程上的,这些酶允许访问以前无法捕获的信息。为了满足对高度功能和专用的酶促工具的不断发展的需求,我们利用了酶工程平台的组合,包括专有平台,该平台使我们能够选择具有基因组学和分子诊断应用的功能。我们的平台可以使多种DNA和RNA修改的酶进行工程,这些酶利用大规模的,无假设的文库作为选择输入,以增强酶活性和/或引入新型活动。我们介绍了有关逆转录酶(RT)和TAQ DNA聚合酶(TAQ DNAP)的工程工作的数据 - 两种通常用于检测患者样品中的RNA和/或DNA病毒的酶以进行护理点(POC)诊断。我们的屏幕确定了RT变体,具有增加的热稳定性和对抑制剂和TAQ DNAP变体的耐受性,对抑制剂的速度和耐受性提高。
图3。准备和使用病毒载体在靶细胞中重组蛋白表达。(1)包装细胞(例如HEK293)用编码感兴趣基因和必要病毒蛋白的三个或四个质粒转染。(2)将病毒组装在包装细胞中,然后收获和纯化。(3)该病毒用于转导靶细胞,释放感兴趣的基因。(4)在此示例中,将慢病毒载体的RNA反向转录为DNA,将DNA整合到宿主基因组中以进行重组蛋白表达。